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1、体外诊断试剂分析体外诊断试剂分析性能性能评估评估 线性范线性范围围事业发展部-刘会娟一、概述二、定义三、研究时间四、线性范围评估的基本原则五、线性范围的评估及数据处理方法一、概述 线性范围评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一。二、定义线性范围：是某一方法的校准曲线的直线部分所对应的待测物质的浓度（或量）的变化范围。 三、研究时间 精密度评估完成后，确保试剂精密度达到要求。 因为在进行线性判断的同时，须判断精密度是否符合要求。要求测量数据具有较高的测量精密度，否则会降低统计功效(低功效的统计不能得出正确的线性判断)。四、线性范围评估的基本原则线性范围线性范
2、围检测限检测限（1）实验操作人员应熟悉方法原理与操作，能对样本进行正确处理，确保仪器工作状态正常，采用适当的校准品对仪器进行校准。 （2）仪器的各项性能指标（如精密度）应与标称值相符，不存在明显的携带污染等。（3）应使用同批号试剂及校准品。（1）实验人员应熟悉检测方法与仪器操作；（2）采用合适的校准品、质控品并保持仪器处于正常状态；（3）用 于实验的试剂应为同一批号，且在有效期内。五、线性范围的评估及数据处理方法1.实验样本的基本要求和制备方法2.实验过程3.数据处理4.结果报告1.1实验样本的基本要求（1）样本基质应与临床实验样本相似，但不可采用含有对测定方法具有明确干扰作用物质的样本，如溶
3、血、脂血、黄疸或含有某些特定药物的样本。进行血清学标志物检测时，理想的样本为分析物浓度接近预期测定上限的混合人血清。（2）建立一种定量测定方法的线性范围时，需在预期测定范围内选择7-11个浓度水平。如将预期测定范围加宽至130%，在此范围内选择更多的浓度水平，然后依据实验结果逐渐减少数据点直至表现出线性关系，可发现最宽的线性范围。（3）当对标称线性参数进行验证时，需在已知线性范围内选择5-7个浓度水平。（4）无论是建立或验证线性范围，所选用的浓度水平应可覆盖整个预期测定范围并包括与临床有关的重要评价浓度，如最小测定浓度或线性范围的最低限、不同的医学决定水平、最大测定浓度或线性范围的高限等。样本
4、选择样本选择 EP6一A中建议应尽可能按以下顺序进行样本种类的选择：病人混合血清；用适当稀释液稀释的病人血清；添加分析物的病人样本；用处理过的低浓度物质或处理过的血清物质稀释的病人血清；商业质控品，校准品线性物质；使用生理盐水稀释的样本；稀释不足或过度稀释的商业质控品；水溶液；其他溶剂的溶液。医学医学决定决定水平水平 指在诊断及治疗工作时，对疾病诊断或治疗起关键作用的某一被测成分的浓度，临床上必须采取措施的检测水平。例（仅供参考）：例（仅供参考）：白细胞计数白细胞计数 参考值（410）109/L 决定水平临床意义及措施 0.5109/L低于此值，病人有高度易感染性，应采取相应的预防性治疗及预防
5、感染措施。 3109/L低于此值为白细胞减少症，应再作其他试验，如白细胞分类计数、观察外周血涂片等，并应询问用药史。 11109/L高于此值为白细胞增多，此时作白细胞分类计数有助于分析病因和分型，如果需要应查找感染源。 30109/L高于此值，提示可能为白血病，应进行白细胞分类，观察外周血涂片和进行骨髓检查。 1.2实验样本的制备方法（1）不同浓度水平的样本可通过将高浓度样本与低浓度样本进行倍比稀释得到，注意在进行液体吸取时应选择精密度与准确性好的移液装置。制备时应将样本完全混合并避免蒸发或其他使样本变质的情况。每份样本的浓度与体积单位应统一。（2）如果高/低浓度血清的值未知，可将每种血清编码
6、，用编码代表每个血清的相对浓度。对于等浓度间隔样本，可用连续整数（如1、2、3、4、5）代表连续样本。进行数据处理时可用样本号代替X值。（3）样本的特殊处理：在无法得到适用的人血清时，需对样本进行一些特殊处理以满足实验要求。这些处理过程包括稀释、加入添加物或透析、热处理等，无论进行何种处理均应以保持基质恒定为基本原则。在评价报告中应对所使用的稀释液、添加物、溶剂等的材料来源加以注明。样本稀释液应选用由厂家推荐或经实验室证明可使用的产品，如可采用5%牛血清白蛋白或人白蛋白溶液。欲提高样本浓度时可在样本中添加分析物纯品。在添加物为溶液状态时，应注意添加液体对样本的稀释作用（小于10%）并注明所用溶
7、剂。2.实验过程（1）建立线性范围：需测定9-11个浓度水平，每个浓度水平重复测定3-4次。（2）验证标称线性参数：需测定5-7个浓度水平，每个浓度水平重复测定3-4次。（3）所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定，最好在一天之内完成。3.数据处理1、数据记录（线性评价数据记录表）2、数据可用性检查（散点图）3 、剔除离群值（散点图、格拉布斯（GRUBBS）法）4、进行多项回归分析5、对回归方程进行线性检验（比较t值法检验方程的系数与零的差异，若证明数据组具线性则跳至7，否则进入6、7）6、临床标准的线性与非线性检验（比较ADL值法，如ADL小于所要求的临界判断值，则可认为数据组具有临床可接受的线性，所拟合出的最适非线性多项式无临床意义。）7、对数据组进行精密度检验4.结果报告 线性范围报告的具体格式不要求，但至少应包括以下几方面：（1）进行线性评价的实验室或生产厂家名称。（2）被评价的方法或试剂名称，批号。（3）测定项目。（4）线性范围（如为二阶线性应包括临床允许误差）。（5）如可能应标出测定项目的医学决定水平及在此水平处的临床允许误差。
