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1、动物细胞工程动物细胞工程动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术核移植核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术细胞工程考纲细胞工程考纲知识内容知识内容要求要求42克隆技术克隆技术(1)植物的组织培养植物的组织培养(2)动物的细胞培养与体细胞克隆动物的细胞培养与体细胞克隆(3)细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体I要求备注：要求备注：I I：对所列知识点要知道其含义，能够在试题所给予的相对简单的情境中识别和使用它：对所列知识点要知道其含义，能够在试题所给予的相对简单的情境中识别和使用它们。们。：理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别，并能在较复杂
2、的情境中综合运：理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别，并能在较复杂的情境中综合运用其进行分析、判断、推理和评价。用其进行分析、判断、推理和评价。内容内容说明明（1）动）动物的细胞物的细胞培养与体培养与体细胞克隆细胞克隆A简述动物细胞培养的过程、条件及其简述动物细胞培养的过程、条件及其应用应用B简述克隆动物的概念和原理简述克隆动物的概念和原理C简述体细胞核移植技术和体细胞克隆简述体细胞核移植技术和体细胞克隆及其应用前景，关注体细胞克隆技术的安及其应用前景，关注体细胞克隆技术的安全性和伦理性问题全性和伦理性问题（2）细）细胞融合与胞融合与单克隆抗单克隆抗体体A简述动物细胞融合的方法和过程简述
3、动物细胞融合的方法和过程B说出单克隆抗体的制备过程及其应用说出单克隆抗体的制备过程及其应用C认同细胞学基础理论研究与技术开发认同细胞学基础理论研究与技术开发之间的关系之间的关系D关注细胞工程研究的发展和应用前景。关注细胞工程研究的发展和应用前景。考点解读考点解读v动物细胞培养与体细胞克隆动物细胞培养与体细胞克隆要注意注意要注意注意原理、步骤、方法，原理、步骤、方法，v细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体要注意与必修整要注意与必修整合（细胞结构、遗传、合（细胞结构、遗传、免疫免疫等），注意技术等），注意技术步骤步骤 皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只
4、要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体（异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其（异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施，程中为保护创面而采取的措施，10101414天后就要天后就要被身体排斥。
5、被身体排斥。 如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤？取该患者的皮肤进行细胞培养取该患者的皮肤进行细胞培养, ,获得足量的细胞后再移植获得足量的细胞后再移植动物细胞培养请同学们阅读课本后，简述动物请同学们阅读课本后，简述动物细胞培养的基本过程？细胞培养的基本过程？1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？的吗？、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？的吗？、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？细胞的呢？没
6、有没有是是成块的组织细胞靠在一起成块的组织细胞靠在一起, ,彼此限制了细胞的彼此限制了细胞的生长和增殖生长和增殖（分散成单个细胞、细胞群（分散成单个细胞、细胞群( (团）后容易培养，细胞所需的营团）后容易培养，细胞所需的营养容易供应，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养时，内养容易供应，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因此，这些细部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因此，这些细胞在体外长时间的生存和生长就较困难。）胞在体外长时间的生存和生长就较困难。）、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是
7、什么成份？细胞间的物质是什么成份？胰蛋白酶水解蛋白质胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质细胞间的成份是蛋白质先用剪刀剪碎先用剪刀剪碎, ,后用蛋白酶处理后用蛋白酶处理、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？6、用胃蛋白酶行吗？为什么？、用胃蛋白酶行吗？为什么？不行。因为多数动物细胞培养的适宜不行。因为多数动物细胞培养的适宜pHpH为为7.27.47.27.4，胃蛋白酶在此环境中没有活，胃蛋白酶在此环境中没有活性。性。7、细胞膜的主要成份是什么？、细胞膜的主要成份是什么？8、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？9、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那
8、将动物、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂能能注意时间的控制注意时间的控制、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。易培养。11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？毒？12、培养瓶中的细胞培养到什
9、么时候就不再、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？分裂、增殖？13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？应该怎样办？易于培养细胞贴壁，进行生长增殖易于培养细胞贴壁，进行生长增殖当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。接触抑制。将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。后继续增殖。这样的过程叫做传代培养这样的过程叫做传代培养14、如何理解原代培养和传代培养？、如何理解原代培养和传代培养？
10、原代培养原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。（代细胞。（分装前的细胞培养分装前的细胞培养）传代培养传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。瓶中继续培养，称为传代培养。（在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养移到其它培养瓶中培养就是传代培养）15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？、传代培养的细胞能一直传代下去吗？不都能不都能保存保存1010代以内的细
11、胞，因为代以内的细胞，因为传至传至10105050代时代时部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展分还发生突变向癌细胞方向发展18、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？吗？发生突变，朝着癌细胞方向发展发生突变，朝着癌细胞方向发展不是不是16、有些为何能一直传下去吗？、有些为何能一直传下去吗？有关概念有关概念细胞株：细胞株：传代培养的细胞一般传至传代培养的细胞一般传至10代左代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数右细
12、胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到细胞存活到4050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至50代后又出现细胞代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。容易传代培养。19、动物细胞培养要经过脱分
13、化的过程吗？、动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？为什么？ 一般而言，动物细胞培养不需经过脱分一般而言，动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。使其分化成所需要的组织或器官。动物细胞培养过程：动物细胞
14、培养过程：动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代细胞代细胞原代培养原代培养50代细胞代细胞传代培养传代培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系单个细胞单个细胞加培养液加培养液遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变动物组织细胞间隙中动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织定弹性和韧性的组织和器官。和器官。（分解弹性纤维（分解弹性纤维蛋白蛋白）请总结出动物细胞培养的定义请总结出动物细胞培养的定义动物细胞培养就是
15、从动物机体内取出动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。细胞生长和增殖。多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的知识，根据你所学的知识，思考并讨论以下问题：思考并讨论以下问题：1、体外培养细胞时需要提供哪些物质？、体外培养细胞时需要提供哪些物质？2、体外培养的细胞需要什么样的环境条件？、体外培养的细胞需要什么样的环境条件？充足的营养供给、适宜的温度、适宜充足的营养供给、适宜的温度、适宜的的pHpH和气体环境和
16、气体环境无菌、无毒无菌、无毒动物细胞培养条件：动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养合成培养基合成培养基（葡萄糖、氨基酸、（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、促生长因子、 无机盐、无机盐、微量元素、微量元素、动物血清等。动物血清等。）3、温度和、温度和PH 36.50.5度度, 7.2-7.44、气体环境、气体环境CO2培养箱培养箱 O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）保证细胞顺利的保证细胞顺利的生长增殖生长增殖防止培养过程防止培养过程的污染的污染防止细胞代谢产物防止细胞代谢产
17、物积累造成危害积累造成危害维持培养液的维持培养液的pHpH为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？清？ 血清是天然培养基中最有效和最常用的培养血清是天然培养基中最有效和最常用的培养成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。葡萄糖、激素等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，其中有些氨基酸动物细胞本身不氨基酸有多种，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成，必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、能合成，必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等。此外，生长激素等。此
18、外，它含有许多维持细胞生长繁它含有许多维持细胞生长繁殖和保持细胞生物学性状不可缺少的未知成分殖和保持细胞生物学性状不可缺少的未知成分，如如多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物质。与合成培养基合用，能使细胞质。与合成培养基合用，能使细胞顺顺利增殖生长。利增殖生长。动物细胞培养应用动物细胞培养应用v大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、扰素、单克隆抗体单克隆抗体）v作为基因工程中的作为基因工程中的受体细胞受体细胞v培养的动物细胞可以用于培养的动物细胞可以用于检测有毒物质检测有毒物质，判断某种物质的毒性判断某种物质的
19、毒性v为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据据获得细胞获得细胞细胞的细胞的全能性全能性植物体植物体培养结果培养结果或细胞产物或细胞产物快速繁殖快速繁殖、培育培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖葡萄糖、动物动物血清血清蔗糖蔗糖、植物激植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞细胞增殖增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较细胞群体细胞群体相同点：相同点：（1）都需要人工条件下的无菌操作）都需要人工
20、条件下的无菌操作（2）都是合成培养基）都是合成培养基（3）都需适宜的温度、）都需适宜的温度、pH等条件等条件注意：注意：两种技术手段培养过程中都进行了有丝分裂，两种技术手段培养过程中都进行了有丝分裂，都是无性繁殖，都可称克隆，都不涉及减数都是无性繁殖，都可称克隆，都不涉及减数分裂。分裂。植物组织培养最终产生新个体，体现了细植物组织培养最终产生新个体，体现了细胞的全能性；动物细胞培养产生大量细胞，胞的全能性；动物细胞培养产生大量细胞，不形成新个体，故不能体现细胞的全能性。不形成新个体，故不能体现细胞的全能性。1.（06全国卷）全国卷）下列关于动物细胞培养的叙下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是述
21、，正确的是（ ）A.培养中的人效应培养中的人效应T细胞能产生单克隆抗体细胞能产生单克隆抗体B.培养中的人培养中的人B细胞能够无限地增殖细胞能够无限地增殖C.人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株D.用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞【解析】能产生抗体的细胞应为浆细胞而不是效【解析】能产生抗体的细胞应为浆细胞而不是效应应T T细胞；瘤细胞才具有无限增殖的特点；人成细胞；瘤细胞才具有无限增殖的特点；人成熟红细胞因无细胞核，所以进行细胞培养不能形熟红细胞因无细胞核，所以进行细胞培养不能形成细胞株。成细胞株。2、（、（07江苏卷）江苏
22、卷）动物细胞体外培养时，通常要动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。右图是血在培养基中补充一定浓度的某些物质。右图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。从清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。从该图提供的信息可以获得的正确结论有该图提供的信息可以获得的正确结论有（ ）（多选）（多选） A正常细胞与癌细正常细胞与癌细胞的增殖速率相同胞的增殖速率相同 B有无血清对正常有无血清对正常细胞培养的影响不同细胞培养的影响不同C培养基中补充血清培养基中补充血清有助于正常细胞的培养有助于正常细胞的培养 D培养基中是否补充培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大血清对癌细胞的培养
23、影响不大BCD3、（、（08宁夏卷）回答下列有关动物细胞培养的宁夏卷）回答下列有关动物细胞培养的问题：问题：(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂长在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂长年到细胞表面年到细胞表面 时，细胞会停止分裂增增时，细胞会停止分裂增增殖，这种现象称为细胞的殖，这种现象称为细胞的 。此时，瓶。此时，瓶壁上形成的细胞层数是壁上形成的细胞层数是 。要使贴壁。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是酶是 。 (2)随首细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分随首细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现裂停止，进而出现
24、 的现象；但极少的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变面变成质发生改变面变成 细胞，该种细胞的黏着细胞，该种细胞的黏着性性 ，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量 。相互接触相互接触接触抑制接触抑制单层（或一层）单层（或一层）胰蛋白酶胰蛋白酶衰老甚至死亡衰老甚至死亡不死性不死性降低降低减少减少(3)现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被污色，而活细胞不染色，原因是察到死细胞被污色，而活细胞不染色，原因是 。(4) 检查某种毒物是否能改变细胞染一的
25、数目，检查某种毒物是否能改变细胞染一的数目，最好选用细胞分裂到最好选用细胞分裂到 期的细胞用显微镜进行观期的细胞用显微镜进行观察。察。(5)在细胞培养过程中，通常在在细胞培养过程中，通常在 条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中 的活性降低，细胞的活性降低，细胞 的速率降低。的速率降低。(6)给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作当作 进行攻击。进行攻击。由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入由于活细胞的膜具有选择
26、透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色）了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色）中中冷冻（或超低温、液氮）冷冻（或超低温、液氮）酶酶新陈代谢新陈代谢抗原抗原作业：作业：生物学家研究发现，癌细胞的无限增殖受生物学家研究发现，癌细胞的无限增殖受某调控基因的控制，该调控基因能激发所有动物某调控基因的控制，该调控基因能激发所有动物细胞大量增殖，为探究该调控基因是存在于细胞细胞大量增殖，为探究该调控基因是存在于细胞质还是细胞核上，科研人员做了如下实验研究：质还是细胞核
27、上，科研人员做了如下实验研究：请根据以上思路，继续完成下列实验设计方案：请根据以上思路，继续完成下列实验设计方案：(1)(1)实验方案实验方案( (实验提示：癌细胞能连续培养，但细胞形态实验提示：癌细胞能连续培养，但细胞形态发生明显改变。如何观察细胞形态不作实验设计要求发生明显改变。如何观察细胞形态不作实验设计要求) ) ；分别使单个癌细胞和单个肝细胞的核质分离；分别使单个癌细胞和单个肝细胞的核质分离；_；取取2 2只培养瓶分别编号甲、乙，各加入等量的培养液；只培养瓶分别编号甲、乙，各加入等量的培养液；_； 。(2)(2)预期实验结果及结论：预期实验结果及结论：_； ；_。问题讨论1 1、某植
28、物非常具有观赏价值，你采取什么方法来、某植物非常具有观赏价值，你采取什么方法来繁殖后代，使它们继承该植物的全部优良性状？繁殖后代，使它们继承该植物的全部优良性状？、19971997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t30.8t，创造了世，创造了世界奶牛产量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场界奶牛产量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有仅有3 34 4吨。你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年吨。你能想办法繁殖卢
29、辛达的后代，使年产奶量为产奶量为30.8t30.8t吗？吗？讨论讨论1：能利用体细胞核移植技术克隆高产能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由？奶牛卢辛达吗？请说明理由？ 可以。卢辛达的产奶量很高，说明它有可以。卢辛达的产奶量很高，说明它有高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛，隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础。其克隆牛具有高产的遗传基础。讨论讨论2：如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？交给你，你将如何对它进行克隆？卵
30、细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠融合后的卵细胞融合后的卵细胞1 1、谁谁是是“ “多多莉莉” ”的的母母亲亲？2 2、“ “多多莉莉羊羊” ”是是雄雄还还是是雌雌？3 3、是是否否符符合合孟孟德德尔尔遗遗传传？问问题题多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程、动物的克隆与植物克隆一样吗？、动物的克隆与植物克隆一样吗？、用动物体细胞进行克隆的过程、用动物体细胞进行克隆的过程,其其实际操作过程是什么？实际操作过程是什么？动物克隆过程的实际是动物克隆过程的实
31、际是细胞核移植细胞核移植不不、阅读课本、阅读课本P48，简述高产牛体细，简述高产牛体细胞核移植过程胞核移植过程（1）供体细胞：）供体细胞：采用传代采用传代1010代以内代以内的细胞的细胞原因：原因：培养的动物细胞一般当传代至培养的动物细胞一般当传代至10105050代左右时，部分细胞核代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，传物质可能会发生突变，而而1010代以内的细胞一般能保持正常代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。的二倍体核型。因此，在体细因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用胞正
32、常的遗传基础，通常采用传代传代1010代以内的细胞。代以内的细胞。（2）受体细胞：）受体细胞： 去核的卵母细胞【减数第二去核的卵母细胞【减数第二次分裂中期（次分裂中期（MM期期）的次）的次级卵母细胞级卵母细胞原因：原因：a. 卵母细胞体积大，便于操作。卵母细胞体积大，便于操作。b. 卵黄多，营养物质丰富。卵黄多，营养物质丰富。c. 含有激发细胞分裂分化的物质，含有激发细胞分裂分化的物质，使细胞核易于表达全能性。使细胞核易于表达全能性。d. Md. M期次级卵母细胞的细胞核、细期次级卵母细胞的细胞核、细胞质已成熟，而胞质已成熟，而MM期初级卵母细胞期初级卵母细胞的细胞核、细胞质尚未成熟，其细胞的
33、细胞核、细胞质尚未成熟，其细胞质不能支持胚胎的全程发育。质不能支持胚胎的全程发育。在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？卵母细胞的核？ 为使核移植动物的遗传物质全部来自为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。有利用价值的动物提供的细胞。（3）核移植方法：）核移植方法： 显微注射法（将显微注射法（将整个整个供体供体细胞注入去核卵母细胞中）细胞注入去核卵母细胞中）细胞融合的方法：细胞融合的方法： 电刺激电刺激融合的原理：融合的原理：细胞膜具有流动性细胞膜具有流动性激活受体细胞，促进重组细胞激活受体细胞，促进重组细胞分裂分化的方
34、法：分裂分化的方法： 物理法：电脉冲物理法：电脉冲化学法：化学法：CaCa2+2+载体载体细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了动物进行了100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？ 不是，克隆动物绝大部分不是，克隆动物绝大部分DNADNA来自供体细来自供体细胞核，但核外还有少部分胞核，但核外还有少部分DNADNA（如（如线粒体线粒体DNADNA）来自受体卵母细胞）来自受体卵母细胞 克隆属于克隆属于无性繁殖无性繁殖，产生的新个体的，产生的新个体的性别、基因型及性别、基因型及绝大多数绝大多数性状与供核亲本性状与供核亲本一致一致请同学们归纳动物体细胞
35、核移植概念请同学们归纳动物体细胞核移植概念: :将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为用核移植的方法得到的动物称为克隆动物克隆动物核移植核移植胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植（难度高难度高）受体细胞：受体细胞：M期的期的卵母细胞卵母细胞对比对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找出多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找出操作过程的不同点？操作过程的不
36、同点？ 多莉克隆过程的受体细胞是去核多莉克隆过程的受体细胞是去核卵卵细胞，而高细胞，而高产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核卵母卵母细胞；多细胞；多莉克隆过程是将供体莉克隆过程是将供体细胞核细胞核注入受体细胞，而高产注入受体细胞，而高产奶牛的克隆过程是将供体奶牛的克隆过程是将供体细胞细胞注入受体细胞。注入受体细胞。讨论分析上述哪一种措施更科学？并说明理由？讨论分析上述哪一种措施更科学？并说明理由？ 卵母细胞中的蛋白含量、活性比卵细胞高，卵母细胞中的蛋白含量、活性比卵细胞高，用它作受体更容易成功用它作受体更容易成功 将供体细胞注入受体细胞，使克隆动物更将供体细胞注入受
37、体细胞，使克隆动物更像供体动物，操作也方便像供体动物，操作也方便去核卵去核卵母母细细胞胞供供体细胞体细胞电刺激促融电刺激促融重组细胞重组细胞电脉冲电脉冲或或Ca2+载体载体刺激刺激早期胚胎早期胚胎(或重组胚胎）或重组胚胎）胚胎移植胚胎移植母体子宫母体子宫妊娠、出生妊娠、出生 个体个体（克隆动物）（克隆动物）小结：小结：核移植过程涉及动物细胞培养、显微注核移植过程涉及动物细胞培养、显微注射技术、胚胎移植技术等手段。射技术、胚胎移植技术等手段。该过程利用的原理是：该过程利用的原理是：动物体细胞核具有动物体细胞核具有全能性全能性该过程该过程的成功证明了什么？的成功证明了什么？1 1、动物体细胞核具有
38、全能性；、动物体细胞核具有全能性；2 2、细胞质具有调控细胞核发育的作用。、细胞质具有调控细胞核发育的作用。克隆动物的研究意义克隆动物的研究意义1.克隆动物作为生物反应器，克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白生产医用蛋白2.改良动物品种改良动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体治疗人类疾病，作为供体4.保护濒危动物保护濒危动物体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。2.成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。成功率非常低及克隆
39、动物食品的安全性问题。1、下列有关体细胞克隆的叙述，错误的是（、下列有关体细胞克隆的叙述，错误的是（ ）A A、供体是体细胞的细胞核、供体是体细胞的细胞核B B、受体是去核卵母细胞的细胞质、受体是去核卵母细胞的细胞质C C、激活受体细胞，完成减数分裂的措施有电、激活受体细胞，完成减数分裂的措施有电脉冲、钙离子载体等脉冲、钙离子载体等D D、克隆出的后代与供体的表现型完全一致、克隆出的后代与供体的表现型完全一致2、以下四种细胞工程技术中培育出的新个体，、以下四种细胞工程技术中培育出的新个体，只有一个亲本遗传性状的方法是（只有一个亲本遗传性状的方法是（ ）A A、植物组织培养、植物组织培养 B B
40、、细胞融合、细胞融合C C、动物胚胎移植、动物胚胎移植 D D、细胞核移植、细胞核移植3、培育克隆牛的过程中，如果供体细胞来自、培育克隆牛的过程中，如果供体细胞来自同一头牛，培育出的多个个体在性状上也不完同一头牛，培育出的多个个体在性状上也不完全相同，试分析其原因，下列说法错误的是（全相同，试分析其原因，下列说法错误的是（ ）A A、性状变异可由环境条件引起、性状变异可由环境条件引起B B、基因可能会发生突变、基因可能会发生突变C C、受体细胞存在细胞质基因的不同、受体细胞存在细胞质基因的不同D D、细胞核基因发生重组、细胞核基因发生重组4、下列有关动物细胞培养的叙述，正确的是、下列有关动物细
41、胞培养的叙述，正确的是（ ）A A、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中的过渡过程中B B、动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨、动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清基酸、无机盐、生长素和动物血清C C、动物细胞培养的目的是获得大量的细胞、动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白分泌蛋白D D、动物细胞培养前和培养过程中都要用胰、动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理蛋白酶处理 细胞融合是正常的生命活动细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用杂杂种种植植株株融合的融合的原生质原生质
42、体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞A原生质体原生质体B原生质体原生质体A杂种杂种细胞细胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导方法？方法？促进融合促进融合的方法？的方法？融合融合完成完成的的标志标志植物细胞植物细胞B回顾：回顾：植物体细胞杂交技术过程植物体细胞杂交技术过程成果和未解决的问题成果和未解决的问题 成果：克服不同生物远缘杂交成果：克服不同生物远缘杂交不亲和不亲和的障的障 碍，出现自然界没有的新品种碍，出现自然界没有的新品种。未解决的问题：未能让杂种植物按照人们未解决的问题：
43、未能让杂种植物按照人们 的需要表现出亲代的优良。的需要表现出亲代的优良。一、动物细胞融合1、动物融合的过程请同学们阅读课本P52动物融合思考：动物细胞融合与植物体细胞思考：动物细胞融合与植物体细胞杂交有什么区别？杂交有什么区别？不同不同DNADNA的两个细胞的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞融合后的细胞进行有丝分裂进行有丝分裂1、动物细胞融合过程1 1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶酶解法，如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗
44、？为什么？什么？不不需需要要，因为动物细胞无细胞壁，因为动物细胞无细胞壁3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？方法有哪些？离心、电激等物理方法；离心、电激等物理方法；PEGPEG等化学方法等化学方法4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？有其他方法吗？能能 还可以利用灭活的病毒进行诱导还可以利用灭活的病毒进行诱导7、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？6 6、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行组织培养形成完整的
45、个体，动物细合再进行组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能不能 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程或多个动物细胞形成一个细胞的过程5、动物细胞融合完成的标志是什么？、动物细胞融合完成的标志是什么？细胞核融合成一个核细胞核融合成一个核8、若一动物细胞含有、若一动物细胞含有2M条染色体，条染色体，2个染色个染色体组，基因型为体组，基因型为Aabb，另一动物细胞含，另一动物细胞含2N条染色体，条染色体，2个染色体组，基因型为个染色体组，基因型为ccDd，则这则这2个细胞融合成的杂
46、交细胞应为个细胞融合成的杂交细胞应为 倍倍体，其体细胞中染色体数目为体，其体细胞中染色体数目为 ，基，基因型为因型为 。四四2M+2N2M+2NAabbccDd9、动物细胞融合技术的优点及应用：、动物细胞融合技术的优点及应用：突破有性杂交的局限，使远缘杂交成突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。为可能。最重要的应用是制备单克隆抗体最重要的应用是制备单克隆抗体植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交 动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理 细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞的全能性细胞膜的流动细胞膜的
47、流动性性、细胞增殖、细胞增殖细胞融合的方细胞融合的方法法去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合使细胞分散后使细胞分散后诱导细胞融合诱导细胞融合诱导方法诱导方法物理（离心、振物理（离心、振荡、电刺激）荡、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方物理、化学方法（同左）法（同左）灭活的病毒灭活的病毒用途用途获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗制备单克隆抗体体1、基因型为、基因型为Aa与基因型为与基因型为Bb的动物体细胞的动物体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细胞（得下列哪种基因型的细胞（ ）A A、AAa
48、a BAAaa B、AaBb AaBb C C、Aabb DAabb D、BBbbBBbb2、动物细胞融合过程中所用的诱导剂、动物细胞融合过程中所用的诱导剂灭灭活的病毒，抗原性和感染力的有无是（活的病毒，抗原性和感染力的有无是（ ）A A、失去抗原性，具有感染力、失去抗原性，具有感染力B B、具有抗原性，也具有感染力、具有抗原性，也具有感染力C C、失去抗原性，也失去感染力、失去抗原性，也失去感染力D D、具有抗原性，失去感染力、具有抗原性，失去感染力3 3、现有甲、乙两种植物（均为二倍体纯种），其中甲、现有甲、乙两种植物（均为二倍体纯种），其中甲种植物的光合作用能力高于乙种植物，但乙种植物很
49、适种植物的光合作用能力高于乙种植物，但乙种植物很适宜在盐碱地种植，且相关性状均为核基因控制。要利用宜在盐碱地种植，且相关性状均为核基因控制。要利用甲、乙两种植物的优势，培育出高产、耐盐的植株，有甲、乙两种植物的优势，培育出高产、耐盐的植株，有多种生物技术手段可以利用。下列所采用的技术手段中，多种生物技术手段可以利用。下列所采用的技术手段中，不可行的是（不可行的是（ ）A A、利用植物体细胞杂交技术，可获得满足要求的四倍利用植物体细胞杂交技术，可获得满足要求的四倍体杂种目的植株体杂种目的植株B B、将乙种植物耐盐基因导入到甲种植物的受精卵中，将乙种植物耐盐基因导入到甲种植物的受精卵中，可培育出目
50、的植株可培育出目的植株C C、两种植物杂交后，得到的两种植物杂交后，得到的F1F1再利用单倍体育种技再利用单倍体育种技术，可较快获得纯种的目的植株术，可较快获得纯种的目的植株D D、诱导两种植物的花粉融合，并培育成幼苗，幼苗诱导两种植物的花粉融合，并培育成幼苗，幼苗用秋水仙素处理，可培育出目的植株用秋水仙素处理，可培育出目的植株C【解析】【解析】两种植物存在着生殖隔离，无法完两种植物存在着生殖隔离，无法完成杂交，即使能够杂交，所得成杂交，即使能够杂交，所得F1F1也不能产生也不能产生正常可育的配子，因而不能用于单倍体育种。正常可育的配子，因而不能用于单倍体育种。4、分裂期细胞的细胞质中含有一种
51、能促进染色质凝集为、分裂期细胞的细胞质中含有一种能促进染色质凝集为染色体的物质。将某种动物的分裂期细胞与染色体的物质。将某种动物的分裂期细胞与G1期（期（DNA复制前期）细胞融合，可能出现的情况是（复制前期）细胞融合，可能出现的情况是（ ）A A、来自来自G1G1期细胞的染色质进行复制期细胞的染色质进行复制B B、融合细胞的融合细胞的DNADNA含量是含量是G1G1期细胞的期细胞的2 2倍倍C C、来自来自G1G1期细胞的染色质开始凝集期细胞的染色质开始凝集D D、融合后两细胞仍按各自的细胞周期运转融合后两细胞仍按各自的细胞周期运转【解析】【解析】两细胞融合后在分裂期细胞的细胞质中物质两细胞融
52、合后在分裂期细胞的细胞质中物质的影响下，的影响下，G1G1期细胞的染色质开始凝集为染色体，期细胞的染色质开始凝集为染色体，C C项正确；凝集的染色体不能再进行复制，故项正确；凝集的染色体不能再进行复制，故A A项错误；项错误；分裂期细胞的分裂期细胞的DNADNA已经过复制加倍，故融合细胞的已经过复制加倍，故融合细胞的DNADNA含量是含量是G1G1期细胞的期细胞的3 3倍（核倍（核DNADNA），故），故B B项错误；融合项错误；融合后的细胞开始具有新的细胞周期，故后的细胞开始具有新的细胞周期，故D D项错误。项错误。1.抗体由何种细胞产生？抗体由何种细胞产生？2.主要分布在哪里？主要分布在哪
53、里？3.如何得到抗体？如何得到抗体？提提问问？浆细胞浆细胞主要在血清，少数在组织液、主要在血清，少数在组织液、外分泌液外分泌液抗原抗原 B B细胞细胞 浆细胞浆细胞 抗体抗体刺激刺激增殖、增殖、分化分化合成、合成、分泌分泌 抗原抗原 动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一浆细胞筛选单一浆细胞不能增殖产生大量抗体不能增殖产生大量抗体特异性差、纯度低；特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏B淋巴细胞受抗原刺激后，可以淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。产生抗体。动物体内的动物体内的B淋巴细胞可以产生淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体
54、，每种抗体对特定的抗百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。原具有特异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。体。设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？杂种细胞杂种细胞思考：思考：1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞
55、融细胞融合？合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有胞的遗传物质，不仅具有B B细胞分泌抗体的细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体以获得大量单克隆抗体3 3、骨髓瘤细胞是癌细胞吗骨髓瘤细胞是癌细胞吗? ? 有无限增殖能力（失去凋亡机制，有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的而具有转移能力的恶性恶性肿瘤细胞，称为肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞
56、。胞。单克隆抗体单克隆抗体 由单个由单个B淋巴细胞经过无性繁殖淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的这一细胞群所产生的化学性质单一、特化学性质单一、特异性强异性强的抗体称为的抗体称为单克隆抗体单克隆抗体。 特点：特点：特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 1 1、注射抗原的目的是什么？、注射抗原的目的是什么？使小鼠产生使小鼠产生体液免疫体液免疫反应，形成相应的反应，形成相应的B B淋巴细胞淋巴细胞。B B淋巴细胞可从淋巴细胞可从脾脏或血清脾脏或血清中分离出来。中分离出来。2 2、诱导细胞融合的方法有哪些？、诱导细胞融合的方法有
57、哪些？物理法：物理法：离心、振荡、电刺离心、振荡、电刺激激化学法：化学法：PEGPEG（聚乙二醇）（聚乙二醇）生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒B BB B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤3、细胞融合后培养液中有几种细胞？细胞融合后培养液中有几种细胞？思考：思考：已知细胞合成已知细胞合成DNADNA有有D D和和S S两条途径，其两条途径，其中中D D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条这两条DNADNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有骨髓瘤细胞中尽管没有S S途径，但能不断分裂途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞
58、在试管中混合，加增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEGPEG促促融，获得杂种细胞。融，获得杂种细胞。请根据上述信息，设计一方法，从培养液中请根据上述信息，设计一方法，从培养液中分离出杂交瘤细胞，并说明原理。分离出杂交瘤细胞，并说明原理。4、怎样筛选杂交瘤细胞？、怎样筛选杂交瘤细胞？选择培养基选择培养基方法：方法：原理：原理：在培养液中加入氨基嘌呤，收集增在培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞。殖的细胞。加入氨基嘌呤后，使加入氨基嘌呤后，使D D合成途径阻断，合成途径阻断，仅有仅有D D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋此融合的细胞就不能增殖，但
59、人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种杂种细胞细胞可以利用淋巴细胞的可以利用淋巴细胞的S S途径合成途径合成DNADNA而增殖。而增殖。5 5、杂交瘤细胞有何优点？、杂交瘤细胞有何优点？既能大量增殖，又能产生特异性抗体既能大量增殖，又能产生特异性抗体6 6、为何要进行克隆化培养和专一抗体检测、为何要进行克隆化培养和专一抗体检测、筛选？筛选？ 经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞泌所需抗体的细胞，需将杂交瘤细胞稀释，用，需将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，让其增殖。然后检测各多孔细胞培养板培养，让其增殖。然后检测各孔
60、细胞分泌的抗体，能与特定抗原结合的培养孔细胞分泌的抗体，能与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行稀释，自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行稀释，一般需进行一般需进行3 34 4次，直至确信每个孔中增殖的次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养克隆化培养。7 7、在整个制备的过程中要经过几次筛选在整个制备的过程中要经过几次筛选？第第1 1次筛选是在特定的次筛选是在特定的选择培养基选择培养基上筛选出上筛选出B B瘤融合的瘤融合
61、的杂交瘤细胞杂交瘤细胞。第第2 2次筛选是用次筛选是用抗原抗原抗体杂交法抗体杂交法检测检测、筛筛选出足够数量的选出足够数量的能分泌所需抗体的细胞能分泌所需抗体的细胞。8 8、大量增殖杂交瘤细胞，获得单克隆抗体的、大量增殖杂交瘤细胞，获得单克隆抗体的方法？方法？进行细胞进行细胞克隆化培养克隆化培养9、提取单克隆抗体的场所有哪些？、提取单克隆抗体的场所有哪些？a.a.体外培养体外培养从从培养液培养液中提取中提取b.b.动物体内腹腔中培养动物体内腹腔中培养从从腹水腹水中提取中提取10、抗体和单克隆抗体的比较、抗体和单克隆抗体的比较名称名称抗体抗体单克隆抗体单克隆抗体产生产生特点特点由单个浆细胞分泌由
62、单个浆细胞分泌由杂交瘤细胞分泌由杂交瘤细胞分泌一般从血清中分一般从血清中分离，产量低、纯离，产量低、纯度低、特异性差度低、特异性差特异性强，灵敏度特异性强，灵敏度高，能大量制备高，能大量制备单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用： 在基础理论研究中具有重要意义在基础理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性高、灵敏度高等优越性。特异性高、灵敏度高等优越性。生物导弹生物导弹（单克隆抗体起导向作用，单克隆抗体起导向作用，药物为弹头药物为弹头）1、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养
63、可产生大量单克隆抗体。得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量单克隆抗体。与骨髓瘤细胞融合的是（与骨髓瘤细胞融合的是（ ）A.A.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞B.B.未经过免疫的未经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞D.D.未经过免疫的未经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞2、生成单克隆抗体时，在培养液中加入某种试、生成单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（ ）A.A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNADNA复制复制B.B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活能
64、阻止淋巴细胞的原癌基因被激活C.C.选择性抑制骨髓瘤细胞的选择性抑制骨髓瘤细胞的DNADNA复制复制D.D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成3、下列有关细胞工程的叙述，正确的是（、下列有关细胞工程的叙述，正确的是（ ）A.A.在植物细胞工程中，通常用在植物细胞工程中，通常用CaClCaCl2 2处理植物细处理植物细胞，以增大细胞壁的通透性胞，以增大细胞壁的通透性B.B.某一种效应细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后培某一种效应细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后培养，获得特异性强的单克隆抗体，但当相应抗养，获得特异性强的单克隆抗体，但当相应抗原位于靶细胞内时，该抗体
65、不能与之发生特异原位于靶细胞内时，该抗体不能与之发生特异性结合性结合C.C.用以治疗癌症的用以治疗癌症的“生物导弹生物导弹”就是以单克隆就是以单克隆抗体作抗癌药物定向杀死癌细胞抗体作抗癌药物定向杀死癌细胞D.D.用聚乙二醇处理大量混合细胞所获得的融合用聚乙二醇处理大量混合细胞所获得的融合细胞都具有双亲的遗传性细胞都具有双亲的遗传性效应效应T细胞与靶细胞结合，使靶细胞裂解，细胞与靶细胞结合，使靶细胞裂解，释放出抗原后，抗体才能与抗原结合释放出抗原后，抗体才能与抗原结合4 4. .（0707天津卷）天津卷）利用细胞工程方法，以利用细胞工程方法，以SARSSARS病毒病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单质克
66、隆抗体。下列相核衣壳蛋白为抗原制备出单质克隆抗体。下列相关叙述正确的是关叙述正确的是（ ）A.A.用纯化的核衣用纯化的核衣壳壳蛋白反复注射到小鼠体内，蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体产生的血清抗体为单克隆抗体B.B.体外培养单个效应体外培养单个效应B B细胞可以获得大量针细胞可以获得大量针对对SARSSARS病毒的单克隆抗体病毒的单克隆抗体C.C.将等量效应将等量效应B B细胞和骨髓瘤细胞混合，经细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEGPEG诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞D.D.利用该单克隆抗体与利用该单克隆抗体与SARSSARS病毒核衣壳蛋白病毒核衣壳蛋
67、白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者特异性结合的方法可诊断出病毒感染者(1)(1) 技术是单克隆抗体技术的基础。技术是单克隆抗体技术的基础。(2)(2)根据培养基的用途分类，根据培养基的用途分类，用于筛选杂交瘤细胞的用于筛选杂交瘤细胞的培培养基属于养基属于 培养基。培养基。(3)(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性最大的优越性是是 (4)(4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用诱导剂外，还可以采用诱导剂外，还可以采用 。(5)(5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞
68、的 特点，又具备淋巴细胞的特点，又具备淋巴细胞的 特点。特点。(6)(6)淋巴细胞是由动物体淋巴细胞是由动物体 中的中的 细胞分化、发细胞分化、发育而来。育而来。(7)(7)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是方式是 。4、（、（06年江苏卷）回答下列问题：年江苏卷）回答下列问题：动物细胞培养动物细胞培养(微生物培养微生物培养)选择选择特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高灭活的病毒灭活的病毒在体外大量增殖在体外大量增殖分泌特异性抗体分泌特异性抗体骨髓骨髓造血干造血干主动运输主动运输(主动吸收主动吸收)5、下图示细胞融合的过程，据图完成下
69、列问题：、下图示细胞融合的过程，据图完成下列问题：（该题做在作业本上）（该题做在作业本上）ABDC（1）若）若A细胞为骨髓瘤细胞为骨髓瘤细胞，细胞，B为经免疫过的为经免疫过的B淋巴细胞，那么淋巴细胞，那么D细胞称为细胞称为 ，由，由D细胞连细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称为续分裂产生大量细胞的过程，称为 ，这种细胞既能无限繁殖，又能产生这种细胞既能无限繁殖，又能产生 。（2）若）若A、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解了细胞壁，这种酶可能是已经用酶降解了细胞壁，这种酶可能是 ，由此生成的由此生成的A和和B细胞称为细胞称为 ；融合完成；融合完成的标志是的
70、标志是 ；形成；形成D细胞还要应用细胞还要应用 技术，把其培养成植株。技术，把其培养成植株。（3）若）若A为人细胞，为人细胞，B为鼠细胞，并分别用红、为鼠细胞，并分别用红、绿荧光染料标记细胞上的蛋白质，在绿荧光染料标记细胞上的蛋白质，在C细胞时，细胞时，细胞一半发红色荧光，一半发绿色荧光，到细胞一半发红色荧光，一半发绿色荧光，到D细细胞阶段，两种颜色的荧光均匀分布，原因是胞阶段，两种颜色的荧光均匀分布，原因是 。（4）若）若A、B细胞为动物细胞，一般取自细胞为动物细胞，一般取自 ，然后用，然后用 将其分散开。由将其分散开。由A、B到到C的的过程中，采用的不同于植物细胞融合的手段是过程中，采用的不同于植物细胞融合的手段是 。
