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1、浅谈血液中四种物质浅谈血液中四种物质的测定方法的测定方法 以上是一份血液生化检验报告单。请简要说以上是一份血液生化检验报告单。请简要说以上是一份血液生化检验报告单。请简要说以上是一份血液生化检验报告单。请简要说明血液中氯离子，总蛋白，葡萄糖及无机磷的测明血液中氯离子，总蛋白，葡萄糖及无机磷的测明血液中氯离子，总蛋白，葡萄糖及无机磷的测明血液中氯离子，总蛋白，葡萄糖及无机磷的测定方法。（所涉及滴定均为微量滴定，使用微量定方法。（所涉及滴定均为微量滴定，使用微量定方法。（所涉及滴定均为微量滴定，使用微量定方法。（所涉及滴定均为微量滴定，使用微量滴定管；除测定蛋白质外均需使用无蛋白滤液。）滴定管；除
2、测定蛋白质外均需使用无蛋白滤液。）滴定管；除测定蛋白质外均需使用无蛋白滤液。）滴定管；除测定蛋白质外均需使用无蛋白滤液。）l氯离子测定常用方案氯离子测定常用方案 l1.1.汞滴定法汞滴定法lHgHg2+2+2Cl+2Cl- -=HgCl=HgCl2 2l以二苯脲胺为指示剂滴定至紫红色以二苯脲胺为指示剂滴定至紫红色l2.2.碘酸银法碘酸银法lAgIOAgIO3 3+Cl+Cl- -=AgCl=AgClIOIO3 3- -lIOIO3-3-+5I+5I- -+6H+6H+ +=3H=3H2 2O+3IO+3I2 2lI I2 2+2S+2S2 2O O3 32-2-=S=S4 4O O6 62-2
3、-+2I+2I- -l以淀粉为指示剂滴定至蓝色以淀粉为指示剂滴定至蓝色消失3.3.3.3.莫尔法莫尔法莫尔法莫尔法4.4.4.4.法扬司法法扬司法法扬司法法扬司法5.5.5.5.弗尔哈德法弗尔哈德法弗尔哈德法弗尔哈德法6.6.6.6.吸光光度法吸光光度法吸光光度法吸光光度法 氯醌酸与汞离子结合，形成绿色的氯醌酸汞试剂，氯醌酸与汞离子结合，形成绿色的氯醌酸汞试剂，氯醌酸与汞离子结合，形成绿色的氯醌酸汞试剂，氯醌酸与汞离子结合，形成绿色的氯醌酸汞试剂，此试剂与氯作用时，汞离子又与氯结合，而释放出，此试剂与氯作用时，汞离子又与氯结合，而释放出，此试剂与氯作用时，汞离子又与氯结合，而释放出，此试剂与氯
4、作用时，汞离子又与氯结合，而释放出，紫红色的氯醌酸离子，可用分光光度法测定。紫红色的氯醌酸离子，可用分光光度法测定。紫红色的氯醌酸离子，可用分光光度法测定。紫红色的氯醌酸离子，可用分光光度法测定。 除汞滴定法可直接滴定稀释后的血清外，其他除汞滴定法可直接滴定稀释后的血清外，其他除汞滴定法可直接滴定稀释后的血清外，其他除汞滴定法可直接滴定稀释后的血清外，其他方法均需制备无蛋白滤液。方法均需制备无蛋白滤液。方法均需制备无蛋白滤液。方法均需制备无蛋白滤液。可行方案可行方案： 除法扬司法外以上所有方法。原因：氯除法扬司法外以上所有方法。原因：氯除法扬司法外以上所有方法。原因：氯除法扬司法外以上所有方法
5、。原因：氯离子浓度小，溶液太稀，生成的沉淀少，终点颜色变离子浓度小，溶液太稀，生成的沉淀少，终点颜色变离子浓度小，溶液太稀，生成的沉淀少，终点颜色变离子浓度小，溶液太稀，生成的沉淀少，终点颜色变化不明显。化不明显。化不明显。化不明显。最优方案：最优方案：汞滴定法。其不必制备滤液，标本用量汞滴定法。其不必制备滤液，标本用量汞滴定法。其不必制备滤液，标本用量汞滴定法。其不必制备滤液，标本用量少，操作简便，滴定终点明显，结果准确少，操作简便，滴定终点明显，结果准确少，操作简便，滴定终点明显，结果准确少，操作简便，滴定终点明显，结果准确。 蛋白质测定常用方法：蛋白质测定常用方法：1.凯氏定氮法。凯氏定
6、氮法。 血血清清中中总总蛋蛋白白测测定定采采用用微微量量凯凯氏氏定定氮氮法法：血血清清先先于于浓浓硫硫酸酸一一起起加加热热消消化化，其其中中含含氮氮化化合合物物被被分分解解并并转转变变为为硫硫酸酸铵铵，再再与与NaOH作作用用，使使氨氨释释出出，经经蒸蒸气气蒸蒸馏馏而而被被吸吸收收于于硼硼酸酸溶溶液液中中。形形成成的的硼硼酸酸铵铵以以甲甲基基红红为为指指示示剂剂用用标标准准硫硫酸酸滴滴定定，求求出出血血清清中中总总氮氮量量。另另外外用用血血清清无无蛋蛋白白滤滤液液测测定定非非蛋蛋白白氮氮量量。在在总总氮氮量量中中减减去去非非蛋白氮量即为蛋白质量。蛋白氮量即为蛋白质量。 该该法法结结果果准准确确
7、，常常作作为为标标准准方方法法使使用用，但但操操作作过过程程复复杂杂。除除微微量量滴滴定定外外其其与与常常量量凯凯氏氏定定氮氮法法区区别别在在于于蒸馏装置上。蒸馏装置上。 常量凯氏定氮蒸馏器常量凯氏定氮蒸馏器2.双缩脲法双缩脲法 本本法法所所使使用用试试剂剂因因能能与与双双缩缩脲脲(H2NOCNHCONH2)产产生生紫紫红红色色反反应应而而被被称称为为双双缩缩脲脲试试剂剂。蛋蛋白白质质分分子子内内含含有有许许多多肽肽键键 （CONH）, 因因此此可可用用双双缩缩脲脲法法做做分分光光光光度度法法测测定定。此此反反应应并并非非为为蛋蛋白白质质所所特特有有。但但在在体体液液中中，除除蛋蛋白白质质外外
8、不不存存在在可可与与双双缩缩脲脲试试剂剂显显色色的的物物质质。各各种种血血浆浆蛋蛋白白质质显显色色程程度度基基本本相相同同，该该法法试试剂剂稳稳定定，操操作作简简便便，已已成成为为实实验验室室中中最最常常用的用的方法. 无机磷的测定常用方法无机磷的测定常用方法 1.1.制得无蛋白滤液后，在硝酸介质中加入钼酸铵使之制得无蛋白滤液后，在硝酸介质中加入钼酸铵使之生成黄色钼磷酸铵沉淀生成黄色钼磷酸铵沉淀 。 12MoO42-+2NH4+22H+=(NH4)HPO4.12MoO3.H2O+11H2O 过过滤滤后后用用水水洗洗涤涤至至沉沉淀淀不不呈呈酸酸性性为为止止，将将沉沉淀淀溶溶于于过过量量标标准准碱
9、碱溶溶液液中中，然然后后以以酚酚酞酞为为指指示示剂剂，用用HNOHNO3 3标准溶液返滴至红色褪去。其溶解与滴定总反应式：标准溶液返滴至红色褪去。其溶解与滴定总反应式： (NH4)2.12MoO3.H2O24OH-=12MoO4-+HPO42- +2NH4+13H2O 沉淀反应选择性好，且沉淀反应选择性好，且1molP1molP消耗消耗24molNaOH, 24molNaOH, 适适于微量测定。于微量测定。 2.2.制制得得无无蛋蛋白白滤滤液液后后，可可将将POPO4 43-3-沉沉淀淀为为MgNHMgNH4 4POPO4 4. .6H6H2 2O,O,沉沉淀淀过过滤滤溶溶解解于于HCl,HC
10、l,加加入入过过量量EDTAEDTA标标准准溶溶液液，并并调调至至氨氨性性，用用EBTEBT做做指指示示剂剂，用用MgMg2+2+标标准准溶溶液液反反滴滴过过量量的的EDTAEDTA。由由于于血血液液中中含含有有游游离离的的MgMg2+2+，故故用用此此法法会会造造成成较大误差，此法不可取。较大误差，此法不可取。3 3以以三三氯氯醋醋酸酸沉沉淀淀蛋蛋白白，在在酸酸性性滤滤液液中中加加入入钼钼酸酸铵铵试试剂剂，使使与与磷磷结结合合生生成成钼钼磷磷酸酸，再再用用FeSOFeSO4 4将将杂杂多多酸酸中中的的Mo()Mo()还还原原为为Mo(),Mo(),使使生生成成蓝蓝色色钼钼磷磷蓝蓝（PMBPM
11、B）, ,可用分光光度法测定。可用分光光度法测定。（NH4）6Mo7O24+3H2SO4+4H2O=7H2MoO4+3(NH4)2SO412H2MoO4+H3PO4=H3PO4. 12MoO3+12H2OH3PO4.12MoO3+还原剂还原剂=钼磷蓝（钼磷蓝（PMB） 血液中葡萄糖的测定血液中葡萄糖的测定 预处理方法：用预处理方法：用Ba(OH)Ba(OH)2 2和和ZnSOZnSO4 4沉淀蛋白质，巯基化合物也沉淀蛋白质，巯基化合物也形成锌盐沉淀，尿酸及部分肌酐被沉淀及吸附于形成锌盐沉淀，尿酸及部分肌酐被沉淀及吸附于BaSOBaSO4 4, ,滤液中除滤液中除葡萄糖外其他还原性物质含量很少，
12、测定结果精确。葡萄糖外其他还原性物质含量很少，测定结果精确。1.1.碘量法碘量法 在在碱碱性性条条件件下下用用过过量量I I2 2标标准准溶溶液液氧氧化化，反反应应完完全全酸酸化化，用用淀淀粉做指示剂，以粉做指示剂，以NaNa2 2S S2 2O O3 3标准溶液滴定析出的标准溶液滴定析出的I I2.2. I I2 2+2OH+2OH- -=OH=OH- -+I+I- -+H+H2 2O O CH CH2 2OH(CHOH)OH(CHOH)4 4CHO+OICHO+OI- -+OH+OH- -=CH=CH2 2OH(CHOH)OH(CHOH)4 4COOCOO- -+I+I- -+H+H2 2
13、O O 3OI 3OI- -=IO=IO3 3- -+2I+2I- - IO IO3 3- -+5I+5I- -+6H+6H+ +=3I=3I2 2+3H+3H2 2O O 2S 2S2 2O O3 32-2-+I+I2 2=S=S4 4O O6 62-2-+2I+2I- -2.2.高锰酸钾法高锰酸钾法 在在强强碱碱性性溶溶液液中中加加入入过过量量KMnOKMnO4 4标标准准溶溶液液，待待反反应应完完成成后后，将将溶溶液液酸酸化化，准准确确加加入入过过量量FeSOFeSO4 4标标准准溶溶液液，将将所所有有高高价价锰锰离离子子全全部部还还原原为为MnMn2+2+, ,再再用用KMnOKMnO
14、4 4标标准准溶溶液液滴定过量的滴定过量的FeFe2+2+. .CHCH2 2(OH)(CHOH)(OH)(CHOH)4 4CHO+24MnOCHO+24MnO4 4- -+36OH+36OH- -=6CO=6CO3 32-2-+24MnO+24MnO4 42-2-+24H+24H2 2O O3MnO3MnO4 42-2-+4H+4H+ +=2MnO=2MnO4 4- -+MnO+MnO2 2+2H+2H2 2O O2Fe2Fe2+2+MnO+MnO2 2+4H+4H+ +=Mn=Mn2+2+2Fe+2Fe3+3+2H+2H2 2O O5Fe5Fe2+2+MnO+MnO4 4- -+8H+8H
15、+ +=5Fe=5Fe3+3+Mn+Mn2+2+4H+4H2 2O O3.3.砷钼酸显色法砷钼酸显色法CH2(OH)(CHOH)4CHO+2Cu2+5OH-=CH2OH(CHOH)4COO-+Cu2O+3H2O 血血滤滤液液与与碱碱性性硫硫酸酸铜铜试试剂剂混混合合加加热热后后，血血滤滤液液中中葡葡萄萄糖糖能能将将试试剂剂中中高高价价铜铜还还原原为为低低价价铜铜（黄黄红红色色沉沉淀淀），冷冷却却后后加加入入砷砷钼钼酸酸试试剂剂，低低价价铜铜使使砷砷钼钼酸酸定定量量还还原原为蓝色物质，可用分光光度法测定。为蓝色物质，可用分光光度法测定。讨论：方法讨论：方法1和和2未在文献中列出，但未在文献中列出，
16、但3种方法均为氧种方法均为氧化性气氛，且氧化还原定量。由于预处理后其他还原化性气氛，且氧化还原定量。由于预处理后其他还原性物质已很少，使用方法性物质已很少，使用方法1和和2不应产生干扰，故作为不应产生干扰，故作为参考方法列出。参考方法列出。 总结 从从以以上上实实例例我我们们可可以以看看到到分分光光光光度度法法以以其其较较高高的的灵灵敏敏度度，较较方方便便快快捷捷的的操操作作，较较高高的的准准确确度度，而而广广泛泛应应用用于于微微量量测测定定中中，并并可可作作为为准准确确可可靠靠的的测测定定方方法法（在在磷磷和和葡葡萄萄糖糖的的测测定定中中即即如如此此），实实际际上上大大部部分分生生化化检检验
17、验都都以以分分光光光光度度法法作作为为测测定定方方法法。而而在在微微量量分分析析中中容容量量分分析析法法依依然然有有十十分分重重要要的的意意义义，常常作作为为标标准准方方法法校校验验其其他他方方法法的的准准确确性性，标标定定标标准准试试样样（凯凯氏氏定定氮氮法法），有有时时还还以以它它的的简简便便准准确确有有着着比比分分光光光光度度法法更更广广范的运用（氯离子测定中的汞滴定法）。范的运用（氯离子测定中的汞滴定法）。 参考书目 临床生化检验临床生化检验 上海市医学化验所上海市医学化验所 上海科学技术出版社上海科学技术出版社 医学生化检验手册医学生化检验手册 崔福生崔福生 天津科学技术出版社天津科学技术出版社现代临床生化检验学现代临床生化检验学 张秀明张秀明 人民军医出版社人民军医出版社定量化学分析简明教程定量化学分析简明教程 胡崇慧胡崇慧 冯建章冯建章 张锡瑜张锡瑜 李克安李克安 赵凤林赵凤林 北京大学出版社北京大学出版社
