吸光光度法PPT课件

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1、刘刘 海海 燕燕吸光光度法吸光光度法一一. 概述概述1. 方法原理方法原理2. 方法分类和比较方法分类和比较3. 方法评价方法评价二二.吸光光度法原理吸光光度法原理1. 物质对光的选择性吸收物质对光的选择性吸收2. 光的吸收定律光的吸收定律(1) Lambert-Beer定律定律(2) 吸光度光度法吸光度光度法(3) 偏离光吸收定律的原因偏离光吸收定律的原因三三. 仪器和方法仪器和方法 四四. 显色反应和显色条件的选择显色反应和显色条件的选择五五.测定条件的选择测定条件的选择六六.具体应用具体应用3一一. 概述概述阳光阳光棱镜棱镜连续光谱连续光谱物质物质不连续光谱不连续光谱吸光光度法吸光光度法

2、:基于基于物质对光的选择性吸收物质对光的选择性吸收而建立的分析方法而建立的分析方法由两种或两种以上波长的光所组成由两种或两种以上波长的光所组成复合光复合光分类分类：吸光光度分析法根据物质所吸收光的：吸光光度分析法根据物质所吸收光的波长范围不同，分为紫外、可见及红外分光波长范围不同，分为紫外、可见及红外分光光度法。光度法。4方法原理方法原理浓度浓度 ， 吸收光程度吸收光程度 ，呈现颜色，呈现颜色 。通过比较颜色深浅，测定物质的浓度通过比较颜色深浅，测定物质的浓度方法分类和比较方法分类和比较1010-5 -5 10 10-6-6 mol mol L L-1-11010-5-5 10 10-8-8

3、mol mol L L-1-1比色分析法比色分析法分光光度法分光光度法测定下限测定下限相对误差相对误差5% 10%5% 10%2% 5%2% 5%适用于分析半微量和微量的物质适用于分析半微量和微量的物质深深一一. 概述概述5方法的评价方法的评价适用面广适用面广快速、快速、简便简便分析有色、无色、浅色物分析有色、无色、浅色物溶液状态、均质固态样品溶液状态、均质固态样品灵敏度高：灵敏度高：浓度下限达浓度下限达10-510-8 molL-1准确度高：相对误差通常为准确度高：相对误差通常为25，显色显色 比色比色一一. 概述概述用于化学平衡等的研究用于化学平衡等的研究6黄黄绿绿青青青蓝青蓝蓝蓝紫紫红红

4、橙橙互补光的对应关系互补光的对应关系光的互补：蓝光的互补：蓝黄黄可见光区的划分可见光区的划分 :400 450 500 550 600 650 760/nm二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理1.可见光与颜色可见光与颜色7物质的颜色物质的颜色吸收光吸收光 颜色颜色波长范围波长范围(nm)黄绿黄绿黄黄橙橙红红紫红紫红紫紫蓝蓝绿蓝绿蓝蓝绿蓝绿紫紫蓝蓝绿蓝绿蓝蓝绿蓝绿绿绿黄绿黄绿黄黄橙橙红红400-450450-480480-490490-500500-560560-580580-600600-650650-750 互互 补补 色色82. 物质对光的选择性吸收物质对光的选择性吸收复合光

5、复合光复合光复合光吸收吸收(部分部分)光光透过光透过光全部吸收全部吸收物质呈现物质呈现 颜色颜色物质呈现无色物质呈现无色全部不吸收全部不吸收物质呈现黑色物质呈现黑色透过光透过光透过光透过光 + 吸收光吸收光 = 复合光复合光互补光互补光二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理9KMnO4的颜色及吸收光谱的颜色及吸收光谱二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理10 （2）不同浓度的同一物质吸收曲线形状相似）不同浓度的同一物质吸收曲线形状相似, max 不变不变;而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和max则不同。则不同。 max有特征性，可作

6、为定性依据。有特征性，可作为定性依据。（1）同一物质对不同波长光的吸收程度不同，吸光）同一物质对不同波长光的吸收程度不同，吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长度最大处对应的波长称为最大吸收波长max;信息：信息：物质对光的选择性吸收及吸收曲线物质对光的选择性吸收及吸收曲线A C1C2max二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理113. 光吸收定律光吸收定律Lambert - Beer定律定律CbI IOO I ILambert 定律定律 :, c, T, c, T一定一定一定一定A 光程距离光程距离 (b)A 物质的浓度物质的浓度c 吸光度吸光度二二 . 吸光光度法的基本原理吸光

7、光度法的基本原理Beer定律定律 :, b, T, b, T一定一定一定一定12 Lambert - Beer定律定律光吸收定律光吸收定律A吸光度吸光度 Io 入射光强度入射光强度K吸光系数吸光系数 I透射光强度透射光强度 b光程距离光程距离 c浓度浓度 当一束平行单色光通过溶液时，溶液的当一束平行单色光通过溶液时，溶液的吸光度吸光度A与溶液的与溶液的c和和b成正比。成正比。A cb 当当 b 一定时，一定时， A c， 可以定量可以定量二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理13 吸收光吸收光 ， A ， 物质浓度物质浓度 。 注意注意 :（1） 物质不吸光，物质不吸光， I=Io

8、 ， A=0 物质吸收部分光，物质吸收部分光， IIo， A0（2） A具有加和性，具有加和性，A总总=A1+A2+ +An（3）入射光的）入射光的：可见光可见光, 紫外光紫外光, 红外光红外光（4）光吸收定律的应用条件）光吸收定律的应用条件 稀溶液稀溶液 入射光为单色光入射光为单色光二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理14（5）也可以用透射光强度（透射率）也可以用透射光强度（透射率T%）表示表示T %的含义：的含义：物质不吸收光物质不吸收光 I=Io ， T% =100%物质吸收部分光，物质吸收部分光， IIo ，T%100%物质吸收光物质吸收光 ，T% ，物质的浓度物质的浓度

9、 。二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理15（6） 吸光系数的二种表示形式吸光系数的二种表示形式浓度为浓度为1g/L的溶液，在某的溶液，在某波长时，用波长时，用1cm的比色皿，的比色皿，所测得的吸光度所测得的吸光度浓度为浓度为1mol/L的溶液，在的溶液，在某波长时，用某波长时，用1cm的比色的比色皿，所测得的吸光度皿，所测得的吸光度吸光系数吸光系数K或或a摩尔吸光系数摩尔吸光系数意义意义意义意义单位单位单位单位L/gcmL/ mol cmA=A=KcbKcb或或或或A=A=abcabcA= A= cb二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理16（1）吸收物质在一定波长

10、和溶剂下的）吸收物质在一定波长和溶剂下的特征常数特征常数；（2）不随浓度不随浓度c和光程长度和光程长度b的改变而改变的改变而改变。在温在温度和波长等条件一定时，度和波长等条件一定时，仅与吸收物质本身的性仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关；可做质有关，与待测物浓度无关；可做定型鉴定参数定型鉴定参数（3）同一吸收物质在不同波长下的）同一吸收物质在不同波长下的值是不同的。值是不同的。在最大吸收波长在最大吸收波长max处的摩尔吸收系数处的摩尔吸收系数max表明了表明了该该吸收物质最大限度的吸光能力吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。法测定该物

11、质可能达到的最大灵敏度。 摩尔吸收系数摩尔吸收系数的讨论的讨论二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理17（4）可作为）可作为定性鉴定的参数定性鉴定的参数；（5）物质的吸光能力的度量物质的吸光能力的度量 max越大表明该物质的吸光能力越强，用光越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。度法测定该物质的灵敏度越高。 105：超高灵敏；：超高灵敏； = (610）104 ：高灵敏；：高灵敏； = 104103 ：中等灵敏；：中等灵敏； 103 ：不灵敏。：不灵敏。（6） 在数值上等于浓度为在数值上等于浓度为1 mol L-1、液层厚液层厚度为度为1cm时该溶液在某一波

12、长下的吸光度。时该溶液在某一波长下的吸光度。 二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理18例例 ： 已知含已知含Fe2+=500g/L的溶液，当用邻二氮的溶液，当用邻二氮杂菲为显色剂测定铁时，用杂菲为显色剂测定铁时，用2cm比色皿，在波长比色皿，在波长508nm处测得吸光度处测得吸光度A为为0.19。请计算铁的摩尔吸。请计算铁的摩尔吸光系数。光系数。解：解：二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理19 物质对光的选择性吸收物质对光的选择性吸收 光吸收定律光吸收定律 Lambert - Beer定律定律光吸收定律光吸收定律 稀溶液稀溶液 入射光为单色光入射光为单色光A=abc

13、 = cb=Kcb20步骤步骤配制一组浓度系配制一组浓度系列的标准溶液（列的标准溶液（ci）仪器测量仪器测量一组相应的吸一组相应的吸光度值（光度值（Ai）制图（制图（ci 为为横坐标，横坐标， Ai 为纵坐标）为纵坐标）工作曲线工作曲线(1)(2) 配制样品配制样品仪器测量仪器测量相同条件相同条件Axcx查图得出查图得出cxAc Ax二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理4. 吸光度测定方法吸光度测定方法215. 偏离偏离Beer-Lanbert定律的原因定律的原因 出现的现象：出现的现象： Ac 产生原因：产生原因：a. 单色光不纯单色光不纯在高浓度端，在高浓度端，工作曲线呈弯曲

14、状。工作曲线呈弯曲状。A与与C偏离线性偏离线性现有仪器无法获得纯单色光，只能获得小现有仪器无法获得纯单色光，只能获得小范围的复合光。范围的复合光。二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理22按光吸收定律按光吸收定律:IoIo1Io2I1I2I试试样样 若若入射光包含入射光包含1和和2二种波长光二种波长光, 当照射试样后当照射试样后二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理23讨论讨论 :当为纯单色光时，当为纯单色光时，A总总=1cb当单色光不纯时，当单色光不纯时，1=21=2A总总 c线性破坏线性破坏结论：结论：单色光纯度越差，线性越差单色光纯度越差，线性越差1=21=2二二

15、 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理24减少单色光不纯引起偏差方法减少单色光不纯引起偏差方法 在在 maxmax处测量处测量 选用谱带a的复合光进行测量，得到右图的工作曲线，A与c基本呈直线关系。 选用谱带b的复合光进行测量， 的变化较大，则A随波长的变化较明显，得到的工作曲线明显偏离线性。1 1= =2 2 但但但但 A Ab b A Aa a 0 0在在在在 maxmax 处处处处单色光不纯单色光不纯单色光不纯单色光不纯但但但但 测量误差较测量误差较测量误差较测量误差较小小小小25 A2 A1 在低浓度范围内，不发生偏离。若浓度较高，即使 很小， A总 1 ，且随着c值增大， A

16、总 与A 1的差异愈大，表现为A-c曲线上部(高浓度区)弯曲愈严重。故朗伯-比耳定律只适用于稀溶液。为克服非单色光引起的偏离，首先应选择比较好的单色器。此外还应将入射波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸收曲线较平坦处。26b. 溶液本身引起的偏差溶液本身引起的偏差1）朗伯比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用；仅在稀溶液(c10 -2 mol L-1时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。 故：朗伯比耳定律只适用于稀溶液。2)溶液以胶体、乳浊、悬浮状态存在时，溶液以胶体、乳浊、悬浮状态存在时，有反射、散射作用有反射、散射作用二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法

17、的基本原理27例例 :( (橙色橙色橙色橙色) )( (黄色黄色黄色黄色) )max=450nmA总总包括离解、缔合、生成新物质、形成异构体包括离解、缔合、生成新物质、形成异构体使原物质浓度改变使原物质浓度改变吸光度值变化吸光度值变化产生偏离产生偏离pH ， 平衡平衡 移移, c. 溶液内部的化学变化溶液内部的化学变化二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理28目视比色法目视比色法C1C 2C 3C 4C 5Fe(SCN)n3-n配制一组标准浓度系列配制一组标准浓度系列C x三三. 仪器和方法仪器和方法29分光光度法分光光度法 :仪器仪器分光光度计分光光度计基本组成：基本组成：光源单

18、色器样品室显示器检测器三三. 仪器和方法仪器和方法30 光源光源 (钨灯、氢灯、氘灯）钨灯、氢灯、氘灯）能发射紫外光区或可见光谱区的连续光谱；能发射紫外光区或可见光谱区的连续光谱；足够的辐射强度、稳定性较好、使用寿命较长足够的辐射强度、稳定性较好、使用寿命较长基本要求基本要求 :常用的光源常用的光源 :可见光区可见光区: 钨灯钨灯 (辐射波长为辐射波长为320nm2500nm)紫外区紫外区: 氢灯、氘灯氢灯、氘灯(辐射波长为辐射波长为185nm400nm)三三. 仪器和方法仪器和方法31 单色器单色器作用作用 :将光源发射的复合光分解成单色光的光学系统将光源发射的复合光分解成单色光的光学系统1

19、. 滤光片滤光片-光电比色计的单色器光电比色计的单色器光电比色计的单色器光电比色计的单色器选择的原则选择的原则：滤光片滤光片最易通过的光是最易通过的光是有色溶液有色溶液 最易吸收的光最易吸收的光组成：组成：由有色玻璃制成由有色玻璃制成作用：作用：只允许和它只允许和它颜色相同颜色相同的光通过，得的光通过，得 到的是近似的单色光到的是近似的单色光互补色互补色（滤光片、棱镜或光栅）（滤光片、棱镜或光栅）三三. 仪器和方法仪器和方法32组成组成 :入射狭缝：入射狭缝：光源的光由此进入单色器光源的光由此进入单色器准光装置：准光装置：透镜或反射镜透镜或反射镜使入射光成为平行光束使入射光成为平行光束聚焦装置

20、：聚焦装置：将分光后的单色光聚焦至出射狭缝将分光后的单色光聚焦至出射狭缝 （透镜或凹面镜）透镜或凹面镜）透镜或凹面镜）透镜或凹面镜）色散元件：色散元件：将复合光分解成单色光将复合光分解成单色光2. 棱镜或光栅棱镜或光栅-分光光度计的单色器分光光度计的单色器分光光度计的单色器分光光度计的单色器由由棱镜棱镜或或光栅光栅等色散元件及狭缝和透镜等组成等色散元件及狭缝和透镜等组成三三. 仪器和方法仪器和方法33 样品室样品室用于放置各种类型的吸收池用于放置各种类型的吸收池(比色皿比色皿)和相和相应的池架附件应的池架附件（石英池和玻璃池）（石英池和玻璃池）三三. 仪器和方法仪器和方法厚度厚度(光程光程):

21、 0.5, 1, 2, 3, cm石英或玻璃池，紫外区一定要用石英池36检测系统检测系统 光电管或光电倍增管光电管或光电倍增管 将光强度转换成电流来进行测量。光电检测器。将光强度转换成电流来进行测量。光电检测器。要求：对测定波长范围内的光有快速、灵敏的响应，要求：对测定波长范围内的光有快速、灵敏的响应， 产生的光电流应与照射于检测器上的光强度成正比。产生的光电流应与照射于检测器上的光强度成正比。(1)光电管光电管三三. 仪器和方法仪器和方法37(2)光电二极管阵列光电二极管阵列通过测量整个波长范围内光强的变化得到吸收光谱。可构成多通道并行工作，同时检测全部波长的信号，然后，对二极管阵列快速扫描

22、采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。三三. 仪器和方法仪器和方法38显示器显示器由检流计、数字显示、微机组由检流计、数字显示、微机组成的自动控制和结果处理系统成的自动控制和结果处理系统三三. 仪器和方法仪器和方法39 四、显色反应和显色条件的选择四、显色反应和显色条件的选择1.显色剂作用显色剂作用 2. 显色反应的选择显色反应的选择3. 影响显色反应的因素影响显色反应的因素4. 显色剂的分类显色剂的分类401.显色剂作用显色剂作用无色或浅色无色或浅色试样试样有色物有色物+显色剂显色剂比色比色显色反应显色反应配合反应配合反应氧化还原反应氧化还原反应缩合反应缩合反应重氮化重氮化偶氮化反

23、应偶氮化反应 四、显色反应和显色条件的选择四、显色反应和显色条件的选择412.显色反应的选择显色反应的选择(1)灵敏度高灵敏度高 =104105(2) 选择性好选择性好(3) 有色物组成恒定，化学性质稳定有色物组成恒定，化学性质稳定(4) 显色剂在测定波长处无明显吸收显色剂在测定波长处无明显吸收对比度对比度=max有色物有色物 -max显色剂显色剂60nm 四、显色反应和显色条件的选择四、显色反应和显色条件的选择423.影响显色反应的因素影响显色反应的因素(1) 显色剂用量显色剂用量根据吸光度根据吸光度A与显色剂浓度与显色剂浓度cR的关系来确定的关系来确定cR选择选择引起引起A变化最小处的变化

24、最小处的cR（即曲线平坦处）即曲线平坦处）M + R MR 四、显色反应和显色条件的选择四、显色反应和显色条件的选择43例：例：Fe(ssal)+ 紫红色紫红色pH=1.82.5pH=48Fe(ssal)-2 橙红色橙红色pH=811.5Fe(ssal) 3 3- 黄色黄色（3）显色时间和温度）显色时间和温度由实验得出由实验得出（4）溶剂）溶剂一般选择水作溶剂一般选择水作溶剂(2) 显色溶液的显色溶液的pH值值 测定不同测定不同pH值下，显色溶液的吸光度值下，显色溶液的吸光度A，以，以A为纵坐标，为纵坐标，pH为横坐标，制图。为横坐标，制图。选择曲线平坦处选择曲线平坦处pH 四、显色反应和显色

25、条件的选择四、显色反应和显色条件的选择44(5) 共存离子的干扰共存离子的干扰 可能存在的几种情况：可能存在的几种情况：本身有颜色本身有颜色 与显色剂反应生成有色物与显色剂反应生成有色物消除的方法：消除的方法： 四、显色反应和显色条件的选择四、显色反应和显色条件的选择共存离子共存离子 加入配位掩蔽剂或氧化还原掩蔽剂加入配位掩蔽剂或氧化还原掩蔽剂 使干扰离子生成无色配合物或无色离子 选择适当的显色条件以避免干扰选择适当的显色条件以避免干扰 用磺基水杨酸测定Fe3+离子时,Cu2+与试剂形成黄色络合物, 干扰测定，但如控制pH在2.5左右，Cu2+则不与试剂反应。 分离干扰离子分离干扰离子45显色

26、剂的种类显色剂的种类 :无机显色剂无机显色剂过氧化氢过氧化氢钼酸铵钼酸铵硫氰酸盐等硫氰酸盐等有机显色剂有机显色剂生色基团：偶氮基、硫羰基、亚硝基等生色基团：偶氮基、硫羰基、亚硝基等助色基团：含胺基、羟基等助色基团：含胺基、羟基等 四、显色反应和显色条件的选择四、显色反应和显色条件的选择产物不稳定，灵敏度和选择性不高，应用不多生成稳定的螯合物，灵敏度和选择性较高，广泛应用。461. 入射光波长的选择入射光波长的选择2. 参比溶液的选择参比溶液的选择 3. 读数范围的选择读数范围的选择五五. 测量条件的选择测量条件的选择471. 入射光波长的选择入射光波长的选择 :一般选择最大吸收波长一般选择最大

27、吸收波长max若有干扰按实际情况而定若有干扰按实际情况而定波长选择适当，可提高灵敏度和准确性波长选择适当，可提高灵敏度和准确性原则：原则： 吸收最大，干扰最小，选择平吸收最大，干扰最小，选择平坦处坦处五五. 测量条件的选择测量条件的选择48l如果max处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。l 如图选500nm波长测定，灵敏度虽有所下降，却消除了干扰，提高了测定的准确度和选择性。五五. 测量条件的选择测量条件的选择492.参比溶液的选择参比溶液的选择为了使光强度的减弱仅与溶液中待测物质的浓度有关，为了使光强度的减弱仅与溶液中待测物质的浓度有关，必须对反射以及溶剂、试

28、剂等对光的吸收进行校正。必须对反射以及溶剂、试剂等对光的吸收进行校正。（在测定波长处）（在测定波长处）（在测定波长处）（在测定波长处）溶剂空白溶剂空白溶剂空白溶剂空白试样空白试样空白试样空白试样空白试剂空白试剂空白试剂空白试剂空白试样试样试样试样+ +掩蔽剂掩蔽剂掩蔽剂掩蔽剂+ +显色剂显色剂显色剂显色剂无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色有色有色有色有色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色略有略有略有略有略有略有略有略有试样试样试样试样显色剂显色剂显色剂显色剂其他试剂其他试剂其他试剂其他试剂参比溶液参比溶液参比溶液参比溶液有色有色有色有色有色有色有色有色其他组其他组其

29、他组其他组分分分分有色有色有色有色五五. 测量条件的选择测量条件的选择为何要使用参比溶液？为何要使用参比溶液？选择的原则选择的原则将待测组分掩蔽503. 读数范围的选择读数范围的选择选择的原因选择的原因 :因为吸光度（透光度）刻度时的误差因为吸光度（透光度）刻度时的误差（A的标尺是对数标尺，刻度不均匀）。的标尺是对数标尺，刻度不均匀）。（bc）浓度相对误差浓度相对误差浓度相对误差浓度相对误差透光度读数绝对误差透光度读数绝对误差透光度读数绝对误差透光度读数绝对误差五五. 测量条件的选择测量条件的选择51结论结论 ：T%=10%70%（A=0.151.0）不同透光度的相对误差（不同透光度的相对误差

30、（ T=1T=1）T% T% T% T% T% T% 95 20.8 60 3.3 20 3.295 20.8 60 3.3 20 3.290 10.7 50 2.9 10 4.390 10.7 50 2.9 10 4.380 5.6 40 2.7 5 6.780 5.6 40 2.7 5 6.770 4.0 30 2.8 1 22.070 4.0 30 2.8 1 22.0透光度透光度T（A）的读数范围为：的读数范围为：52T=1由读数引起的由读数引起的浓度相对误差浓度相对误差最小最小Tmin= 36.8%Amin=0.434T与浓度读数误差的关系曲线与浓度读数误差的关系曲线 ：36.8%3

31、6.8%五五. 测量条件的选择测量条件的选择531. 单组分含量测定单组分含量测定3. 高含量的组分测定高含量的组分测定示差法示差法六六. 具体应用具体应用2. 多组分含量测定多组分含量测定541、单组分含量的测定、单组分含量的测定A Ac/ c/molLmolL-1-1A Ax xc cx x步骤步骤:注意注意 :标准溶液和样品的配制方法，工作曲线的制作和样标准溶液和样品的配制方法，工作曲线的制作和样品测定时，所使用的仪器、条件必须一致。品测定时，所使用的仪器、条件必须一致。C1 A A测量测量六六. 具体应用具体应用1）选择）选择显色反应显色反应2）选择显色剂选择显色剂3）优化显色反应条件

32、）优化显色反应条件4）选择检测波长）选择检测波长5）选择合适的浓度）选择合适的浓度6）选择参比溶液）选择参比溶液7）建立标准曲线）建立标准曲线8）样品测定）样品测定吸收曲线吸收曲线标准曲线标准曲线552、 多组分含量的测定多组分含量的测定多组分样品的吸收曲线有三种情况多组分样品的吸收曲线有三种情况I. 各组分吸收曲线的各组分吸收曲线的max互不干扰互不干扰在各自的在各自的max处处,按单组分的测定方法进行测定按单组分的测定方法进行测定A1=1 b caA2=2 b cb六六. 具体应用具体应用56 II. a组分的组分的1处，处，b组分无干扰，但组分无干扰，但 b组组 分分的测量的测量2处，处

33、，a组分有吸收组分有吸收A1=1cab A2=2cab+2cbbIII. 各组分吸收曲线的各组分吸收曲线的max互有干扰互有干扰A1=1cab +1cbbA2=2cab +2cbb六六. 具体应用具体应用573. 高含量的组分测定高含量的组分测定示差法示差法 ：普通分光光度法普通分光光度法 :适宜于测定微量组分适宜于测定微量组分示差分光光度法示差分光光度法 :要求要求:a. 入射光强度较大入射光强度较大b. 参比溶液参比溶液 选用浓度稍低于被测溶液浓度的标准溶液选用浓度稍低于被测溶液浓度的标准溶液可用于测定高含量组分可用于测定高含量组分六六. 具体应用具体应用58原理原理: 设被测液浓度为设被

34、测液浓度为cx ，标准溶液浓度为标准溶液浓度为cs，并，并cxcs 。Ax=b cxAs=b csAr=Ax-As=b（cx-cs）= bc故示差法测得的（故示差法测得的（Ar）= 普通法中（普通法中（Ax-As）被测液被测液cx=标准曲线上查得的标准曲线上查得的c + csArc呈线性关系呈线性关系lgTxlgTsTr:相对透光度相对透光度六六. 具体应用具体应用A Ar r：相对相对吸光度吸光度吸光度吸光度59 普通法：普通法：若标准溶液若标准溶液(cs)的透光度的透光度Ts=10%， 被测溶液被测溶液(cx)的透光度的透光度Tx=5% 示差法：示差法：示差法：示差法：以标准溶液（以标准溶液（cs）为参比溶液，为参比溶液，调节透光度调节透光度T=100%，所以测得所以测得cx所对应的所对应的Tx=50%；使标尺扩展了使标尺扩展了使标尺扩展了使标尺扩展了1010倍，读数落入适宜读数范围内，提高了倍，读数落入适宜读数范围内，提高了倍，读数落入适宜读数范围内，提高了倍，读数落入适宜读数范围内，提高了测量的准确度。测量的准确度。测量的准确度。测量的准确度。60预习：预习：原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法作业：作业：p.271习题习题1、2、4、7、1361