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1、TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTDTIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTDqPCRqPCR系统系统“从从RNA提取到荧光定量提取到荧光定量PCR”解决方案解决方案1内容概要内容概要1荧光定量荧光定量PCR的原理的原理1荧光定量荧光定量PCR的标记方法的标记方法1荧光定量荧光定量PCR解析方法解析方法1 SYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项1 TIANGEN公司荧光定量产品选择指南公司荧光定量产品选择指南实时定量实时定量PCR技术：技术：利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线
2、的关系对起始模板进行定量分析与常规与常规 PCR技术比较：技术比较：对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析，无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测荧光定量荧光定量PCR原理原理定义定义+ 扩增曲线扩增曲线+ 荧光阈值荧光阈值+ Ct值值荧光定量荧光定量PCR原理原理常用名词概念常用名词概念Cycle（循环数）（循环数）Rn（荧光强度）（荧光强度）BaselineLgliner phase平台期平台期荧光基团荧光检测元件荧光定量荧光定量PCR原理原理扩增曲线扩增曲线Cycle（循环数）（循环数）Rn（荧光强度）（荧光强度）BaselineLgliner phase1前15个循环信号
3、作为荧光本底信号（baseline）1荧光阈值的缺省设置是315个循环的荧光信号的标准偏差的10倍1手动设置：大于荧光背景值和阴性对照的荧光最高值；进入指数期的最初阶段1真正的信号:荧光信号超过阈值Threshold荧光定量荧光定量PCR原理原理荧光阈值荧光阈值平台期平台期Ct值的定义：值的定义： PCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数Cycle（循环数）（循环数）Rn（荧光强度）（荧光强度）Ct value 荧光定量荧光定量PCR原理原理CtCt值值横轴：横轴：PCR反映循环数反映循环数纵纵轴轴：荧荧光光信信号号量量CtCt值的特点：值的特点：相同模板进行9
4、6次扩增，终点处产物量不恒定；Ct值极具重现性Ct值的重现性值的重现性理想的PCR反应XnX02n*Xn：第：第n次循环后扩增产物数量次循环后扩增产物数量X0 ：起始模板数量：起始模板数量n：扩增循环数：扩增循环数荧光定量荧光定量PCR原理原理CtCt值定量的数学原理值定量的数学原理非理想的PCR反应XnX0（1En）n*Xn：第：第n次循环后扩增产物数量次循环后扩增产物数量X0 ：起始模板数量：起始模板数量n：扩增循环数：扩增循环数En：扩增效率：扩增效率荧光定量荧光定量PCR原理原理CtCt值定量的数学原理值定量的数学原理在扩增产物达到荧光阈值时XCtX0（1En）CtM（1）*XCt ：
5、荧光扩增信号达到阈值时扩增产物的量，在阈值设定以后，它是一个常数，定为：荧光扩增信号达到阈值时扩增产物的量，在阈值设定以后，它是一个常数，定为M方程式（1）两边同取对数得：Log2MLog2X0*（1En）Ct（2）整理方程式（2）：Log2X0Log2MCtLog2（1En）荧光定量荧光定量PCR原理原理CtCt值定量的数学原理值定量的数学原理Cycle numberCk104Ck102SampleLgofDNAconcentration0模板DNA量越多，荧光达到阈值的循环数越少，即Ct值越小。0Log模板起始浓度与Ct值呈线性关系。荧光定量荧光定量PCR原理原理CtCt值与模板起始量的关
6、系值与模板起始量的关系线性关系、扩增效率确认线性关系、扩增效率确认检测灵敏度确认检测灵敏度确认No template controlNo template control确认确认标准曲线斜率标准曲线斜率: -3 : -3 -3.5-3.535Cycles35Cycles内可得到好的定量结果内可得到好的定量结果如果采用如果采用SYBRSYBR检测方法，检测方法，30Cycles30Cycles内无非特异性产物扩增内无非特异性产物扩增35 Cycles35 Cycles内无引物二聚体产生内无引物二聚体产生相关系数（相关系数（R R2 2）：大于）：大于0.980.98荧光定量荧光定量PCR反应性的
7、确认反应性的确认PCRPCR扩增效率（扩增效率（E E）:0.9-1.2:0.9-1.2内容概要内容概要1荧光定量荧光定量PCR的原理的原理1荧光定量荧光定量PCR的标记方法的标记方法1荧光定量荧光定量PCR解析方法解析方法1 SYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项1 TIANGEN公司荧光定量产品选择指南公司荧光定量产品选择指南非特异性荧光标记非特异性荧光标记 SYBRGreenI特异性荧光标记特异性荧光标记TaqManProbe常用荧光标记方法常用荧光标记方法SYBR Green I染料法染料法原理原理SYBRGreenI是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长
8、的染料。SYBR Green ISYBR Green ISYBR Green ISYBR Green I热热热热 变变变变 性性性性引物退火引物退火引物退火引物退火延伸反应延伸反应延伸反应延伸反应SYBR Green I 染料法染料法作用机理作用机理问题点：问题点： SYBR Green I与双链与双链DNA进行结合后散发荧光，因此如进行结合后散发荧光，因此如 果反应体系中有非特异性扩增或引物二聚体的产生，也将果反应体系中有非特异性扩增或引物二聚体的产生，也将 同时被检测，从而可能导致检测结果不准确。同时被检测，从而可能导致检测结果不准确。SYBR Green I染料法染料法问题点与关键点问题
9、点与关键点关键点：关键点： 设计合适引物，防止非特异性扩增！设计合适引物，防止非特异性扩增！将温度与荧光强度的变化求导将温度与荧光强度的变化求导将温度与荧光强度的变化求导将温度与荧光强度的变化求导 (-dI/dT)(-dI/dT)原始图谱原始图谱对数图谱对数图谱SYBR Green I染料法染料法融解曲线融解曲线融解曲线分析，单一峰融解曲线分析，单一峰无非特异性荧光无非特异性荧光定量准确定量准确融解曲线分析，出现杂峰融解曲线分析，出现杂峰其他产物出现非特异性荧其他产物出现非特异性荧光，因此定量不准确光，因此定量不准确SYBR Green I染料法染料法融解曲线融解曲线% 使用方便，不必设计复杂
10、使用方便，不必设计复杂 探针探针% 具有价格优势具有价格优势优优 点点% 无模板特异性无模板特异性% 对引物特异性要求较高对引物特异性要求较高% 不能进行多重定量不能进行多重定量% 灵敏度相对较低灵敏度相对较低缺缺 点点SYBR Green I染料法染料法优缺点优缺点Taqman探针法探针法原理原理+ 5端标记有报告基团(Reporter,R)，如FAM、VIC等+3端标记有荧光淬灭基团(Quencher,Q)+探针完整，R发射的荧光能量被Q基团吸收，无荧光，R与Q分开，发荧光+Taq酶有53外切核酸酶活性，可水解探针Taqman探针法探针法工作机理工作机理热变性热变性热变性热变性引物和探针与
11、模板退火引物和探针与模板退火引物和探针与模板退火引物和探针与模板退火延伸反应延伸反应延伸反应延伸反应探针探针探针探针报告基团报告基团报告基团报告基团淬灭基团淬灭基团淬灭基团淬灭基团探针探针探针探针DNADNADNADNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶引物引物引物引物R RR RR RR R1、引物、探针的设计：、引物、探针的设计：探针Tm为68-70，30bp,5不能有G，G可能会淬灭荧光素，引物尽量靠近探针，扩增片段400bp，引物Tm为59-602、反应参数的确定：、反应参数的确定：一般为：94，10-20S60，30-60S（Taq酶53外切核酸酶活性在60最高），也可通过温度梯度优化退火温度
12、3、优化引物和探针浓度：获得最小、优化引物和探针浓度：获得最小Ct值，最大信号值，最大信号/背景比值背景比值引物浓度：100-900nM探针浓度：50-300nM4、其他与常规、其他与常规PCR相同相同Taqman探针法探针法PCR体系的建立体系的建立% 高度特异性高度特异性% 重复性好重复性好% 灵敏度高灵敏度高% 可进行多重定量可进行多重定量优优 点点% 只适合一个特定的目标只适合一个特定的目标% 委托公司标记，价格较高委托公司标记，价格较高% 不易找到本底低的探针不易找到本底低的探针缺缺 点点Taqman探针法探针法优缺点优缺点+ 标记荧光的发夹探针 + 环与目标序列互补+ 茎由互补配对
13、序列组成环茎荧光素 淬灭剂实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR的分类的分类分子信标分子信标FRET实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR的分类的分类分子信标分子信标+高特异性：对目标序列+ 检测SNP最灵敏的试剂之一+荧光背景低优 点+只能用于一个特定目标+ 设计困难+ 价格比较高缺 点实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR的分类的分类分子信标分子信标 几种方法的应用比较几种方法的应用比较方法优点缺点适用范围SYBR Green I 方法适用性广灵敏方便便宜引物要求高易出现非特异性带适合科研中对各种目的基因定量分析，基因表达量的研究，转基因重组动植物的研究TaqMan 方法特异性高重复性好价格高只
14、适合特定目标病原体检测，疾病耐药基因研究,药物疗效考核遗传疾病的诊断Molecular Beacon法(分子信标)高特异性荧光背景低只适合特定目标设计困难价格高特定基因分析SNP分析.定性分析研究：定性分析研究：杂合或纯合子鉴定，（SNPs）分析等.绝对定量研究：绝对定量研究：病毒和病原菌定量分析，基因拷贝数定量，GMO定量检测等.相对定量研究：相对定量研究：mRNA表达量分析，siRNA效果确认，差异显示结果验证等荧光定量荧光定量PCR技术的应用技术的应用内容概要内容概要1荧光定量荧光定量PCR的标记方法的标记方法1荧光定量荧光定量PCR的原理的原理1荧光定量荧光定量PCR解析方法解析方法1
15、 SYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项1 TIANGEN公司荧光定量产品选择指南公司荧光定量产品选择指南 绝对定量解析方法绝对定量解析方法Sample25绝对定量的定义绝对定量的定义0Log（起始浓度）与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,即得到该扩增反应存在的线性关系0根据样品Ct值，就可以计算出样品中所含的模板量一个目的基因即需要确定其量值的核酸序列。一组标准样本用来生成标准曲线。可以是含有目的基因的质粒、PCR产物、基因组DNA等。重复反应孔建议每个样本使用三个或更多重复反应，以确保统计显著性。标记方法的选择SYBRGreen法或探针法均可。实验结果显
16、示扩增曲线；标准曲线；融解曲线（探针法不需要）。绝对定量分析几要素绝对定量分析几要素质粒标准品的制备质粒标准品的制备PCRPCR目的基因克隆目的基因克隆质粒提取，质粒提取，质粒提取，质粒提取，ODODODOD值定量，将质粒梯度稀释作为标准品使用值定量，将质粒梯度稀释作为标准品使用值定量，将质粒梯度稀释作为标准品使用值定量，将质粒梯度稀释作为标准品使用目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因质粒质粒目的基因目的基因目的基因目的基因基因组基因组DNADNA拷贝数的计算：拷贝数的计算：待测样本浓度（ng/ul）OD26040稀释倍数样本分子量=
17、碱基数324待测样本拷贝数（copies/ul）=待测样本浓度/样本分子量61014 倍比梯度稀释方法：倍比梯度稀释方法：1v原液(标准品i)+9v稀释缓冲液，得标准品ii1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii1v标准品iii+9v稀释缓冲液，得标准品iv1v标准品iv+9v稀释缓冲液，得标准品v质粒标准品稀释方法与拷贝数计算质粒标准品稀释方法与拷贝数计算q 方方 法：法：从血液中提取病毒DNA，以TaqMan探针法进行荧光定量检测q 试试 剂：剂：TIANGEN公司探针法试剂RealMasterMix（Probe）（目录号：FP203）q 标准品：标准品：质粒标准品浓度为106、10
18、5 、104 、 103 ；2个重复；设阴性空白对照q 实验步骤：实验步骤：提取HBV DNA； 设计特异引物； 设计TaqMan探针并标记探针； 荧光定量扩增； 结果分析：获取血液样品中HBV DNA的精确copy数。绝对定量实验例绝对定量实验例乙肝病人血液中乙肝病人血液中HBVHBV的绝对定量的绝对定量SampleSamplecopies/mlcopies/mlCt1Ct1Ct2Ct2Mean CtMean CtSTDSTD标准品510328.1828.6428.410.16标准品510425.2525.1425.190.04标准品510522.1122.4622.280.12标准品510
19、618.6318.9218.770.10未知样品? ?20.5620.4520.50.05空白对照NoneNone实验数据实验数据绝对定量实验例绝对定量实验例乙肝病人血液中乙肝病人血液中HBVHBV的绝对定量的绝对定量扩增效率（扩增效率（E）计算）计算 E = 10-1/斜率 1 = 10-1/-3.29 1 = 2.011 = 1.01 标准曲线制作：标准曲线制作：利用利用Mean Ct 作图可得到标准曲线作图可得到标准曲线y = -3.29x + 40.33 R2 = 0.9978绝对定量实验例绝对定量实验例乙肝病人血液中乙肝病人血液中HBVHBV的绝对定量的绝对定量 相关系数（相关系数（
20、相关系数（相关系数（R R R R2 2 2 2）：大于）：大于）：大于）：大于0.980.980.980.98，越接近，越接近，越接近，越接近1 1 1 1，结果可信度越高。，结果可信度越高。，结果可信度越高。，结果可信度越高。 扩增效率（扩增效率（扩增效率（扩增效率（E E E E）：）：）：）：0.9-1.2, 0.9-1.2, 0.9-1.2, 0.9-1.2, 越接近越接近越接近越接近1 1 1 1，越理想。，越理想。，越理想。，越理想。 未知样品拷贝数的计算未知样品拷贝数的计算将Ct值带入线性方程：20.5= -3.29 X + 40.33QuantityUnknown=10 6.
21、03 =1,071,519 copies 绝对定量实验例绝对定量实验例乙肝病人血液中乙肝病人血液中HBVHBV的绝对定量的绝对定量X=20.5-40.33-3.29=6.03 相对定量解析方法相对定量解析方法理论上目的基因表达量分析条件理论上目的基因表达量分析条件理论上目的基因表达量分析条件理论上目的基因表达量分析条件Sample BSample BSample BSample BSample ASample ASample ASample A目的基因扩增效率相同目的基因扩增效率相同目的基因扩增效率相同目的基因扩增效率相同RNARNARNARNA提取效率相同提取效率相同提取效率相同提取效率相同
22、细胞起始数相同细胞起始数相同细胞起始数相同细胞起始数相同实际目的基因表达量分析实际目的基因表达量分析实际目的基因表达量分析实际目的基因表达量分析相对定量的必要性相对定量的必要性相对定量分析方法相对定量分析方法比较两个或两个以上样本中某个基因表达量的变化！比较两个或两个以上样本中某个基因表达量的变化！关注点：关注点：基因的相对表达量，而不是基因的绝对量！基因的相对表达量，而不是基因的绝对量！一个参照样本一个或一个以上的未知样本一个目的基因管家基因用来校对不同样本之间目的基因的实际表达量重复反应孔建议每个样本使用三个或更多重复反应，以确保统计显著性。标记方法的选择SYBRGreen法或探针法均可。
23、实验结果显示扩增曲线；标准曲线（有些分析方法不需要）；融解曲线（探针法不需要）。一组标准样本（有些分析方法不需要）相对定量分析几要素相对定量分析几要素管家基因管家基因管家基因管家基因 维持细胞基本代谢活动所必须的基因维持细胞基本代谢活动所必须的基因维持细胞基本代谢活动所必须的基因维持细胞基本代谢活动所必须的基因, , , , 如：如：如：如：GAPDHGAPDHGAPDHGAPDH、ActinActinActinActin、18S rRNA18S rRNA18S rRNA18S rRNA等等等等筛选方法筛选方法筛选方法筛选方法 根据文献提供根据文献提供根据文献提供根据文献提供 通过具体实验筛选
24、通过具体实验筛选通过具体实验筛选通过具体实验筛选相对定量分析相对定量分析管家基因筛选管家基因筛选0 0 0 01 1 1 12 2 2 23 3 3 34 4 4 45 5 5 56 6 6 6Sample1Sample1Sample1Sample1Sample2Sample2Sample2Sample2Sample3Sample3Sample3Sample3Sample4Sample4Sample4Sample4实验组实验组实验组实验组实验值实验值实验值实验值-Actin-Actin-Actin-ActinGAPDHGAPDHGAPDHGAPDH-2-microglobulin-2-micr
25、oglobulin-2-microglobulin-2-microglobulinHPRTHPRTHPRTHPRTPPPPPPOO 双标准曲线法双标准曲线法 2 -Ct法法 相对定量分析相对定量分析两种常用的分析方法两种常用的分析方法 通过标准曲线对对照样品、待测样品的目的基因及管家通过标准曲线对对照样品、待测样品的目的基因及管家基因进行定量，然后根据计算公式求得相对值即为相对基因进行定量，然后根据计算公式求得相对值即为相对表达量。表达量。 相对值相对值= =校正值校正值= =目的基因定量结果目的基因定量结果管家基因定量结果管家基因定量结果待测样品的校正值待测样品的校正值对照样品的校正值对照样
26、品的校正值相对定量分析相对定量分析双标准曲线法双标准曲线法公式：公式：优点：分析简单，实验优化相对简单优点：分析简单，实验优化相对简单缺点：对每一个基因，每一轮实验都必需做标准曲线缺点：对每一个基因，每一轮实验都必需做标准曲线应用：基因表达调控研究中最常用与公认的两种相对定量方法之一应用：基因表达调控研究中最常用与公认的两种相对定量方法之一相对定量分析相对定量分析双标准曲线法双标准曲线法检测样品检测样品管家基因管家基因H H目的基因目的基因X X定量结果定量结果定量结果定量结果校正值校正值相对量相对量对照样品对照样品6391.56391.5343.4343.40.05370.05371.000
27、1.000待测样品待测样品1 18589.78589.717.317.30.00200.00200.0370.037待测样品待测样品2 27432.97432.91946.11946.10.26180.26184.8744.874实验数据实验数据相对定量分析相对定量分析2 2 法法CtCtX T 是目标分子达到设定的阈值时的分子数是目标分子达到设定的阈值时的分子数RT是内参分子达到设定的阈值时的分子数是内参分子达到设定的阈值时的分子数 假设目标序列与内参序列扩增效率相同假设目标序列与内参序列扩增效率相同： 或或最后用任一样本最后用任一样本 q 的的 X N 除以参照因子（除以参照因子（ cal
28、ibrator ， cb ）的）的 X N 得到：得到： 对于一个少于对于一个少于 150bp 的扩增片断而言，如果的扩增片断而言，如果 Mg 2+ 浓度、引物都进行了适当的优化，扩增效率浓度、引物都进行了适当的优化，扩增效率接近于接近于 1 。因此目标序列的量通过内均一化处理之后相对于参照因子而言就是：。因此目标序列的量通过内均一化处理之后相对于参照因子而言就是： 公式：公式：F = 2相对定量分析相对定量分析2 2 法法优点：无需作标准曲线优点：无需作标准曲线缺点：假定扩增效率为缺点：假定扩增效率为 100 %； 假定标准曲线及每次扩增之际间的效率都保持一致；假定标准曲线及每次扩增之际间的
29、效率都保持一致； 实验条件优化较为复杂。实验条件优化较为复杂。应用：基因表达调控研究中最常用与公认的两种相对定量方法之一应用：基因表达调控研究中最常用与公认的两种相对定量方法之一 待测组目的基因平均Ct值待测组内参基因平均Ct值对照组目的基因平均Ct值对照组内参基因平均Ct值CtCt实验数据：实验数据：Sample 处理前 处理后 Jun(MeanCt)GAPDH(MeanCt)E18161717.41.951.952 - Ct法：法：假设目的基因和参照基因扩增效率都接近假设目的基因和参照基因扩增效率都接近100%Ct（处理前）18171 Ct（处理后）1617.4=1.4Ct=Ct（处理后）
30、Ct（处理前）1.412.4比率（处理后/处理前）=2Ct2（2.4） = 5.3 所以所以JunJun基因在处理后表达水平是处理前的基因在处理后表达水平是处理前的5.35.3倍倍修正方法：如果我们知道目标基因和参照基因有相同的扩增效率，但扩增效率不等于修正方法：如果我们知道目标基因和参照基因有相同的扩增效率，但扩增效率不等于2，那么，那么2Ct可以修正为：可以修正为：ECt，例如扩增效率为，例如扩增效率为1.95，那么计算公式可修正为，那么计算公式可修正为1.95Ct相对定量分析相对定量分析2 -Ct2 -Ct法法内容概要内容概要1荧光定量荧光定量PCR的标记方法的标记方法1荧光定量荧光定量
31、PCR的原理的原理1荧光定量荧光定量PCR解析方法解析方法1 SYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项1 TIANGEN公司荧光定量产品选择指南公司荧光定量产品选择指南SYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项样品制备样品制备定量体系配备定量体系配备引物设计引物设计反应条件优化反应条件优化浓度确定浓度确定技能要求技能要求环境要求环境要求误差控制误差控制数据分析数据分析仪器介绍仪器介绍RT上机上机反应体系优化反应体系优化试剂选择试剂选择分析方法分析方法样品制备样品制备环境要求环境要求定量体系配备定量体系配备数据分析数据分析RT上机上机浓度确定浓度确定SYBR法实验流程及注意事项法实
32、验流程及注意事项无RNase环境使用无RNase耗材专用RNase-free工具纯度高、完整性好的纯度高、完整性好的纯度高、完整性好的纯度高、完整性好的RNARNARNARNA分光光度计检测电泳检测RT反应体系优化反应体系优化试剂选择试剂选择样品制备样品制备定量体系配备定量体系配备数据分析数据分析上机上机AMVM-MLVQuant下游反应数确定反转录体积引物的选择高效、全长的高效、全长的高效、全长的高效、全长的cDNAcDNAcDNAcDNASYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项定量体系配备定量体系配备引物设计引物设计浓度确定浓度确定环境要求环境要求误差控制误差控制RT样品制备样品制
33、备数据分析数据分析上机上机核酸制备区反应液制备区制作标准曲线设定浓度区间使用mix降低系统误差设置重复（3次）设置空白和阴性对照均一的反应液和模板混合物均一的反应液和模板混合物均一的反应液和模板混合物均一的反应液和模板混合物GC：5060Tm：5065单个碱基重复4个无二级结构扩增长度：100200bp反应体系优化反应体系优化上机上机反应条件优化反应条件优化RT样品制备样品制备模板准备模板准备数据分析数据分析退火温度优化：梯度PCR延伸时间：产物长度决定反应体积5ul，推荐2050ul引物浓度优化，模板量优化Mg2调节，酶活调节扩增效率：90110重复性：std0.2标准曲线：R0.99或R2
34、 0.98SYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项标准品待测样本阳性对照阴性对照技能要求技能要求误差控制误差控制仪器介绍仪器介绍上机上机试剂选择试剂选择RT样品制备样品制备模板准备模板准备数据分析数据分析自配realmastermixRCHO-Lightcycler seriesROTOGEN-RG seriesBIO-RAD Opticon seriesABI-7seriesBioerLinegene series分装控制内参控制机器校正控制平滑曲线，重复性好，灵敏度高平滑曲线，重复性好，灵敏度高平滑曲线，重复性好，灵敏度高平滑曲线，重复性好，灵敏度高SYBR法实验流程及注意事项法实
35、验流程及注意事项数据分析数据分析仪器介绍仪器介绍分析方法分析方法上机上机RT样品制备样品制备模板准备模板准备相对定量：2Ct法绝对定量：标准曲线法可靠，准确的数据可靠，准确的数据可靠，准确的数据可靠，准确的数据SYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项ABI 7500ABI StepOneRoche Lightcycler 1.5Roche Lightcycler 480CorbettRotor-gene3000CorbettRotor-gene6000Bio-radMiniOpticon杭州博日LINE-GENEFQD-66ABio-radiQ5Stratagene Mx3005PSt
36、ratagene Mx3005PStratagene Mx3005PStratagene Mx3005PTMTMTMTM Cepheid SmartCycler内容概要内容概要1荧光定量荧光定量PCR的标记方法的标记方法1荧光定量荧光定量PCR的原理的原理1荧光定量荧光定量PCR解析方法解析方法1 SYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项1 TIANGEN公司荧光定量产品选择指南公司荧光定量产品选择指南TIANGEN公司荧光定量产品优势公司荧光定量产品优势试剂盒中使用改良后的Hotmaster Taq Polymerase，具有高效率、高灵敏度、高特异性特点多种不同的实验缓冲液，满足不同实验需求高效的Quant系列逆转录酶，满足RT需求独特的Mg2自动调节，随时保证为PCR提供最佳Mg2浓度TIANGEN公司荧光定量产品公司荧光定量产品SYBR Green法法探针法探针法FP203RealMasterMix (Probe) 以以DNA为模板为模板FP202 RealMasterMix （SYBR Green） 以以RNA为模板为模板FP302 Quant qRT-PCR(SYBR Green) KitFP303 Quant 一步法一步法qRTPCR (SYBR Green） 谢谢！
