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1、红细胞血型系统及血型检测李宝华临床根底检验学教研室红细胞血型系统主要内容：红细胞血型系统免疫学根底ABO血型系统Rh血型系统其他红细胞血型系统多凝集红细胞一、免疫学根底原理一、免疫学根底原理一一 抗原抗原antigen 免疫原免疫原(immunogen(immunogen 是可以刺激机体免疫是可以刺激机体免疫系系统统引起特异性免疫引起特异性免疫应对应对的非己物的非己物质质。它可以。它可以在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴细细胞胞结结合合, ,产产生免疫反响。生免疫反响。 完全抗原完全抗原 antigen，complete 具有免疫原性、反响原性两种性能的抗
2、原具有免疫原性、反响原性两种性能的抗原称称为为完全抗原。完全抗原。 半抗原半抗原 hapten 缺乏免疫原性而只需反响原性的抗原称缺乏免疫原性而只需反响原性的抗原称为为半抗原。半抗原。 抗原的根本特征抗原的根本特征1 1、外源性、外源性、外源性、外源性2 2、分子量大，构造复、分子量大，构造复、分子量大，构造复、分子量大，构造复杂杂杂杂3 3、特异性、特异性、特异性、特异性 免疫原性免疫原性免疫原性免疫原性 immunogenicityimmunogenicity 4 4、抗原性、抗原性、抗原性、抗原性 反响原性反响原性反响原性反响原性 specificityspecificity 抗原抗体反
3、响的特异性抗原抗体反响的特异性抗原的功能抗原的功能 抗原可以刺激缺乏此物抗原可以刺激缺乏此物质质的机体的机体发发生体液生体液免疫免疫 humoral response 或或细细胞免疫胞免疫 cell-mediated response) 反响。反响。 前者前者经过浆细经过浆细胞合成抗体保送到血液或体液胞合成抗体保送到血液或体液中；后者由淋巴中；后者由淋巴细细胞介胞介导导，出，出现现延延迟迟性超越敏反性超越敏反应应或排斥移植物的生物效或排斥移植物的生物效应应。影响抗原免疫原性的要素影响抗原免疫原性的要素种属种属间的抗原性的抗原性 同种同种间的抗原差的抗原差别 个体个体间的差的差别进入途径入途径抗
4、原分子及量的大小、抗原性的抗原分子及量的大小、抗原性的强弱及刺弱及刺激激频率率 红细胞血型抗原红细胞血型抗原 红细红细红细红细胞血型抗原分布在胞血型抗原分布在胞血型抗原分布在胞血型抗原分布在红细红细红细红细胞膜的外表胞膜的外表胞膜的外表胞膜的外表, ,有不同有不同有不同有不同的外部形状，有或没有某一个抗原成份，构成了不的外部形状，有或没有某一个抗原成份，构成了不的外部形状，有或没有某一个抗原成份，构成了不的外部形状，有或没有某一个抗原成份，构成了不同的血型。同的血型。同的血型。同的血型。 红细红细红细红细胞血型抗原必需是用相胞血型抗原必需是用相胞血型抗原必需是用相胞血型抗原必需是用相应应应应抗
5、体抗体抗体抗体检测检测检测检测到的到的到的到的红红红红细细细细胞外表抗原，属于胞外表抗原，属于胞外表抗原，属于胞外表抗原，属于遗传遗传遗传遗传性状。性状。性状。性状。红细胞血型抗原的生化构造红细胞血型抗原的生化构造l l由由由由结结合到蛋白或脂上的碳水化合物合到蛋白或脂上的碳水化合物合到蛋白或脂上的碳水化合物合到蛋白或脂上的碳水化合物 carbohydrat carbohydrat 决决决决议议l l l l 如：如：如：如： ABO ABO 、 Lewis Lewis 、 Hh Hh 、 P P、 Ii Ii等等等等l l由蛋白的氨基酸序列决由蛋白的氨基酸序列决由蛋白的氨基酸序列决由蛋白的氨
6、基酸序列决议议l l 如：如：如：如： MNSs MNSs、 Rh Rh、 Kell Kell、 Kidd Kidd等大多数血型抗等大多数血型抗等大多数血型抗等大多数血型抗原原原原l l血型系血型系血型系血型系统统blood group systemblood group systeml l 由由由由单单一基因座位控制，或是由二个或更多的一基因座位控制，或是由二个或更多的一基因座位控制，或是由二个或更多的一基因座位控制，或是由二个或更多的严严密密密密连连l l 锁锁、彼此之、彼此之、彼此之、彼此之间间没有重没有重没有重没有重组发组发生的同源基因控制生的同源基因控制生的同源基因控制生的同源基因控
7、制l l血型集合血型集合血型集合血型集合blood group collectionblood group collectionl l 抗原是以抗原是以抗原是以抗原是以遗传遗传、生化或血清学的相关性、生化或血清学的相关性、生化或血清学的相关性、生化或血清学的相关性进进展展展展组组合合合合l l高、低抗原高、低抗原高、低抗原高、低抗原频频率率率率组组 ( high and low frequency ( high and low frequency antigens )antigens )高高高高频频抗原抗原抗原抗原 high frequency antigens)high frequency
8、antigens) 为为大多数人所具有的血型抗原，表示大多数人所具有的血型抗原，表示大多数人所具有的血型抗原，表示大多数人所具有的血型抗原，表示10001000个个个个人中至少有人中至少有人中至少有人中至少有999999人存在此抗原。人存在此抗原。人存在此抗原。人存在此抗原。低低低低频频抗原抗原抗原抗原 (low frequency antigens) (low frequency antigens) 为为少数人所具有的血型抗原，表示少数人所具有的血型抗原，表示少数人所具有的血型抗原，表示少数人所具有的血型抗原，表示 1000 1000个人个人个人个人中最多只需中最多只需中最多只需中最多只需1
9、 1人有此抗原。又称人有此抗原。又称人有此抗原。又称人有此抗原。又称为为私有血型私有血型私有血型私有血型组组抗原。抗原。抗原。抗原。二红细胞血型抗体二红细胞血型抗体(antibody) 抗体是机体抗体是机体对对外来抗原刺激所外来抗原刺激所产产生的生的一一组组具有免疫功能的球蛋白，即免疫球蛋具有免疫功能的球蛋白，即免疫球蛋白白( immunoglobulin， Ig )。红细胞血型抗体的分类红细胞血型抗体的分类 按按产产生的生的缘缘由和条件大致可分由和条件大致可分为为三三类类天然抗体天然抗体 natural antibody 免疫抗体免疫抗体 immune antibody本身抗体本身抗体 au
10、toantibody同种抗体同种抗体 allo-antibody 按照与相应红细胞能否在盐水中产生凝集l完全抗体complete antibodyl不完全抗体incomplete antibody自然形状下的红细胞自然形状下的红细胞按抗体与抗原反响的最适温度，分按抗体与抗原反响的最适温度，分为两种两种冷型抗体冷型抗体 cold antibody温型抗体温型抗体 warm antibody按照抗体与相应抗原的依存关系l规那么抗体l不规那么抗体不测抗体按免疫球蛋白的生物化学特性分为五类按免疫球蛋白的生物化学特性分为五类 IgG IgM IgA IgE IgDIgG的四种亚类的四种亚类 IgG和和I
11、gM免疫球蛋白的特征免疫球蛋白的特征通过通过通过通过胎盘胎盘胎盘胎盘盐水盐水盐水盐水反应反应反应反应结合结合结合结合补体补体补体补体被被被被2-Me2-Me破坏破坏破坏破坏降低温度降低温度降低温度降低温度提高反应提高反应提高反应提高反应被血型物被血型物被血型物被血型物质中和质中和质中和质中和IgGIgG能能能能不能不能不能不能能能能能难难难难否否否否难难难难IgMIgM不能不能不能不能能能能能能能能能易易易易是是是是易易易易补体补体 complement 补体是存在于人和动物血清中的一种正补体是存在于人和动物血清中的一种正常成分，由球蛋白、糖和磷脂结合而成，约占常成分，由球蛋白、糖和磷脂结合而
12、成，约占血清球蛋白总量的血清球蛋白总量的10。它能补助各种特异性。它能补助各种特异性抗体溶解相应的细菌和细胞。抗体溶解相应的细菌和细胞。 补体系统补体系统 complement system 补补体是由体是由20多种血清蛋白成分多种血清蛋白成分组组成的具有成的具有类类似似酶酶性性质质的一的一组组复复杂杂的血清蛋白系的血清蛋白系统统。各成分均。各成分均以不活以不活动动的的酶酶原方式存在于血清中，只需被激活原方式存在于血清中，只需被激活后，把后，把酶酶原原变变成成酶酶，才干，才干发扬发扬其生物活性作用，其生物活性作用，所以也叫做所以也叫做补补体系体系统统。补体的性质补体的性质 补补体的性体的性质质
13、是非特异性，不是非特异性，不稳稳定，易被定，易被紫外紫外线线、机械振、机械振荡荡、化学、化学药药物以及加物以及加热热破坏破坏其活性其活性 。三红细胞抗原抗体反响l 抗原抗体反响是机体防御系抗原抗体反响是机体防御系统统功能的一功能的一部分，借以排除外来物部分，借以排除外来物质对质对机体的机体的损损害，害，维维持机体内持机体内环环境的平衡境的平衡稳稳定，安康生存。定，安康生存。l 不相宜的抗原抗体反响也会不相宜的抗原抗体反响也会给给机体机体带带来来严严l 重重损损害，甚至危及生命。害，甚至危及生命。抗原抗体反响主要类型抗原抗体反响主要类型l l凝集反响凝集反响凝集反响凝集反响 agglutinat
14、ion agglutinationl l溶血反响溶血反响溶血反响溶血反响 hemolysis hemolysis l l沉淀反响沉淀反响沉淀反响沉淀反响 precipitation precipitation凝集反响的原理凝集反响的原理 是抗体分子在相是抗体分子在相是抗体分子在相是抗体分子在相邻邻邻邻的的的的红细红细红细红细胞外表抗原决胞外表抗原决胞外表抗原决胞外表抗原决议议议议簇簇簇簇之之之之间间间间搭搭搭搭桥桥桥桥，使之构成肉眼可，使之构成肉眼可，使之构成肉眼可，使之构成肉眼可见见见见的的的的颗颗颗颗粒状凝集粒状凝集粒状凝集粒状凝集团块团块团块团块。 直接凝集直接凝集直接凝集直接凝集 di
15、rect agglutination direct agglutination 间间间间接凝集接凝集接凝集接凝集 indirect agglutination indirect agglutinationIgM抗体呵斥的直接凝集抗体呵斥的直接凝集间接凝集反响的两个阶段间接凝集反响的两个阶段第一第一第一第一阶阶段段段段致敏致敏致敏致敏阶阶段段段段 第二第二第二第二阶阶阶阶段段段段 真凝集真凝集真凝集真凝集阶阶阶阶段段段段IgG抗体借助抗球蛋白试剂产生的间接凝集反响抗体借助抗球蛋白试剂产生的间接凝集反响试管中红细胞凝集强度的判别试管中红细胞凝集强度的判别红细胞凝集反响结果的判读评分规范红细胞凝集反
16、响结果的判读评分规范 4+ 1 4+ 1个凝个凝个凝个凝块块块块，背景明晰，无游离，背景明晰，无游离，背景明晰，无游离，背景明晰，无游离红细红细红细红细 3+ 23 3+ 23个凝个凝个凝个凝块块块块，背景明晰，无游离，背景明晰，无游离，背景明晰，无游离，背景明晰，无游离红细红细红细红细 2+ 2+ 多个小凝多个小凝多个小凝多个小凝块块块块，背景明晰，无游离，背景明晰，无游离，背景明晰，无游离，背景明晰，无游离红细红细红细红细 1+ 1+ 无数的小无数的小无数的小无数的小颗颗颗颗粒，背景混粒，背景混粒，背景混粒，背景混浊浊浊浊，有游离，有游离，有游离，有游离红细红细红细红细胞胞胞胞 W+ W+
17、 镜镜镜镜下下下下较较较较少凝集，有少凝集，有少凝集，有少凝集，有较较较较多的游离多的游离多的游离多的游离红细红细红细红细胞胞胞胞阴性阴性阴性阴性 肉眼察看不到凝集，肉眼察看不到凝集，肉眼察看不到凝集，肉眼察看不到凝集，镜镜镜镜下全下全下全下全为为为为游离游离游离游离红细红细红细红细胞胞胞胞抗原抗体反响的特点l高度特异性l可逆性l比例性l两个反响阶段：致敏和凝集阶段影响红细胞凝集反响的要素影响红细胞凝集反响的要素l l抗原抗体的比例抗原抗体的比例 l l反响温度反响温度 l l溶液的溶液的pHpH值值 l l孵育孵育时间时间 l l离子离子强强度度l l红细红细胞胞间间间间隔隔常用红细胞抗原和
18、抗体鉴定实验常用红细胞抗原和抗体鉴定实验l l生理生理盐盐水法水法 saline agglutination test saline agglutination testl l抗球蛋白抗球蛋白实验实验 antiglobulin test , Coombs antiglobulin test , Coombs l l蛋白水解蛋白水解酶实验酶实验 enzyme-treated cell agglutination enzyme-treated cell agglutinationl l低离子低离子强强度度实验实验 low ionic- strength solution, LISS low ion
19、ic- strength solution, LISSl l聚凝胺聚凝胺实验实验 polybrene technique polybrene technique l l凝胶凝胶实验实验 gel technique gel technique l l吸收放散吸收放散实验实验 absorption elution test absorption elution test红细胞抗体检测什么情况下对输血患者做抗体检测？妊娠史输血史近期需求多次输血患者二、红细胞血型检测l输血前免疫学检查内容l常用的检测技术一、输血前免疫血液学检验l输血前检查分为两个方面，一方面是对供血者进展的检查，另一方面是对实践 接
20、受输血的患者受血者进展的检查。l输血前检查的目的在于为每一名受血者选择适宜的血液成分，使其有正常的存活时间，并且不引起受血者本身红细胞临床上的明显破坏输血前血前检查的要求的要求 输输入的入的红细红细胞胞 在受血者体内必需在受血者体内必需 不凝集或不溶血不凝集或不溶血输输入的血入的血浆浆成份成份 不不导导致受血者致受血者红细红细 胞的明胞的明显显破坏，破坏，输输血前血前检查检查的主要程序的主要程序受血者的病史和血受血者的病史和血样样本等的本等的检查检查、 核核对对及及处处置。置。ABOABO和和RhRh定型定型抗体挑抗体挑选选和和鉴鉴定定交叉配血交叉配血实验实验标签标签和和发发血血受血者病史和血
21、样的检查、核对及处置受血者病史和血样的检查、核对及处置 输输输输血血血血恳恳恳恳求求求求单单单单 血血血血标标标标本要求本要求本要求本要求受血者血样本受血者血样本血液血液血液血液标标本的要求本的要求本的要求本的要求血液血液血液血液标标本必需本必需本必需本必需经鉴经鉴定和定和定和定和标标志，并和血液志，并和血液志，并和血液志，并和血液恳恳求求求求单单上内容核上内容核上内容核上内容核对对、确定、确定、确定、确定标标本必需能代表患者的当前免疫情况本必需能代表患者的当前免疫情况本必需能代表患者的当前免疫情况本必需能代表患者的当前免疫情况防止血液防止血液防止血液防止血液标标本的稀本的稀本的稀本的稀释释和
22、溶血和溶血和溶血和溶血输输血前血前血前血前检查检查最好运用血清，也可以运用血最好运用血清，也可以运用血最好运用血清，也可以运用血最好运用血清，也可以运用血浆浆。每次每次每次每次输输血后血后血后血后标标本至少保管本至少保管本至少保管本至少保管7 7天。天。天。天。为什么什么输血前血前检查用血清比血用血清比血浆更好？更好？ 首先，有首先，有首先，有首先，有时时时时血血血血浆浆浆浆中可构成小的中可构成小的中可构成小的中可构成小的纤维纤维纤维纤维蛋白凝蛋白凝蛋白凝蛋白凝块块块块使使使使认读认读认读认读困困困困难难难难。其次，一些。其次，一些。其次，一些。其次，一些经过补经过补经过补经过补体激活才干反响
23、的抗体激活才干反响的抗体激活才干反响的抗体激活才干反响的抗体，用血体，用血体，用血体，用血浆浆浆浆不能不能不能不能检检检检出。由于血出。由于血出。由于血出。由于血浆浆浆浆中抗凝中抗凝中抗凝中抗凝剂剂剂剂乙二胺四乙二胺四乙二胺四乙二胺四乙酸乙酸乙酸乙酸 EDTAEDTA 或枸或枸或枸或枸橼橼橼橼酸酸酸酸盐盐盐盐能螯和能螯和能螯和能螯和钙钙钙钙并阻止并阻止并阻止并阻止补补补补体激体激体激体激活。活。活。活。ABO和和Rh血型定型血型定型ABOABO血型定型血型定型血型定型血型定型 供血者和受血者常供血者和受血者常供血者和受血者常供血者和受血者常规规规规ABOABO血型血型血型血型检测应检测应检测应
24、检测应包括正包括正包括正包括正反定型两种反定型两种反定型两种反定型两种实验实验实验实验，并相互，并相互，并相互，并相互验证验证验证验证。对对对对于知于知于知于知ABOABO血血血血型的供血者的型的供血者的型的供血者的型的供血者的ABO ABO 血型确血型确血型确血型确认认认认或或或或6 6个月内的个月内的个月内的个月内的婴婴婴婴儿的儿的儿的儿的ABOABO定型，可以只定型，可以只定型，可以只定型，可以只检查红细检查红细检查红细检查红细胞胞胞胞处理处理ABO正反定型结果不一致的根本方法正反定型结果不一致的根本方法欲欲欲欲处处理被理被理被理被检检者本身者本身者本身者本身ABOABO血型血型血型血型
25、问题问题 了解被了解被了解被了解被检检者的年者的年者的年者的年龄龄、诊诊断病症、断病症、断病症、断病症、输输血史、血史、血史、血史、用用用用药药史、免疫球蛋白程度以及妊娠史等。史、免疫球蛋白程度以及妊娠史等。史、免疫球蛋白程度以及妊娠史等。史、免疫球蛋白程度以及妊娠史等。这这种种种种情况比情况比情况比情况比较较复复复复杂杂 欲欲欲欲处处理技理技理技理技术问题术问题 应应洗洗洗洗涤红细涤红细胞胞胞胞3 3次并配次并配次并配次并配盐盐水水水水悬悬液液液液进进展重展重展重展重新正反定型新正反定型新正反定型新正反定型实验实验并并并并检查红细检查红细胞直抗胞直抗胞直抗胞直抗被被被被检检者本身者本身者本身
26、者本身ABOABO血型血型血型血型问题问题1 1、血清异常、血清异常、血清异常、血清异常 2 2、红细红细胞致敏胞致敏胞致敏胞致敏3 3、异常基因、异常基因、异常基因、异常基因 4 4、近期、近期、近期、近期输输血血血血5 5、嵌合体血型开米粒，、嵌合体血型开米粒，、嵌合体血型开米粒，、嵌合体血型开米粒，chimerism ) chimerism ) 6 6、疾病要素、疾病要素、疾病要素、疾病要素导导致抗原减弱致抗原减弱致抗原减弱致抗原减弱 7 7、红细红细胞多凝集景象胞多凝集景象胞多凝集景象胞多凝集景象 8 8、获获得性得性得性得性B 9B 9、血型特异性物、血型特异性物、血型特异性物、血型
27、特异性物质质过过高高高高1010、近期内、近期内、近期内、近期内进进展大量血展大量血展大量血展大量血浆浆置置置置换换1111、异常的血、异常的血、异常的血、异常的血浆浆蛋白蛋白蛋白蛋白 12 12、不、不、不、不测测抗体的存在抗体的存在抗体的存在抗体的存在1313、低丙种球蛋白血症、低丙种球蛋白血症、低丙种球蛋白血症、低丙种球蛋白血症 14 14、药药物等要素物等要素物等要素物等要素1515、年、年、年、年龄龄要素要素要素要素 16 16、防腐、防腐、防腐、防腐剂剂要素要素要素要素1717、单单克隆定型克隆定型克隆定型克隆定型试剂试剂与人源多克隆定型血清在判与人源多克隆定型血清在判与人源多克隆
28、定型血清在判与人源多克隆定型血清在判读读和和和和 分析弱抗原分析弱抗原分析弱抗原分析弱抗原时时的差的差的差的差别别 技技技技术问题术问题1 1、不干、不干、不干、不干净净的的的的试试管管管管2 2、血清与、血清与、血清与、血清与细细胞的比例胞的比例胞的比例胞的比例3 3、离心速度。、离心速度。、离心速度。、离心速度。 4 4、 污污染的染的染的染的试剂试剂和和和和标标本本本本5 5、记录结记录结果果果果错误错误 6 6、 漏加漏加漏加漏加试剂试剂。7 7、弄、弄、弄、弄错标错标本本本本8 8、阳性溶血反响、阳性溶血反响、阳性溶血反响、阳性溶血反响误误以以以以为为阴性。阴性。阴性。阴性。Rh血型
29、定型血型定型 主要主要主要主要鉴鉴鉴鉴定定定定D D抗原，定型抗原，定型抗原，定型抗原，定型时应时应时应时应按抗按抗按抗按抗D D血清血清血清血清试试试试剂剂剂剂运用运用运用运用阐阐阐阐明明明明进进进进展，并留意有展，并留意有展，并留意有展，并留意有严厉严厉严厉严厉的的的的对对对对照照照照实验实验实验实验，包括抗原的阴性、阳性包括抗原的阴性、阳性包括抗原的阴性、阳性包括抗原的阴性、阳性对对对对照以及照以及照以及照以及试剂对试剂对试剂对试剂对照照照照试试试试验验验验。Rh血型血型鉴鉴定能定能够够出出现现假阳性的假阳性的缘缘由由1 1、受、受、受、受检红细检红细检红细检红细胞直抗阳性胞直抗阳性胞直
30、抗阳性胞直抗阳性 2 2、高蛋白、高蛋白、高蛋白、高蛋白试剂试剂试剂试剂引起引起引起引起缗钱缗钱缗钱缗钱状凝集状凝集状凝集状凝集3 3、纤维纤维纤维纤维蛋白呵斥的凝蛋白呵斥的凝蛋白呵斥的凝蛋白呵斥的凝块块块块4 4、定型、定型、定型、定型试剂试剂试剂试剂中存在的其它抗体中存在的其它抗体中存在的其它抗体中存在的其它抗体5 5、多凝集、多凝集、多凝集、多凝集细细细细胞呵斥的假阳性胞呵斥的假阳性胞呵斥的假阳性胞呵斥的假阳性6 6、鉴鉴鉴鉴定器材和定器材和定器材和定器材和试剂试剂试剂试剂血清被血清被血清被血清被污污污污染染染染Rh血型血型鉴鉴定能定能够够出出现现假阴性的假阴性的缘缘由由1 1、受、受、
31、受、受检细检细检细检细胞胞胞胞悬悬悬悬液液液液浓浓浓浓度太高，与度太高，与度太高，与度太高，与试剂试剂试剂试剂血清比例血清比例血清比例血清比例失失失失调调调调。2 2、漏加或、漏加或、漏加或、漏加或错错错错加定型加定型加定型加定型试剂试剂试剂试剂3 3、察看、察看、察看、察看结结结结果果果果时摇动时摇动时摇动时摇动用力用力用力用力过过过过度，度，度，度，摇摇摇摇散弱凝集。散弱凝集。散弱凝集。散弱凝集。4 4、试剂试剂试剂试剂血清保管不当引起血清保管不当引起血清保管不当引起血清保管不当引起蜕变蜕变蜕变蜕变5 5、定型血清的运用方法不当、定型血清的运用方法不当、定型血清的运用方法不当、定型血清的运用方法不当6 6、D D变变变变异型异型异型异型检测检测检测检测运用抗人球蛋白运用抗人球蛋白运用抗人球蛋白运用抗人球蛋白实验实验实验实验
