《荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的应用ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的应用ppt课件（32页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的运用荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的运用导导 师：张玉奎师：张玉奎 学学 生：张生：张 琳琳中科院大连化学物理研讨所中科院大连化学物理研讨所1810组组 引言引言 常用常用荧光衍生化光衍生化试剂运用运用简介介 展望展望 汇报内容内容 衍生的目的衍生的目的 衍生发应方式衍生发应方式 荧光衍生试剂的构成荧光衍生试剂的构成引引 言言衍生化反响方式衍生化反响方式衍生化反响方式衍生化反响方式 在线在线 (on line) (on line) 离线离线 (off line) (off line) 从衍生反响的场所来分从衍生反响的场所来分 柱前衍生化柱前衍生化 (pr
2、e-column derivatization) 柱上衍生化柱上衍生化 (on-column derivatization) 柱后衍生化柱后衍生化 (post-column derivatization) 从能否与仪器联机的角度来分从能否与仪器联机的角度来分 从能否构成共价从能否构成共价键来分来分 标志志 非非标志志 荧荧光衍生光衍生光衍生光衍生试剂试剂的根本构成的根本构成的根本构成的根本构成取代基荧光团试剂分子母体反响基团胆磺酰肼 DNS-HI I 胺胺胺胺类类化合物的衍生化合物的衍生化合物的衍生化合物的衍生试剂试剂 芳香邻二醛类 OPA 异硫氰酸酯类 FITC 酰氯类 FMOC 活性卤类
3、NBD-Cl N-羟基琥珀酰亚胺活性酯类 AQC 邻苯二甲醛邻苯二甲醛 OPA4-氯氯-7-硝基硝基-2,1,3-苯并恶二唑苯并恶二唑 NBD-Cl荧光素异硫氰酸酯荧光素异硫氰酸酯FITCFMOC芴代甲氧基酰氯芴代甲氧基酰氯 6-氨喹啉基琥珀酰亚胺碳酸酯氨喹啉基琥珀酰亚胺碳酸酯AQC常用胺的衍生常用胺的衍生常用胺的衍生常用胺的衍生试剂试剂 分子式分子式分子式分子式邻邻苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲醛醛 OPA OPA 衍生分衍生分衍生分衍生分别别氨基酸的色氨基酸的色氨基酸的色氨基酸的色谱图谱图J Chromatorgr. 1990,499:557集成化微流控芯片氨基酸分析集成化微流控芯片氨基酸分析集
4、成化微流控芯片氨基酸分析集成化微流控芯片氨基酸分析仪仪 高等学校化学学报高等学校化学学报 2004, 25: 189190FMOC FMOC 衍生分衍生分衍生分衍生分别别氨基酸的色氨基酸的色氨基酸的色氨基酸的色谱图谱图J Chromatorgr. 1990,499:557FMOCFMOC与与与与CEOCCEOC衍生分衍生分衍生分衍生分别别氨基酸的比氨基酸的比氨基酸的比氨基酸的比较较Anal. Biochem 2003,313 1727图3 CEOC 衍生胺类化合物色谱分别图23种图2 FMOC 衍生胺类化合物色谱分别图23种FMOCFMOC与与与与CEOCCEOC衍生分衍生分衍生分衍生分别别脂
5、肪胺的比脂肪胺的比脂肪胺的比脂肪胺的比较较II II 醇、酚的衍生醇、酚的衍生醇、酚的衍生醇、酚的衍生试剂试剂 羰基氯类： FMOC CEOC 磺酰氯类: DNs-Cl 卤代三嗪类: EDTN 1-乙氧基-4-(二氯-三嗪)萘EDTNCEOC CEOC 衍生醇衍生醇衍生醇衍生醇类荧类荧光光光光检测检测色色色色谱谱分分分分别别分析化学分析化学 2003, 31, 62651.苯酚 2.对氯苯酚 3. 2,5-二甲基苯酚 4. 2,4-二氯苯酚 5. 1,4对苯二酚CEOC CEOC 衍生酚衍生酚衍生酚衍生酚类荧类荧光光光光检测检测色色色色谱谱分分分分别别III III III III 羰羰基化合
6、物的衍生基化合物的衍生基化合物的衍生基化合物的衍生试剂试剂 肼类肼类 DNs-H CEOC-H DNs-H CEOC-H 氨基类氨基类 氨基甲基芘氨基甲基芘 肼肼和胺与和胺与和胺与和胺与羰羰基化合物的反响基化合物的反响基化合物的反响基化合物的反响1.乳糖 2.甘露糖 3.葡萄糖 4.鼠李糖 5. 山梨糖(FL detection)咔唑咔唑-9-9-乙氧基羰基肼乙氧基羰基肼(CEOC-H)(CEOC-H)柱前衍生中性糖高效液相色谱分别柱前衍生中性糖高效液相色谱分别IV IV 羧酸类化合物的衍生试剂羧酸类化合物的衍生试剂 溴甲基类 BrMMC 哌嗪基类 DBD-Pz 重氮甲烷基类 ADAM 其它类
7、 9-(2-羟乙基)-吖啶酮 HEA4-氨甲基-6，7-二甲基香豆素 (ADMC)7-N-哌嗪-4-二甲氨基苯并呋喃9-蒽重氮甲烷9-蒽重氮甲烷(4-溴甲基-7-甲氧基香豆素)荧光衍生试剂与羧酸的反响荧光衍生试剂与羧酸的反响4-4-氨甲基氨甲基-6,7-6,7-二甲基香豆素二甲基香豆素 (ADMC) (ADMC) 衍生羧酸衍生羧酸 色谱分别图色谱分别图Anal.Sci.1996,12:189Fig.1 胆汁酸分别色谱图荧光检测. 衍生物的激发和发射波长分别为 ex=404, em=440nm9-(2-9-(2-羟乙基羟乙基)-)-吖啶酮吖啶酮 HEA HEA 衍生胆汁酸衍生胆汁酸 色谱分别图色
8、谱分别图V V 分别对映体的手性荧光衍生试剂分别对映体的手性荧光衍生试剂 Toshimasa Toyooka JapanJ.C.A 1998 822 215224 手性荧光衍生试剂手性荧光衍生试剂 R(-)DBD-PyNCS R(-)DBD-PyNCS 衍生分别衍生分别DLDL氨基酸氨基酸OPA OPA 与手性硫醇与手性硫醇 衍生分别衍生分别DLDL氨基酸氨基酸N-异丁酰基-D(L)-半胱氨酸 (IBDC和IBLC)J.C.A 1999 832 123VI VI VI VI 蛋白蛋白蛋白蛋白质质的衍生的衍生的衍生的衍生试剂试剂目前常用衍生蛋白目前常用衍生蛋白质的的荧光光标志志试剂有：有： 邻苯
9、二甲苯二甲醛 (OPA) (OPA) 4- 4-氟氟-7-7-硝基苯并硝基苯并恶二二唑 (NBD-F) (NBD-F) 荧光素异硫光素异硫氰酸酸酯 (FITC) (FITC) 3- 3-呋喃甲喃甲酰喹啉啉-2-2-羰醛 (FQ) (FQ)邻邻苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲醛醛 OPA OPA OPA OPA 衍生衍生衍生衍生马马心肌心肌心肌心肌红红蛋白蛋白蛋白蛋白质质毛毛毛毛细细管管管管电电泳分泳分泳分泳分别别Fig.5 OPA 柱后标志马心肌红蛋白质毛细管电泳图J.Am.Chem.Soc. 1995,117:33253-3-3-3-呋呋喃甲喃甲喃甲喃甲酰喹酰喹啉啉啉啉-2-2-2-2-羰醛羰醛 F
10、Q FQ FQ FQ 衍生蛋白衍生蛋白衍生蛋白衍生蛋白质质毛毛毛毛细细管管管管电电泳分泳分泳分泳分别别J.Am.Chem.Soc. 1989,111: 5008VII VII VII VII 核酸的衍生核酸的衍生核酸的衍生核酸的衍生试剂试剂DNA序列分析中所用的四种荧光衍生试剂Nature 1986,327: 674Nature 1986,327: 674DNA DNA DNA DNA 测测序序序序仪仪及及及及电电泳泳泳泳图图展展展展 望望望望分析化学中的有机分析化学中的有机试剂在分析化学中占有与分析在分析化学中占有与分析仪器同等重器同等重要的位置，要的位置，荧光衍生化光衍生化试剂那么是有机分析那么是有机分析试剂的一的一类重要重要分支。分支。 性能性能优良的良的荧光衍生化光衍生化试剂能能够将成将成为某些物某些物质的高灵敏的高灵敏高高选择性分析的关性分析的关键，荧光衍生光衍生试剂的开的开发与运用也正朝与运用也正朝这个方向开展。个方向开展。在在实践任践任务中将能中将能够遇到各种遇到各种现有有荧光衍生光衍生试剂所不能所不能处理理或不能很益或不能很益处理的理的问题。 有必要根据有必要根据实践任践任务的需求来开的需求来开发研研讨新型的新型的荧光衍生光衍生试剂Thank You!
