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1、3.1 3.1 蔬菜中有机磷和氨基甲蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测酸酯类农药残留量的快速检测1.1.农药残留测试的相关知识点农药残留测试的相关知识点2.2.农药残留的快速检测技术农药残留的快速检测技术3.3.多功能食品安全检测仪的使用多功能食品安全检测仪的使用一、背一、背 景景w2001年，杭州的年，杭州的空心菜空心菜有机磷中毒事件。有机磷中毒事件。w2003年，南京年，南京蔬菜蔬菜有机磷残留导致中毒的事件。有机磷残留导致中毒的事件。w2007年，福建大田发生有机磷污染年，福建大田发生有机磷污染水源水源导致中毒事件。导致中毒事件。w2008年年1月，日本发生月，日本发生饺子饺子
2、中毒事件，该饺子被化验出含甲中毒事件，该饺子被化验出含甲胺磷残留胺磷残留w2008年年1月月9日，中国决定日，中国决定停止甲胺磷、对硫磷停止甲胺磷、对硫磷等五种高毒农等五种高毒农药的生产、流通和使用。药的生产、流通和使用。w 2011年年3月，河南月，河南毒韭菜毒韭菜事件事件有机磷中毒有机磷中毒(超标农药残留主超标农药残留主要是甲拌磷要是甲拌磷)二、概念二、概念w有机磷农药是一类含有磷原子的有机酯类化合物，在体内与胆碱酯酶形有机磷农药是一类含有磷原子的有机酯类化合物，在体内与胆碱酯酶形成磷酸化胆碱酯酶，使胆碱酯酶活性受抑制，而产生毒性作用的一类农成磷酸化胆碱酯酶，使胆碱酯酶活性受抑制，而产生毒
3、性作用的一类农药的总称。大多为磷酸酯类或硫代磷酸酯类。药的总称。大多为磷酸酯类或硫代磷酸酯类。w有机磷类农药包括：甲胺磷、水胺硫磷、乐果、敌百虫、敌敌畏、氧化有机磷类农药包括：甲胺磷、水胺硫磷、乐果、敌百虫、敌敌畏、氧化乐果、马拉硫磷、甲基异柳磷、辛硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、乙酰甲乐果、马拉硫磷、甲基异柳磷、辛硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、乙酰甲胺磷、久效磷、杀螟硫磷、倍硫磷、毒死蜱等。胺磷、久效磷、杀螟硫磷、倍硫磷、毒死蜱等。 w氨基甲酸酯类农药包括：叶蝉散、速灭威、西维因、涕灭威、克百威氨基甲酸酯类农药包括：叶蝉散、速灭威、西维因、涕灭威、克百威（呋喃丹）、异丙威、灭多威等。（呋喃丹）、异丙威
4、、灭多威等。Add Your TextAdd Your TextAdd Your TextAdd Your Text低毒类低毒类: LD50:10005000mg/kg 马拉硫磷马拉硫磷（LD50：大鼠经口） 中度毒类中度毒类：LD50:1001000mg/kg 乐果、乙硫磷、敌百虫乐果、乙硫磷、敌百虫 高毒类高毒类：LD50:10100mg/kg 甲基对硫磷、甲胺磷、氧化乐果甲基对硫磷、甲胺磷、氧化乐果剧毒类剧毒类：LD5010mg/kg 甲拌磷、对硫磷、内吸磷甲拌磷、对硫磷、内吸磷四、性质四、性质水解性水解性因有机磷农药属酯因有机磷农药属酯类，故在一定条件类，故在一定条件下能水解下能水解,
5、在碱性介在碱性介质、高温、水分含质、高温、水分含量高等环境中，更量高等环境中，更易水解。易水解。如敌百虫在碱性溶如敌百虫在碱性溶液中易水解为毒性液中易水解为毒性较大的敌敌畏。较大的敌敌畏。溶解性溶解性由于各种有机磷农由于各种有机磷农药的极性强弱不同，药的极性强弱不同，故对水及各种有机故对水及各种有机溶剂的溶解性能也溶剂的溶解性能也不一样，不一样，但多数有机磷农难但多数有机磷农难溶于水，可溶于脂溶于水，可溶于脂肪及各种有机溶剂。肪及各种有机溶剂。 氧化性氧化性有机磷农药中，硫有机磷农药中，硫代磷酸酯农药在溴代磷酸酯农药在溴作用下或在紫外线作用下或在紫外线照射下，照射下，分子中分子中S易被易被O取
6、代，取代，生成毒性较大的磷生成毒性较大的磷酸酯。酸酯。五、农药进入人体的方式五、农药进入人体的方式土壤、水土壤、水 、空气、空气家禽、畜家禽、畜植物、饲料植物、饲料水生动、植物水生动、植物肉、蛋、乳肉、蛋、乳人人有机磷农药进入体内途径有机磷农药进入体内途径完整的皮肤，粘膜完整的皮肤，粘膜呼吸道呼吸道消化道消化道职业性农药中毒主要职业性农药中毒主要由皮肤污染引起。由皮肤污染引起。吸收的有机磷农药在吸收的有机磷农药在体内分布于各器官，体内分布于各器官，其中以肝脏含量最大，其中以肝脏含量最大，脑内含量则取决于农脑内含量则取决于农药穿透脑屏障的能力药穿透脑屏障的能力。 GB/T5009.199-200
7、3GB/T5009.199-2003本标准规定了由酶抑制法和速测法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酚类农本标准规定了由酶抑制法和速测法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酚类农本标准规定了由酶抑制法和速测法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酚类农本标准规定了由酶抑制法和速测法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酚类农药残留量的快速检验方法。药残留量的快速检验方法。药残留量的快速检验方法。药残留量的快速检验方法。速测卡法（速测卡法（ 纸片法）纸片法）原理原理 胆碱酯酶可催化靛酚乙胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（酸酯（ 红色）水解为乙酸与红色）水解为乙酸与靛酚（靛酚（ 蓝色），有机磷或氨蓝色），有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱基甲酸酯类农
8、药对胆碱酯酶有抑制作用，酯酶有抑制作用， 使催化、使催化、水解、变色的过程发生改变，水解、变色的过程发生改变， 由此可判断出样品中是否有由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。类农药的存在。酶抑制率法（酶抑制率法（ 分光光度法）分光光度法）原理原理 在一定条件下，在一定条件下， 有机磷和氨基甲酸酯有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用， 其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，况下， 酶催化神经传导代谢产物（酶催化神经传导代谢产物（ 乙酰乙酰胆碱）胆碱） 水解，
9、水解， 其水解产物与显色剂反应，其水解产物与显色剂反应， 产生黄色物质，产生黄色物质， 用分光光度计在用分光光度计在412 nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，制率， 通过抑制率可以判断出样品中是否通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯有高剂量有机磷或氨基甲酸酯 类农药的存类农药的存在。在。 抑制率抑制率50%不超标；不超标； 50%超标。超标。实验：蔬菜农药残留快速检测技术实验：蔬菜农药残留快速检测技术- -仪器法仪器法w试剂：试剂：1.1.缓冲液：缓冲液： pH8.0缓冲液缓冲液2.2.酶试剂：酶试剂：乙酰胆碱酯乙酰胆碱酯3.
10、3.底物：底物：碘化乙酰硫代胆碱碘化乙酰硫代胆碱4.4.显色剂显色剂注意：注意：1.1.以上配好的试剂应冷藏保存，并于半月内用完。以上配好的试剂应冷藏保存，并于半月内用完。2.2.试剂从冰箱中取出后需放置试剂从冰箱中取出后需放置1h1h以上，接近室温再使用。以上，接近室温再使用。实验：蔬菜农药残留快速检测技术实验：蔬菜农药残留快速检测技术- -仪器法仪器法1 1、样品处理、样品处理w 选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，去掉不可食选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，去掉不可食部分后称取蔬菜试样，剪成部分后称取蔬菜试样，剪成1 cm1 cm左右碎片。取样品左右碎片。取样品2g2g，放入，放入
11、烧杯或提取瓶中，加入烧杯或提取瓶中，加入10mL10mL缓冲液，超声波振荡缓冲液，超声波振荡3 min3 min，静，静置置35 min35 min，待用。，待用。w 样品不可用水冲洗，取不同植株叶片的叶尖部样品。样品不可用水冲洗，取不同植株叶片的叶尖部样品。样品处理样品处理样品处理样品处理w叶叶类类菜菜取取叶叶尖尖部部位位样品处理样品处理样品处理样品处理w剪剪成成指指甲甲盖盖大大小小样品处理样品处理样品处理样品处理w加加10ml缓缓冲冲液液至至刚刚好好浸浸没没样样品品样品处理样品处理样品处理样品处理w超超声声波波震震荡荡三三分分钟钟实验：蔬菜农药残留快速检测技术实验：蔬菜农药残留快速检测技术
12、- -仪器法仪器法2 2、空白测试空白测试w 先于试管中加入先于试管中加入2.5 mL2.5 mL缓冲液，再加入缓冲液，再加入0.1 mL0.1 mL酶液、酶液、0.1 mL0.1 mL显色剂。显色剂。摇匀后于摇匀后于35 35 放置放置10 min10 min以上（每批样品的控制时间应一致）。以上（每批样品的控制时间应一致）。w 于于“检测检测”状态下选择状态下选择“农药残留农药残留”项目，按项目，按“确认确认”键，选择样品键，选择样品种类中的种类中的“空白测空白测”项，按项，按“确认确认”键。键。w 将放置将放置10min10min的样液倒入比色皿中，加入的样液倒入比色皿中，加入0.1 m
13、L0.1 mL低物摇匀，吹吸混匀低物摇匀，吹吸混匀w马上放入仪器中，按马上放入仪器中，按“检测检测”键，进行空白检测，记录反应键，进行空白检测，记录反应3 min3 min，过程，过程中请勿打开盖子。中请勿打开盖子。实验：蔬菜农药残留快速检测技术实验：蔬菜农药残留快速检测技术- -仪器法仪器法3 3、 样品溶液测定样品溶液测定w 先于试管中加入先于试管中加入2.5 mL2.5 mL样品提取液，再加入样品提取液，再加入0.1 mL0.1 mL酶液、酶液、0.1 mL0.1 mL显色显色剂。摇匀后于剂。摇匀后于35 35 放置放置10 min10 min以上。以上。w 于于“检测检测”状态下选择状
14、态下选择“农药残留农药残留”项目，按项目，按“确认确认”键，选择样品键，选择样品种类中的种类中的“蔬菜蔬菜”项，按项，按“确认确认”键。键。w 将放置将放置10min10min的样液倒入比色皿中，加入的样液倒入比色皿中，加入0.1 mL0.1 mL低物摇匀，吹吸混匀低物摇匀，吹吸混匀w 马上放入仪器中，按马上放入仪器中，按“检测检测”键，进行空白检测，记录反应键，进行空白检测，记录反应3 min3 min，过程中请勿打开盖子。过程中请勿打开盖子。w 样品测试结束后仪器显示值为样品的农药残留抑制率。样品测试结束后仪器显示值为样品的农药残留抑制率。实验：蔬菜农药残留快速检测技术实验：蔬菜农药残留快
15、速检测技术- -仪器法仪器法4.4.结果计算结果计算w 抑制率（抑制率（%）= 式中式中 wA0空白对照液反应空白对照液反应3 min吸光度的变化值；吸光度的变化值；w At样品溶液反应样品溶液反应3 min吸光度的变化值。吸光度的变化值。5.5.结果判定结果判定w当蔬菜样品提取液对酶的抑制率大于当蔬菜样品提取液对酶的抑制率大于50% 50% 时，表示样品中有时，表示样品中有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留，可判定样品为阳高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留，可判定样品为阳性结果，对检验结果阳性的样品需重复检验两次以上。性结果，对检验结果阳性的样品需重复检验两次以上。实验：蔬菜农药残留快速检测技术实验：蔬菜农药残留快速检测技术- -仪器法仪器法学生实验学生实验w所需仪器：所需仪器：1.1.试管：试管：2 2支支2.2.比色皿：比色皿：2 2支支3.3.样品杯：样品杯：2 2支支4.4.剪刀：剪刀：1 1把把5.5.一次性吸管：一次性吸管：2 2根根w分组：两人一组，轮次进行分组：两人一组，轮次进行
