未来疼痛治疗的新策略

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1、未来疼痛治疗的新策未来疼痛治疗的新策略略慢性疼痛慢性疼痛神经病理性疼痛神经病理性疼痛癌癌 痛痛炎症痛等炎症痛等 由实际的或潜在的组织损伤引起由实际的或潜在的组织损伤引起的一种不愉快的感觉和情感经历的一种不愉快的感觉和情感经历（IASPIASP定义）定义） 由于各种原因由于各种原因( (如骨质增生如骨质增生, ,慢慢性软组织伤以及恶性肿瘤等性软组织伤以及恶性肿瘤等) )所所致的长期致的长期( (数周、数月或数年数周、数月或数年) )不愈的疼痛不愈的疼痛疼疼 痛痛慢性疼痛慢性疼痛疼痛传导通路疼痛传导通路药物治疗：阿片类药物、药物治疗：阿片类药物、 NSAIDsNSAIDs、抗精神、抗精神 病药物等

2、病药物等物理治疗：光疗、水疗、冷热疗、针刺等物理治疗：光疗、水疗、冷热疗、针刺等手术治疗：选择性的神经阻滞、神经损毁术等手术治疗：选择性的神经阻滞、神经损毁术等慢性疼痛治疗策略慢性疼痛治疗策略分子镇痛分子镇痛新策略新策略转基因细胞移植镇痛转基因细胞移植镇痛疫苗镇痛疫苗镇痛靶向毁损镇痛靶向毁损镇痛近几年我们的研究近几年我们的研究 转基因细胞移植镇痛转基因细胞移植镇痛鞘内转基因细胞移植（脑啡肽原基因）鞘内转基因细胞移植（脑啡肽原基因）镇痛分子（脑啡肽）镇痛分子（脑啡肽）镇痛分子（脑啡肽）镇痛分子（脑啡肽）外源基因修饰细胞株外源基因修饰细胞株外源基因修饰细胞株外源基因修饰细胞株转基因细胞移植镇痛转基

3、因细胞移植镇痛转基因细胞移植镇痛转基因细胞移植镇痛我们的研究经历的三阶段我们的研究经历的三阶段细胞移植细胞移植转基因细胞移植转基因细胞移植病毒转基因治疗病毒转基因治疗嗜铬细胞嗜铬细胞 免疫反应免疫反应生存期短生存期短来源困难来源困难细胞移植细胞移植微囊化嗜铬细胞微囊化嗜铬细胞细胞移植细胞移植优点优点 免疫隔离免疫隔离减少免疫抑制剂的应用，保护植入细减少免疫抑制剂的应用，保护植入细胞免遭受机体排斥胞免遭受机体排斥缺点缺点 1.1.微囊制作复杂，成功率不高微囊制作复杂，成功率不高 2.2.微囊内死亡的细胞会污染正常产物微囊内死亡的细胞会污染正常产物 3.3.囊膜破裂囊膜破裂 4.4.微囊纤维包裹，

4、影响了微囊对外环境的敏感性和微囊纤维包裹，影响了微囊对外环境的敏感性和 镇痛物质的释放镇痛物质的释放 微囊化嗜铬细胞微囊化嗜铬细胞细胞移植细胞移植转基因细胞移植镇痛转基因细胞移植镇痛转基因细胞移植转基因细胞移植优点优点 可取自自体或同种异体，组织相容性好可取自自体或同种异体，组织相容性好 非肿瘤细胞，无致瘤性非肿瘤细胞，无致瘤性存在的问题存在的问题 细胞生存时间细胞生存时间 基因表达的可控性基因表达的可控性解决细胞来源问题解决细胞来源问题 永生化永生化细胞永生化细胞永生化 利用转基因技术将外源性的永生化基因转入到靶细利用转基因技术将外源性的永生化基因转入到靶细胞并稳定整合到靶细胞基因组中，获得

5、稳定表达的转化胞并稳定整合到靶细胞基因组中，获得稳定表达的转化细胞，从增殖危机中逃逸，从而获得无限增殖能力细胞，从增殖危机中逃逸，从而获得无限增殖能力我们构建的永生化细胞我们构建的永生化细胞永生化神经永生化神经胶质细胞胶质细胞永生化神经永生化神经前体细胞前体细胞基因修饰永生化细胞镇痛基因修饰永生化细胞镇痛人前脑啡肽原基因修饰人前脑啡肽原基因修饰永生化神经胶质细胞永生化神经胶质细胞，大鼠蛛网膜下腔移植后，具有良好的镇痛效果大鼠蛛网膜下腔移植后，具有良好的镇痛效果腺相关病毒携带人前脑啡肽原基因修饰腺相关病毒携带人前脑啡肽原基因修饰永生化永生化神经前体细胞神经前体细胞，蛛网膜下腔移植后，具有良好，蛛

6、网膜下腔移植后，具有良好的镇痛效果的镇痛效果基因表达的可控性基因表达的可控性非可控性表达模式非可控性表达模式可控性表达模式可控性表达模式Tet-onTet-on诱导表达系统诱导表达系统 解决基因表达可控性问题解决基因表达可控性问题 tet-ontet-on表达系统表达系统目的基因目的基因TRErtTACMV可控性转基因细胞移植镇痛可控性转基因细胞移植镇痛+Dox-Dox+Dox永生化胶质细胞中强力霉素永生化胶质细胞中强力霉素调节脑啡肽调节脑啡肽分泌分泌诱导表达后大鼠脑脊液中诱导表达后大鼠脑脊液中脑啡肽含量明显增加脑啡肽含量明显增加注：与注：与SNISNI组和组和SNI/ControlSNI/C

7、ontrol组相比组相比 * *P P0.050.05 与与SNI/hPPE/Dox(-)SNI/hPPE/Dox(-)组相比，组相比，# #P P0.050.05诱导表达后诱导表达后诱导诱导hPPEhPPE基因表达后镇痛效果评价基因表达后镇痛效果评价注：注： SNI/hPPE/Dox(+)SNI/hPPE/Dox(+)组和组和SNI/hPPE/Dox(-)SNI/hPPE/Dox(-)组相比，组相比， * * P P0.050.05诱导表达后诱导表达后结果提示结果提示 具有良好的可控性镇痛效果具有良好的可控性镇痛效果病毒转基因镇痛病毒转基因镇痛结果提示结果提示 蛛网膜下腔注射病毒后，具有良蛛

8、网膜下腔注射病毒后，具有良好的可控性镇痛效果好的可控性镇痛效果优点优点操作简单，容易实现操作简单，容易实现外源基因表达效率高外源基因表达效率高缺点缺点慢病毒应用于基因治疗，暂无长期临床慢病毒应用于基因治疗，暂无长期临床观察，因此有病毒的生物安全性担忧观察，因此有病毒的生物安全性担忧病毒转基因镇痛病毒转基因镇痛成成 果果发表文章发表文章 1. Xuebi T, Gongming W, Yuke T, et al. An improved Tet-on system for expression in neurons delivered by a single lentiviral vector.

9、 Hum Gene Ther. 2009, 20:113123. 2. Xu Y，Tian XB，Tian YK, et al. Lumbar transplantation of immortalized enkephalin-expressing astrocytes attenuates chronic neuropathic pain. Eur J Pain. 2008, 12(4):525-33. 3. An K, Tian YK, et al. Immortalized Rat Astrocyte Strain Genetically Modified by Rat Preprog

10、alanin Gene. Journal of Huazhong of University Science and Technology Med Sci, 2005, 25(2): 144-146. .安珂, 田玉科, 杨辉, 高峰, 王鹏. 猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠星形胶质细胞株的构建. 中华麻醉学杂志, 2004, 24(11): 838-841. .杨辉, 田玉科, 王鹏, 安珂, 高峰, 吴小兵, 梅伟. 重组人前脑啡肽原基因腺相关病毒载体的构建. 中华麻醉学杂志, 2005, 25(1): 34-36. .高峰, 田玉科, 杨辉, 安珂, 张传汉. 猿肾病毒40大T抗原基

11、因永生化大鼠神经前体细胞株的构建. 中华麻醉学杂志, 2005, 25(8): 597-600. . . . . . . 疫疫 苗苗 镇镇 痛痛疫疫 苗苗 原原 理理体液免疫体液免疫 抗原识别抗原识别 B B细胞活化、增殖与分化细胞活化、增殖与分化 合成分泌抗体并发挥效应合成分泌抗体并发挥效应抗原抗体疫苗的应用疫苗的应用传染病传染病1. During1. During等构建的疫苗等构建的疫苗AAV/NR1AAV/NR1，产生，产生NR1NR1抗体，可用于脑缺血和癫痫抗体，可用于脑缺血和癫痫 的治疗的治疗 2. Schenk2. Schenk等研究发现，等研究发现，A42A42多肽疫苗可诱导产生

12、抗体，治疗多肽疫苗可诱导产生抗体，治疗ADAD疫苗应用于慢性癌痛疫苗应用于慢性癌痛？神经系统疾病：神经系统疾病：脑缺血、癫痫脑缺血、癫痫、阿尔茨海默病、阿尔茨海默病 （Alzheimer disease,ADAlzheimer disease,AD） 镇镇 痛痛 疫疫 苗苗疼痛疼痛NR2BNR2BNR2B拮抗剂拮抗剂 NR2B siRNANR2B siRNA以以NR2BNR2B为靶点，将为靶点，将NR2BNR2B作为抗原诱导机体产作为抗原诱导机体产生生NR2BNR2B抗体，拮抗抗体，拮抗NR2BNR2B或下调其表达，用于癌痛或下调其表达，用于癌痛治疗治疗NMDANMDA受体受体2B2B亚基亚基

13、NR2BNR2B疫苗疫苗构建构建NR2BNR2B全基因镇痛疫苗全基因镇痛疫苗NR2BNR2B重组腺病毒重组腺病毒 recombinant adenovirus 5-recombinant adenovirus 5- mediated NR2B (rAd5/NR2B) mediated NR2B (rAd5/NR2B)质粒质粒pDC515/NR2BpDC515/NR2B转转染染293293细胞细胞镇痛疫苗镇痛疫苗rAd5/NR2BrAd5/NR2BNR2BNR2B全基因镇痛疫苗全基因镇痛疫苗NR2BNR2B特异性抗体特异性抗体镇痛疫苗镇痛疫苗rAd5/NR2BrAd5/NR2BNR2BNR2B多

14、肽多肽大鼠免疫后产生大鼠免疫后产生NR2BNR2B抗体的滴度抗体的滴度“ ”“ ”加强免疫的时间加强免疫的时间12NR2B 180kDa-actin 42kDa3与空白对照组和病毒空载体组比较，与空白对照组和病毒空载体组比较，* *P P0.050.05大鼠免疫后脊髓大鼠免疫后脊髓NR2BNR2B表达下调表达下调1 1：空白对照组：空白对照组2 2：病毒空载体对照组：病毒空载体对照组3 3：病毒疫苗免疫组：病毒疫苗免疫组大鼠免疫后镇痛效果评价大鼠免疫后镇痛效果评价与术前比较，与术前比较，P P0.050.05；与空白对照组和；与空白对照组和病毒空载体组相比，病毒空载体组相比，* * P P0.

15、050.05镇痛疫苗可发挥超前镇痛作用镇痛疫苗可发挥超前镇痛作用结果提示结果提示免疫后免疫后表表 位位 疫疫 苗苗表位疫苗表位疫苗 表位：表位：抗原表位（抗原表位（epitopeepitope） 抗原被抗体识别的特异性位点抗原被抗体识别的特异性位点抗体抗体多肽抗原多肽抗原抗体抗体表位抗原表位抗原抗体抗体表表 位位 疫疫 苗苗NR2BNR2B多肽多肽NR2BNR2B表位表位基因基因NR2BNR2B表位疫苗表位疫苗rAd5/eNR2BrAd5/eNR2B镇痛作用镇痛作用筛选筛选NR2BNR2B表位表位大鼠免疫后产生大鼠免疫后产生NR2B抗体的滴度抗体的滴度大鼠免疫后脊髓大鼠免疫后脊髓NR2B表达下

16、调表达下调NB2B-actin1 1：空白对照组：空白对照组2 2：表位疫苗免疫组：表位疫苗免疫组3 3：载体对照组：载体对照组与空白对照组和载体对照组比较，与空白对照组和载体对照组比较，* *P P0.050.05大鼠免疫后镇痛效果评价大鼠免疫后镇痛效果评价NR2BNR2B表表位位疫疫苗苗能能够够更更加加有有效效地地诱诱发发免免疫疫反应，产生良好的镇痛效果反应，产生良好的镇痛效果结果提示结果提示与术前比较，与术前比较，P P0.050.05；与空白对照组和病毒空载体组相比，；与空白对照组和病毒空载体组相比，* * P P0.050.05“”免疫时间免疫时间免疫后免疫后表表 位位 疫疫 苗苗优

17、点优点 提高免疫效应提高免疫效应 特异性强特异性强缺点缺点 过程复杂过程复杂 表位筛选困难表位筛选困难NR2BNR2B作用广泛作用广泛疼痛疼痛认知功能认知功能运动功能运动功能神经元凋亡神经元凋亡突触可塑性突触可塑性NR2B疫苗的安全性评价疫苗的安全性评价检测大鼠检测大鼠海马及脊海马及脊髓神经元髓神经元的凋亡的凋亡MorrisMorris水迷水迷宫检测大鼠宫检测大鼠的认知功能的认知功能认知认知检测海马长检测海马长时程增强时程增强(LTP)(LTP)现象现象突触突触以大鼠游以大鼠游泳速度评泳速度评价其运动价其运动功能功能凋亡凋亡疫苗疫苗结果提示结果提示 镇痛疫苗不会引起大鼠脊髓及海马神经元的凋亡增

18、镇痛疫苗不会引起大鼠脊髓及海马神经元的凋亡增 加，也不会损害大鼠的认知功能和运动功能，但是加，也不会损害大鼠的认知功能和运动功能，但是 会削弱海马会削弱海马CA1CA1区区LTPLTP的产生与维持的产生与维持运动运动镇痛疫苗的安全性有待更进一步研究！镇痛疫苗的安全性有待更进一步研究！ rAd5/NR2B镇痛疫苗现已申请发明专利镇痛疫苗现已申请发明专利 （ 专利申请号专利申请号 200710168964.7200710168964.7）发表文章：发表文章：1. Wang GM,Tian YK,et al.Gene Ther,2007,14(24):1681-7. 2. Wang GM,Tian

19、YK,et al.Chin Med J(Engl), 2007,120(8): 643-7. 3. 王公明,田玉科,等.中华麻醉学杂志,2007,27(8):699-702. 4. 陈建平,田玉科,等.中华麻醉学杂志,2006,26(10):948-951. 5. 陈建平,田玉科,等.中华麻醉学杂志,2007,27(12):1100-1103. 6. 王公明,田玉科,等.中华麻醉学杂志,2008,28,9:783-786. 成成 果果靶向细胞毁损镇痛靶向细胞毁损镇痛分子靶向治疗分子靶向治疗分子靶向治疗分子靶向治疗受体靶向技术受体靶向技术有的放矢有的放矢一种以细胞受体、关键基因和调控分子一种以细

20、胞受体、关键基因和调控分子为靶点的新型治疗为靶点的新型治疗下行易化系统下行易化系统延髓头端腹内侧核（延髓头端腹内侧核（RVMRVM） 脑干下行抑制脑干下行抑制/ /易化系统易化系统下行易化系统下行易化系统 阿片受体阳性易化神经元阿片受体阳性易化神经元受体神经元受体神经元靶靶 点点阿片受体阿片受体阿片受体阳性易化神经元细胞膜表面阿片受体阳性易化神经元细胞膜表面特异性表达特异性表达阿片受体阿片受体以以阿片受体为靶点，特异性损毁易化阿片受体为靶点，特异性损毁易化神经元可阻断疼痛的下行易化系统，达神经元可阻断疼痛的下行易化系统，达到镇痛的目的到镇痛的目的阿片受体受体靶向技术受体靶向技术自杀自杀基因基因

21、配体偶联物配体偶联物( (免疫偶联物免疫偶联物) ) 实现治疗的靶向性实现治疗的靶向性配体配体内吗啡肽内吗啡肽-caspase3-caspase3耦联体耦联体耦联体耦联体结合结合阿片受体阿片受体内吞内吞吞噬体形成吞噬体形成耦联体裂解耦联体裂解凋亡凋亡内吗啡肽内吗啡肽 Caspase-3靶向毁损镇痛靶向毁损镇痛RVMRVM区区注射注射受体阳性神经元特异受体阳性神经元特异性表达性表达caspase3caspase3受体阳性神经受体阳性神经元凋亡元凋亡镇痛作用镇痛作用内吗啡肽内吗啡肽Caspase-3结果提示结果提示 区注射后具有良好的镇痛效果区注射后具有良好的镇痛效果受体靶向毁损镇痛受体靶向毁损镇

22、痛优点优点 靶向性强靶向性强 镇痛效果确切（安全性有待进一步研究）镇痛效果确切（安全性有待进一步研究）缺点缺点 工艺复杂，成本高工艺复杂，成本高转染率低转染率低成成 果果发表文章发表文章1. Cao F，Tian YK,et al. Regulation of spinal neuroimmune responses by prolonged systemic morphine treatment in a rat model of cancer induced bone pain. Brain Res .（ Revision ）2.2.肖兴鹏肖兴鹏, ,田玉科田玉科, ,等等. . 第四军医

23、大学学报第四军医大学学报, 2008, 29(24)., 2008, 29(24).3.3.曹菲曹菲, ,田玉科田玉科, ,等等. . 中华麻醉学杂志中华麻醉学杂志, 2008, 28(6). , 2008, 28(6). 4.4.曹菲曹菲, ,田玉科田玉科, ,等等. . 中国组织工程研究与临床康复中国组织工程研究与临床康复, 2007, 50(11)., 2007, 50(11).5.5.许爱军许爱军, ,田玉科田玉科, ,等等. . 中国疼痛医学杂志中国疼痛医学杂志, 2008, 14(3)., 2008, 14(3).展望展望有待解决的问题有待解决的问题安全性安全性其他生物学功能其他生

24、物学功能临床临床未来疼痛治疗的新策略未来疼痛治疗的新策略希望与困难并存希望与困难并存致谢致谢国家自然科学基金委员会国家自然科学基金委员会. .去永生化转脑啡肽基因神经细胞的构建及其镇痛效应研去永生化转脑啡肽基因神经细胞的构建及其镇痛效应研 究（项目编号：究（项目编号：3017090530170905），），2002.12002.12004.122004.12. .N-N-甲基甲基-D-D-天门冬氨酸受体天门冬氨酸受体2B2B亚基表位疫苗的构建及其镇痛亚基表位疫苗的构建及其镇痛效应的研究（项目编号：效应的研究（项目编号：3047166030471660），），2005.12005.12007.122007.12. .受体靶向毁损癌痛大鼠脑干下行易化系统镇痛效应的研究受体靶向毁损癌痛大鼠脑干下行易化系统镇痛效应的研究（项目编号：（项目编号：3067202730672027），），2007.12007.12009.122009.12. .NG2NG2细胞在大鼠神经病理性痛中的作用及其机制研究（项目细胞在大鼠神经病理性痛中的作用及其机制研究（项目编号：编号：30872441 30872441 ）2009.012011.12 2009.012011.12