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1、实验四实验四 外周血单个核细胞的分离外周血单个核细胞的分离1外周血单个核细胞的分离外周血单个核细胞的分离（Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞胞）原理： 外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分离液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。2血液成分 红细胞 T细胞血液 血小板 淋巴细胞 B细胞 白细胞 单个核细胞 NK细胞 （PBMC） 单核细胞 多形核细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 中性粒细胞3血液中各个成分密度血液中各个成分密度红细胞 1.093g/ml多形核细胞 1.092g/m
2、l单个核细胞 1.076g/ml（1.0751.090）血小板 1.0301.035g/mlFicoll液 1.0770.001聚蔗糖+泛影葡胺4方法：1、抽取外周血1ml+等量Hanks液混匀放入A管52、取Ficoll液2ml加入B管63、吸管吸取A管内血沿倾斜的B管管壁缓慢加入74、水平离心，室温，2000rpm，20min85、吸取PBMC层移入另一试管96、加足量稀释液充分洗涤，弃上清10注意：1、在Ficoll液上加稀释外周血时，应缓慢加，两者之间要形成一个清晰的界面2、水平离心，室温，缓升缓降3、吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分离液而导致血小板的污染11谢 谢！12
