平面色谱法ppt课件

《平面色谱法ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《平面色谱法ppt课件（48页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、仪仪 器器 分分 析析INSTRUMENTAL ANALYSIS 教教 师：师： 谢谢 宝宝 平平平面色谱法平面色谱法 （plane chromatography)第一节第一节 概述概述平面色平面色谱谱法（法（PC）：）： 在平面上在平面上进进行分离行分离n纸色谱法纸色谱法 n薄层色谱法薄层色谱法n薄膜色谱法薄膜色谱法一、平面色谱法的特点一、平面色谱法的特点固定相一次使用，样品预处理简单，固定相一次使用，样品预处理简单，对被分离物质没对被分离物质没对被分离物质没对被分离物质没有限制有限制有限制有限制分离能力强，展开时间短，一次可以同时展开多个试分离能力强，展开时间短，一次可以同时展开多个试分离

2、能力强，展开时间短，一次可以同时展开多个试分离能力强，展开时间短，一次可以同时展开多个试样样样样 所用仪器简单，操作方便所用仪器简单，操作方便所用仪器简单，操作方便所用仪器简单，操作方便缺点：自动化程度低，分辨率和重现性较差缺点：自动化程度低，分辨率和重现性较差二、平面色谱的主要技术参数二、平面色谱的主要技术参数平面色谱定性参数及相平衡参数平面色谱定性参数及相平衡参数比移值比移值 相对比移值相对比移值平面色谱分离评价参数平面色谱分离评价参数分离度分离度平面色谱板效参数平面色谱板效参数理论塔板数理论塔板数 理论塔板高度理论塔板高度1、平面色谱定性参数及相平衡参数关系、平面色谱定性参数及相平衡参数

3、关系比移值：比移值：溶质移动距离溶质移动距离与流动相移动距离之比与流动相移动距离之比定性参数定性参数相对比移值相对比移值Rs 讨论讨论参参考考物物与与被被测测组组分分在在完完全全相相同同条条件件下下展展开开；可可消消除除系系统统误误差差，提高重现性和可靠性提高重现性和可靠性相相对对比比移移值值Rs与与组组分分、参参考考物物性性质质及及色色谱谱条条件件有有关关，范范围围可可以大于或小于以大于或小于1参比物参比物i被测物被测物s原点原点L2L1讨论讨论 Rf与与K有有关关，即即与与组组分分性性质质、平平面面板板和和展展开开剂剂的的性性质有关质有关 K大，大，Rf小小色色谱谱条条件件一一定定，Rf只

4、只与与组组分分性性质质有有关关，是是平平面面色色谱谱基本定性参数，说明组分保留行为基本定性参数，说明组分保留行为Rf范围：范围：0 Rf 1 Rf = 0.20.8（常用）；（常用）；0.30.5（最佳）（最佳）相平衡参数相平衡参数2、平面色谱分离评价参数、平面色谱分离评价参数分离度：分离度：两相邻斑点中心距离与两斑点平均两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度（直径）的比值宽度（直径）的比值相临两斑点间距离越大，斑点越相临两斑点间距离越大，斑点越集中，分离度越大，分离效率越高集中，分离度越大，分离效率越高当当R1.5时，相临斑点可达到基时，相临斑点可达到基线分离线分离TLC分离度与比移值的关系分离

5、度与比移值的关系Rf =0.3 时时 分离度分离度R最大最大Rf = 0.20.5时时 分离度分离度R变化不大变化不大Rf 0.1或或Rf 0.7时时 分离度分离度R急剧下降急剧下降 3、平面色谱板效参数、平面色谱板效参数理论塔板高度理论塔板高度L为原点距斑点中心的距离为原点距斑点中心的距离W为组分斑点的宽度为组分斑点的宽度L0为原点距溶剂前沿的距离为原点距溶剂前沿的距离理论塔板数理论塔板数W 越小，越小，n 越大，越大，H 值越小，板效越高值越小，板效越高一、概述一、概述1定义：定义： 将将固固定定相相均均匀匀涂涂布布在在表表面面光光滑滑的的平平板板上上，形形成薄层而进行色谱分离和分析的方法

6、。成薄层而进行色谱分离和分析的方法。第二节、薄层色谱法第二节、薄层色谱法 TLCTLC2分离机制分离机制 吸附薄层色谱吸附薄层色谱 分配薄层色谱分配薄层色谱 空间排阻薄层色谱空间排阻薄层色谱 胶束薄层色谱胶束薄层色谱二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料氧化铝、硅胶氧化铝、硅胶聚酰胺聚酰胺、纤维素纤维素（一）固定相（一）固定相吸附剂吸附剂1.1.硅胶：最常用的吸附剂，硅胶：最常用的吸附剂，SiOSiO2 2XHXH2 2O Op吸附的原因吸附的原因 氢键作用氢键作用吸附活性中心吸附活性中心硅胶含水量硅胶含水量%05152538活性级活性级吸附强弱：吸附强弱： 五级五级; 级数高级数高, 含水

7、量大含水量大, 吸附力弱吸附力弱1）物质极性）物质极性，吸附能力，吸附能力 强极性吸附中心，不易洗脱强极性吸附中心，不易洗脱2）吸水）吸水占用活性位点占用活性位点失活失活105110OC烘干烘干30min(活化活化)，吸附力最大，吸附力最大 500OC烘干烘干(不可逆失水不可逆失水)无吸附力无吸附力适用：适用：硅胶具微酸性，分析酸性或中性物质硅胶具微酸性，分析酸性或中性物质 pp 硅胶特性：硅胶特性：pp1.1.硅胶：最常用的吸附剂，硅胶：最常用的吸附剂，SiOSiO2 2XHXH2 2O Op碱碱性性（pH 910）: 分分离离碱碱性性及及中中性性化化合合物物。如生物碱等。如生物碱等。p酸酸

8、性性（pH 45）: 用用于于分分离离酸酸性性中中性性物物质质。如如酸性色素、氨基酸等。酸性色素、氨基酸等。 p中中性性（pH 7.5）: 用用途途最最广广，适适于于分分析析酸酸性性碱碱性性和中性物和中性物质质，如生物碱、，如生物碱、挥发挥发油、甾体等。油、甾体等。 2.2.氧化铝氧化铝p吸附的原因吸附的原因氢键氢键。p吸附吸附强强弱：弱： 五五级级，级级数高，含水量大，吸附力弱数高，含水量大，吸附力弱 2.2.氧化铝氧化铝氧化铝含水量氧化铝含水量%0361015活性级活性级p 常常用用的的是是聚聚己己内内酰酰胺胺，商商名名为为锦锦纶纶、尼尼龙龙-6、卡卡普隆等。普隆等。p 吸附的原因吸附的原

9、因氢键氢键 聚聚酰酰胺胺分分子子内内存存在在着着许许多多酰酰胺胺基基，可可与与酚酚、酸酸、醌醌等形成等形成氢键氢键 氢键能力氢键能力强，组分越后出柱强，组分越后出柱 3. 3.聚酰胺聚酰胺疏水改性硅胶疏水改性硅胶（非极性键合相）（非极性键合相）4.4.改性硅胶改性硅胶 借化学反应方法将有机分子以共价键连接在硅醇借化学反应方法将有机分子以共价键连接在硅醇基上，称化学键合固定相。基上，称化学键合固定相。 亲水改性硅胶亲水改性硅胶（极性键合相）（极性键合相） 介于极性和疏水改性吸附剂间的色谱选择性介于极性和疏水改性吸附剂间的色谱选择性反相色谱采用高含水溶剂，需低疏水改性硅胶反相色谱采用高含水溶剂，需

10、低疏水改性硅胶玻板：玻板： 5cm10cm、10cm20cm、20cm20cm（二）载板（二）载板 具一定机械强度，化学惰性，耐一定温度、表面具一定机械强度，化学惰性，耐一定温度、表面平整、厚度均匀、价格便宜平整、厚度均匀、价格便宜光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料含粘结剂固定相：含粘结剂固定相： 硅胶硅胶G含含13%15%煅石膏煅石膏 制备硅胶制备硅胶G含含30%煅石膏煅石膏 氧化铝氧化铝G含含9%煅石膏煅石膏不含粘结剂固定相：硅胶不含粘结剂固定相：硅胶H（三）粘结剂（三）粘结剂 加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板的润湿性

11、加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板的润湿性1）无机粘结剂：煅石膏）无机粘结剂：煅石膏二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料2）有机粘结剂：）有机粘结剂： 羧甲基纤维素钠（羧甲基纤维素钠（CMC） 0.8%CMC溶液配匀浆涂铺的薄层板强度高，色谱分离性能好注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解（三）粘结剂（三）粘结剂二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料作用：作用：适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光背景，清晰显示化合物的暗斑背景，清晰显示化合物的暗斑短波荧光指示剂：短波荧光指示剂： 254nm 锰激活的硅酸锌；钠荧光素，

12、阴极绿锰激活的硅酸锌；钠荧光素，阴极绿长波荧光指示剂：长波荧光指示剂： 365nm 银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝（四）荧光指示剂（四）荧光指示剂二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料 硅胶硅胶H不含粘合剂 硅胶硅胶G硅胶和煅石膏混合而成 硅胶硅胶HF254不含粘结剂，含荧光指示剂荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景呈现强绿色荧光背景 硅胶硅胶GF254同时含粘结剂和荧光指示剂荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景呈现强绿色荧光背景硅胶硅胶HF254+365不含粘结剂，含荧光剂荧光剂 254 nm和和356 nm呈现荧光背景呈现荧光背景（五）展开剂（五）展

13、开剂二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料石油醚石油醚石油醚石油醚 环己烷环己烷环己烷环己烷 四氯化碳四氯化碳四氯化碳四氯化碳 苯苯苯苯 甲苯甲苯甲苯甲苯 二氯甲烷二氯甲烷二氯甲烷二氯甲烷 氯仿氯仿氯仿氯仿 乙醚乙醚乙醚乙醚 乙酸乙酯乙酸乙酯乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮丙酮丙酮 正丙醇正丙醇正丙醇正丙醇 乙醇乙醇乙醇乙醇 甲醇甲醇甲醇甲醇 吡啶吡啶吡啶吡啶 酸酸酸酸 水水水水1、常用展开剂（按极性从小到大）、常用展开剂（按极性从小到大）首选单一溶剂，再选混合溶剂（由简至繁）首选单一溶剂，再选混合溶剂（由简至繁） 若二元溶剂系统不够理想可考虑多元溶剂系统若二元溶剂系统不够理想可考虑多元溶剂系统2

14、、展开剂的选择：、展开剂的选择：（五）展开剂（五）展开剂极性组分极性组分吸附活性小的薄层板，极性大的展开剂吸附活性小的薄层板，极性大的展开剂非极性组分非极性组分吸附活性大的薄层板，极性小的展开剂吸附活性大的薄层板，极性小的展开剂2. 展开剂的选择：展开剂的选择：（五）展开剂（五）展开剂以感兴趣以感兴趣Rf值是否在值是否在0.30.5间为衡量标准间为衡量标准氯仿氯仿展开展开选极性强的展开剂或加入一定的极性溶剂，选极性强的展开剂或加入一定的极性溶剂，如乙醇、丙酮，会使如乙醇、丙酮，会使Rf值变大值变大Rf值太小值太小Rf值太大值太大选极性弱的展开剂或加入一定的极性小的溶选极性弱的展开剂或加入一定的

15、极性小的溶剂，如环已烷、乙醚，会使剂，如环已烷、乙醚，会使Rf值更小值更小酸性组分加入一定比例的酸，可防止斑点拖尾碱性物质氧化铝为吸附剂，中性溶剂为展开剂 硅胶为吸附剂，碱性展开剂四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程p1 1、材料准备、材料准备(1) 选板：玻璃板、选板：玻璃板、塑料膜塑料膜、金属铝箔金属铝箔 表面光滑、平整清洁(2) 固定相（吸附剂）固定相（吸附剂） 粘合剂：CMC-Na、煅石膏、淀粉等(3) 流动相（展开剂）流动相（展开剂）(4) 显色剂显色剂四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程p2 2、薄层制备（铺板）、薄层制备（铺板） 1

16、份吸附剂份吸附剂+3份粘合剂份粘合剂+水水 调成糊状，均匀涂布薄层板调成糊状，均匀涂布薄层板涂铺方法：涂铺方法： 倾注法 、平铺法、涂铺器 、喷雾法吸附剂活性越高，活性级别越低；最好二级或三级吸附剂活性越高，活性级别越低；最好二级或三级 不可将刚涂布好的薄层板立即烘烤活化不可将刚涂布好的薄层板立即烘烤活化p3 3、活化、活化四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程铺成的薄层，置于水平台面上晾干或热风吹干薄层放置110烘30min，干燥器中备用4 4、点样、点样溶解试样的溶剂尽量避免用水溶解试样的溶剂尽量避免用水配置试样浓度约为配置试样浓度约为0.01%0.1%点样点样四、薄层色谱操作过程四、薄

17、层色谱操作过程点样装置：点样装置：容量毛细管；自动薄层色谱点样仪容量毛细管；自动薄层色谱点样仪点样原点应小而圆，距板点样原点应小而圆，距板边缘边缘2cm 多次点样（每次挥干后），多次点样（每次挥干后），防止扩散效应防止扩散效应 点样量勿超载，防止拖尾点样量勿超载，防止拖尾 点样勿伤及薄层表面点样勿伤及薄层表面5、展开、展开四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程（1）展开装置）展开装置立式立式卧式卧式展开原理：薄板一端浸入展开剂，展开原理：薄板一端浸入展开剂，点样点不可接触展开剂点样点不可接触展开剂，展开剂，展开剂借助借助毛细作用毛细作用上升，带动样品中组分的迁移。上升，带动样品中组分的迁移。

18、常为圆形或方形玻璃缸，缸上具常为圆形或方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖，应能密闭。有磨口玻璃盖，应能密闭。5、展开、展开四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程（2）展开方式）展开方式软板只能进行近水平展开软板只能进行近水平展开硬板可近水平、下行、上行、径向、双向、多次展开，硬板可近水平、下行、上行、径向、双向、多次展开， 上行法上行法展开最为常用展开最为常用5、展开、展开展开室预先用展开剂饱和展开室预先用展开剂饱和（平衡系统，平衡系统，减少边缘效应减少边缘效应）点样薄板一端浸入展开剂展开（距边缘点样薄板一端浸入展开剂展开（距边缘0.51 cm）展开至一定距离后取出薄板展开至一定距离后取出薄板挥

19、尽溶剂挥尽溶剂四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程（3）展开过程）展开过程37 6、定位、定位光学检出法：直接观察、荧光显示技术光学检出法：直接观察、荧光显示技术试剂显色法：喷雾显色法，浸渍显色法试剂显色法：喷雾显色法，浸渍显色法四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程n薄层色谱常用通用型显色剂薄层色谱常用通用型显色剂 碘蒸气法碘蒸气法 10%硫酸乙醇溶液硫酸乙醇溶液 0.05%荧光黄甲醇溶液荧光黄甲醇溶液定位方法测出测出Rf值值 相同条件下展开，与已知标准物质对照相同条件下展开，与已知标准物质对照进行定性鉴别。进行定性鉴别。7、定性分析、定性分析四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程对

20、未知样品，要几个展开体系均有一致对未知样品，要几个展开体系均有一致R Rf f 值，或双向值，或双向展开法确认。展开法确认。8、定量分析、定量分析四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程洗脱法洗脱法 薄层扫描薄层扫描 目视比色目视比色 比较色斑大小、比较色斑大小、深浅。深浅。误差误差10-30刮下刮下溶解溶解光度法测定光度法测定误误差差5%误差误差5%1、薄层扫描法检测茶碱中毒者血清中茶碱浓度、薄层扫描法检测茶碱中毒者血清中茶碱浓度2、TLC同时测定同时测定10种精神安定药物血药浓度种精神安定药物血药浓度3、异烟肼中毒快速检验、异烟肼中毒快速检验4、尿液中利福平的测定、尿液中利福平的测定5、薄

21、层扫描法测定血浆中的度冷丁、薄层扫描法测定血浆中的度冷丁五、薄层色谱的应用五、薄层色谱的应用 中草药和中成药的鉴别及成分分析中草药和中成药的鉴别及成分分析 判断合成反应进行的程度判断合成反应进行的程度 药物的纯度和杂质限量试验药物的纯度和杂质限量试验 临床药物分析临床药物分析2010版药典（二部）采用版药典（二部）采用TLC的品种数量，共的品种数量，共435个个TLC品种数量品种数量硅胶硅胶G254个品种个品种硅胶硅胶G254148个品种个品种硅胶硅胶H15个品种个品种硅胶硅胶HF25412个品种个品种硅藻土硅藻土2个品种个品种微晶纤维素微晶纤维素3个品种个品种氧化铝氧化铝1个品种个品种200

22、5年版收载薄层色谱定性鉴别年版收载薄层色谱定性鉴别1507项项2010年版新增薄层色谱定性鉴别年版新增薄层色谱定性鉴别2494项项味连 雅连 云连三种黄连的薄层色谱图像种黄连的薄层色谱图像北五味子与南五味子的薄层色谱鉴别北五味子Fructus Schisandriae chineses南五味子FructusSchisandriae sphenantheraeReferenceg-g-schisandrin（五味子乙素）（五味子乙素）Schizandrin（五味子甲素）（五味子甲素）Schisantherin (Gomisin C)（五味子酯甲）（五味子酯甲）Schisandrin (五味子醇甲

23、）五味子醇甲）白芷异欧前胡素异欧前胡素欧前胡素欧前胡素 1 2 3 s 4 5 61白芷（浙江）白芷（浙江） 2白芷（磐安）白芷（磐安） 3白芷（杭州）白芷（杭州）4白芷对照药材白芷对照药材5、6白芷（四川遂宁）白芷（四川遂宁）第三节第三节 纸色谱法纸色谱法 将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液-液分配色谱法固定相：固定相：纸上所含水分或其他物质纸上所含水分或其他物质流动相：水不互溶的有机溶剂流动相：水不互溶的有机溶剂 （水饱和的正丁醇）（水饱和的正丁醇）分离机制：同液分离机制：同液-液分配色谱液分配色谱分离对象：极性化合物，如糖类分离对象：极性化合物，如糖类滤纸选择：中速滤纸最常用滤纸选择：中速滤纸最常用 质地均匀平整，具有一定机械强度质地均匀平整，具有一定机械强度第三节第三节 纸色谱法纸色谱法u滤纸的选择滤纸的选择u点样点样u选择展开剂选择展开剂u展开展开u检出检出uRf值的测量值的测量u定性定量分析定性定量分析纸色谱操作