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1、食品中兽药残留量的分析食品中兽药残留量的分析第一节第一节 概概 述述使用兽药的目的兽药的主要用途有：兽药的主要用途有：防病治病、防病治病、促进生长、促进生长、提高饲料利用率、提高饲料利用率、改善动物性食品的品质等。改善动物性食品的品质等。兽药和兽药残留兽药和兽药残留 兽药：兽药：预防和治疗畜禽疾病的药物；促进生预防和治疗畜禽疾病的药物；促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质；长、提高生产性能、改善动物性食品的品质；也包括一些化学的、生物的动物保健品或饲也包括一些化学的、生物的动物保健品或饲料添加剂。料添加剂。兽药残留：兽药残留：“兽药在动物性食品中的残留兽药在动物性食品中的残留”的简称，
2、是指动物产品的任何可食部分所含的简称，是指动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及（或）其代谢物，以及兽药的母体化合物及（或）其代谢物，以及与兽药有关的杂质。与兽药有关的杂质。u 抗生素类：四环素、氯霉素、磺胺类、呋喃类等；抗生素类：四环素、氯霉素、磺胺类、呋喃类等；u- -兴奋剂：盐酸克伦特罗、己烯雌酚、孕酮等；兴奋剂：盐酸克伦特罗、己烯雌酚、孕酮等；u激素：己烯雌酚、孕酮等；激素：己烯雌酚、孕酮等；u 抗抗寄寄生生虫虫类类：左左旋旋咪咪唑唑、苯苯丙丙咪咪唑唑、克克并并咪咪唑唑、克克球球酚酚、吡喹酮等。吡喹酮等。兽药残留的类型兽药残留的来源兽药残留的来源在食品动物体内或动物性食品中发现的
3、违章在食品动物体内或动物性食品中发现的违章残留残留,大都是由用药错误造成的大都是由用药错误造成的,其原因主要有其原因主要有:不正确地应用药物不正确地应用药物,如用药剂量、给药途径、如用药剂量、给药途径、用药部位和用药动物的种类等不符合用药指用药部位和用药动物的种类等不符合用药指示示,这些因素有可能延长药物残留在体内的时这些因素有可能延长药物残留在体内的时间间,从而需要增加休药的天数从而需要增加休药的天数;在休药期结束前屠宰动物在休药期结束前屠宰动物;屠宰前用药掩饰临床症状屠宰前用药掩饰临床症状,以逃避屠宰前检查以逃避屠宰前检查; 以未经批准药物作为添加剂饲喂动物以未经批准药物作为添加剂饲喂动物
4、;药物标签上的用法指示不当药物标签上的用法指示不当,造成违章残留物造成违章残留物;饲料粉碎设备受污染饲料粉碎设备受污染或将盛过抗菌药物的容或将盛过抗菌药物的容器用于贮藏饲料器用于贮藏饲料;接触接触厩舍粪尿池中含有抗生素等药物的厩舍粪尿池中含有抗生素等药物的废水废水和排放的污水和排放的污水(如猪经常摄入这种污水如猪经常摄入这种污水);任意以抗生素药渣喂猪或其他食品动物等滥任意以抗生素药渣喂猪或其他食品动物等滥用抗生素用抗生素,是出现抗生素残留的主要原因。是出现抗生素残留的主要原因。美国食品药物管理局美国食品药物管理局(FDA)和美国兽医中心和美国兽医中心(CVM)的调查结果表明的调查结果表明,引
5、起违章药物残留的常见原因为引起违章药物残留的常见原因为:不遵守休药期不遵守休药期;使用未经批准的药物使用未经批准的药物;未做用药记录未做用药记录;饲料加工或运送错误饲料加工或运送错误;盛放它种药物的贮存容器未充分清洗干盛放它种药物的贮存容器未充分清洗干净等。净等。兽药残留的危害兽药残留的危害v 毒性作用：毒性作用：急性、慢性、三致急性、慢性、三致v 耐药性：耐药性：耐药菌株传递给人耐药菌株传递给人v 过敏反应：过敏反应：青霉素、磺胺类等青霉素、磺胺类等v 激激素素（样样）作作用用：潜潜在在致致癌癌性性、发发育育毒性（儿童性早熟）等毒性（儿童性早熟）等v 污污染染环环境境，影影响响生生态态：进进
6、入入环环境境仍仍有有活性活性兽药残留限量标兽药残留限量标 90年代开始监控工作，年代开始监控工作，2002最新最新动物性食品中最高残留限量动物性食品中最高残留限量：可用，不限量：可用，不限量：88可用，需限量：可用，需限量：94可用，不得检出可用，不得检出9禁用，不得检出：禁用，不得检出：31我国食品中部分兽药的最高残留限量我国食品中部分兽药的最高残留限量药物药物食品食品最高残留限量最高残留限量(mg/kg)四环素四环素畜禽：肌肉畜禽：肌肉 0.1 肝肝 0.3 肾肾 0.6氯霉素氯霉素畜禽肉、水产品畜禽肉、水产品不得检出(检出限检出限0.01)磺胺类磺胺类畜禽（可食性组织）畜禽（可食性组织）
7、 0.1水产品水产品 0.1(单种）单种）猪肉、鸡肉、鸡蛋、牛肉猪肉、鸡肉、鸡蛋、牛肉0.1(以总量计以总量计)呋喃唑酮呋喃唑酮水产品水产品不得检出鸡肉、鸡蛋鸡肉、鸡蛋 0.1盐酸克伦特罗盐酸克伦特罗(瘦肉精）瘦肉精）畜禽肉畜禽肉不得检出(检出限检出限0.01)己烯雌酚己烯雌酚畜禽肉、水产品畜禽肉、水产品不得检出(检出限检出限0.05)兽药残留限量标准兽药残留限量标准兽药残留分析技术的特点兽药残留分析技术的特点待测物质浓度低待测物质浓度低样品基质复杂，干扰物质多样品基质复杂，干扰物质多兽药残留代谢产物多样或不明兽药残留代谢产物多样或不明动物种类多样，对药物代谢存在差异动物种类多样，对药物代谢存
8、在差异 兽药残留的检验方法兽药残留的检验方法 对检测方法的要求对检测方法的要求快速快速高通量高通量定量定量准确度和精确度准确度和精确度确证确证 兽药残留的检验方法兽药残留的检验方法 理想的仪器装备理想的仪器装备样品经简单处理即可上机测定样品经简单处理即可上机测定不需萃取和净化不需萃取和净化快速、准确的定量分析快速、准确的定量分析自动的资料处理自动的资料处理uELISA：简简单单、快快速速、灵灵敏敏度度，但但容容易易产产生生假假阳阳性性，一一般般只只适用进行样品适用进行样品粗筛粗筛，阳性结果需进行确证。，阳性结果需进行确证。u GC：灵灵敏敏度度较较高高，但但大大多多数数兽兽药药极极性性或或沸沸
9、点点偏偏高高，需需繁繁琐琐的衍生化步骤，限制了应用。的衍生化步骤，限制了应用。uHPLC：操操作作简简单单，但但灵灵敏敏度度不不高高；某某些些残残留留，检检出出限限达达不不到要求。到要求。u仪仪器器联联用用：分分离离、定定性性、定定量量一一体体，灵灵敏敏、准准确确、选选择择性性都都高，是国际公认的确认方法高，是国际公认的确认方法。 GC/MS、LC/MS等等兽药残留的分析方法兽药残留的分析方法u 筛选方法筛选方法u 检检测测和和确确认认方方法法：理理化化检检验验技技术术（GC、HPLC、TLC、GC-MS、HPLC-MS等）。等）。微生物检验（微生物抑制试验）微生物检验（微生物抑制试验）免疫法
10、（免疫检测试剂盒）免疫法（免疫检测试剂盒）阳性阳性兽药残留的分析方法兽药残留的分析方法u兽药残留的检验分析方法包括兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认筛选、检测和确认。GC和和GC-MS的区别的区别GC是指气相色谱仪。是指气相色谱仪。 一般来说一般来说 气象色谱仪使气象色谱仪使用的检测器用的检测器 有有npd fid fpd ecd等等等等如果气象色谱器没加上述常用检测器如果气象色谱器没加上述常用检测器 而是用而是用质谱当做检测器质谱当做检测器 那么就是那么就是GC-MS了，了，GC-MS一般指的是单级质谱一般指的是单级质谱 如果是二级质谱如果是二级质谱就是就是 GC-MS-MS了。了。
11、GC就是一个分离装置就是一个分离装置 严格说严格说 GC是没法单独是没法单独用的用的 必须加检测器必须加检测器 只不过人们习惯吧只不过人们习惯吧 GC-FID 、GC-ECD、GC-FPD等等等等 简称为简称为GC而而已。已。质谱分析质谱分析Mass Spectrometry，MS质谱分析法是通过对被测样品离子的质荷比质谱分析法是通过对被测样品离子的质荷比的测定来进行分析的一种分析方法。的测定来进行分析的一种分析方法。化合物分子受到电子流冲击后，形成的带正化合物分子受到电子流冲击后，形成的带正电荷分子离子及碎片离子，电荷分子离子及碎片离子，按照其质量按照其质量m和和电荷电荷z的比值的比值m/z
12、（质荷比）大小依次排列而（质荷比）大小依次排列而被记录下来的图谱，称为质谱被记录下来的图谱，称为质谱。质谱分析的过程与原理质谱分析的过程与原理不同的物质有不同的质量谱不同的物质有不同的质量谱质谱，利用质谱，利用这一性质，可以进行定性分析（包括分子质这一性质，可以进行定性分析（包括分子质量和相关结构信息）；谱峰强度也与它代表量和相关结构信息）；谱峰强度也与它代表的化合物含量有关，可以用于定量分析。的化合物含量有关，可以用于定量分析。化合物化合物C5H12O的质谱图的质谱图GC-MS的基本流程的基本流程GC-MS联用的优缺点联用的优缺点色谱仪有很强的色谱仪有很强的分离混合物的能力分离混合物的能力，
13、但是对，但是对化合物定性的能力差。化合物定性的能力差。质谱分析试样必须是高度纯净物，而质谱本质谱分析试样必须是高度纯净物，而质谱本身无分离混合物的能力，但是能身无分离混合物的能力，但是能用来测定化用来测定化合物的相对分子质量和化学结构合物的相对分子质量和化学结构，是一个优，是一个优良的定性工具。良的定性工具。GC-MS联用的优缺点联用的优缺点气相色谱气相色谱-质谱联用的时候，气相色谱法分离效能质谱联用的时候，气相色谱法分离效能高，定量准确，故气相色谱仪是质谱法的理想高，定量准确，故气相色谱仪是质谱法的理想分分离器离器；同样，质谱法灵敏度高，定性能力强，几；同样，质谱法灵敏度高，定性能力强，几乎
14、能检查出所有的有机化合物，故质谱仪是气相乎能检查出所有的有机化合物，故质谱仪是气相色谱法的理想色谱法的理想检测器检测器。气相色谱首先对挥发性的物质进行分离、定量；气相色谱首先对挥发性的物质进行分离、定量；质谱法再通过测定离子质量和强度来进行成分分质谱法再通过测定离子质量和强度来进行成分分析和结构分析。析和结构分析。因此，采用两者的联用，综合其因此，采用两者的联用，综合其优点，克服其不足。优点，克服其不足。第二节第二节 食品中抗生素类食品中抗生素类兽药残留检验兽药残留检验l 四环素类抗生素的残留检验四环素类抗生素的残留检验l 氯霉素类抗生素的残留检验氯霉素类抗生素的残留检验l 磺胺类兽药残留检验
15、磺胺类兽药残留检验l 硝基呋喃类兽药残留检验硝基呋喃类兽药残留检验四环素类抗生素的残留检验四环素类抗生素的残留检验v 常用的四环素类常用的四环素类四环素、土霉素、金霉素等四环素、土霉素、金霉素等允许使用，最高残留有限量允许使用，最高残留有限量v 常用的测定方法常用的测定方法HPLC、TLC、ELISA等等v HPLC法测定四环素类兽药残留法测定四环素类兽药残留原原理理：样样品品提提取取，微微孔孔滤滤膜膜过过滤滤，反反相相色色谱谱柱柱（ODS柱）分离，紫外检测器检测。柱）分离，紫外检测器检测。样品处理：样品处理：5%高氯酸提取、离心、过滤。高氯酸提取、离心、过滤。测测定定时时流流动动相相中中加加
16、入入NaH2PO4，调调节节pH=2.5，可可改善分离度及峰形。改善分离度及峰形。当当pHpI时时，蛋蛋白白质质以以阳阳离离子子形形式式存存在在，高高氯氯酸酸与之沉淀，离心除去。与之沉淀，离心除去。四环素类抗生素的残留检验四环素类抗生素的残留检验（A）空白养殖）空白养殖虾样虾样品品 （B）四种四）四种四环环素素类药类药物的养殖物的养殖虾样虾样品品定量方法定量方法：用系列标准品的浓度峰面积（峰高）绘制标准工作曲线，应该是一条通过原点的直线。 氯霉素类抗生素的残留检验氯霉素类抗生素的残留检验v 常用的氯霉素类（常用的氯霉素类（CAPs）氯氯霉霉素素、无无味味氯氯霉霉素素、乙乙酰酰氯氯霉霉素素、甲砜
17、霉素、弗甲砜霉素甲砜霉素、弗甲砜霉素骨髓细胞、肝细胞毒性骨髓细胞、肝细胞毒性禁用，不得检出禁用，不得检出v 常用的测定方法常用的测定方法GC、HPLC、LC-MS、ELISA等等v 气相色谱法气相色谱法原原理理：样样品品提提取取、净净化化、衍衍生生化化，毛毛细细管管气气相相色色谱谱柱柱分分离离，电电子子捕捕获获检检测测器检测。器检测。样样品品处处理理：乙乙氰氰提提取取、离离心心SPEC18柱净化柱净化-衍生化衍生化氯霉素类抗生素的残留检验氯霉素类抗生素的残留检验氯霉素类抗生素的残留检验氯霉素类抗生素的残留检验v LC-MS法检测（确认检验）法检测（确认检验）原原理理：乙乙酸酸乙乙酯酯提提取取，
18、浓浓缩缩后后水水解解，固相萃取柱净化，固相萃取柱净化，LC-MS联用检测联用检测GB-T 22338-2008 动物源性食品中氯霉动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定素类药物残留量测定磺胺类（磺胺类（SAs）兽药残留检验）兽药残留检验v 常用的磺胺类兽药常用的磺胺类兽药磺磺胺胺嘧嘧啶啶、磺磺胺胺甲甲噁噁唑唑、磺磺胺胺甲甲氧氧嘧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶啶、磺胺二甲基嘧啶对对过过敏敏反反应应者者有有致致敏敏作作用用；积积蓄蓄有有肝肝肾毒性；还可影响造血系统肾毒性；还可影响造血系统我国规定残留限量我国规定残留限量0.1mg/kg磺胺类药物结构磺胺类药物结构 基本结构为对氨苯磺酰胺，简称磺胺，基本结构为对
19、氨苯磺酰胺，简称磺胺， 具有芳氨基和磺酰胺基，多为两性化合物具有芳氨基和磺酰胺基，多为两性化合物 磺胺类药物的分子结构磺胺类药物的分子结构 磺胺类兽药残留检验磺胺类兽药残留检验v HPLC法测定磺胺类兽药残留法测定磺胺类兽药残留（最常用）（最常用）原原理理：乙乙腈腈提提取取，正正己己烷烷萃萃取取除除脂脂，加加入入正正丙丙醇醇减减压压干干燥燥，残残留留物物用用乙乙腈腈溶溶解解，氧氧化化铝铝柱柱净净化化，加加入入正正丙丙醇醇，减减压压干干燥燥，流流动动相相溶溶解解，HPLC紫紫外外检测器检测。检测器检测。方法说明方法说明磺胺类最大吸收磺胺类最大吸收为为260nm280nm，检测，检测时选用时选用=
20、270nm。样品极性较强，样品极性较强，70%乙腈的极性要大于乙腈的极性要大于95%乙腈，洗脱效果更好。乙腈，洗脱效果更好。净化时用碱性氧化铝。净化时用碱性氧化铝。硝基呋喃类（硝基呋喃类（NFs）兽药残留检验）兽药残留检验v 概述概述硝硝基基呋呋喃喃类类及及其其代代谢谢物物可可使使动动物物癌癌变变和基因突变和基因突变禁禁用用，在在动动物物性性食食品品和和饲饲料料中中不不得得检检出出常用常用ELISA、HPLC、LC-MS检测检测v HPLC法测定禽肉中法测定禽肉中呋喃唑酮呋喃唑酮原原理理：样样品品与与C18柱柱填填料料研研磨磨，混混合合装装柱柱，正正己己烷烷淋淋洗洗，乙乙酸酸乙乙酯酯洗洗脱脱，
21、浓浓缩，溶解，氧化铝柱净化，检测缩，溶解，氧化铝柱净化，检测方法说明方法说明基质固相分散技术基质固相分散技术硝基呋喃类兽药残留检验硝基呋喃类兽药残留检验第三节第三节盐酸克伦特罗残留的检验盐酸克伦特罗残留的检验l 概述概述l 盐酸克伦特罗兽药残留的检验盐酸克伦特罗兽药残留的检验20世世纪纪70年年代代末末,美美国国等等发发达达国国家家进进行行了了盐盐酸酸克克伦伦特特罗罗实实用用性性开开发发研研究究工工作作,至至80年年代代,盐盐酸酸克克伦伦特特罗罗作作为为饲饲料料添添加加剂剂被被广广泛泛应应用用到到畜畜禽禽生生产产中中。1996年年,我我国国一一些些大大专专院院校校、科科研研单单位位研研究究发发
22、现现,盐盐酸酸克克伦伦特特罗罗对对动动物物具具有有加加强强脂脂肪肪分分解解,促促进进蛋蛋白白质质合合成成,实实现现动动物物营营养养再再分分配配,提提高高胴胴体体瘦瘦肉肉率率,加加快快动动物物生生长长等等作作用用。养养猪猪户户在在不不改改变变管管理理模模式式、不不增增加加饲饲料料投投入入、不不提提高高蛋蛋白白质质的的前前提提下下,在在育育肥肥猪猪出出栏栏前前2530d投投喂喂盐盐酸酸克克伦伦特特罗罗,就就能能将将瘦瘦肉肉率率提提高高10%,育育肥肥增增重重提提高高10%12%,因因此此在在畜畜牧业生产中被大量使用。牧业生产中被大量使用。概概 述述概概 述述v 理化性质理化性质Clenbutero
23、l，简称，简称CLB，-兴奋剂兴奋剂溶解性：溶解性：易溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。易溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。化化学学性性质质稳稳定定：瘦瘦肉肉精精化化学学性性质质稳稳定定，不不易易破破坏坏。172开开始始分分解解，经经260油油煎煎5min才才会会破破坏坏减减半半。口口服服后后在在胃胃肠肠吸吸收收迅迅速速，10-20min起起效效，2-3h血血液液浓浓度度达达到到峰峰值值，作作用用维维持持5h左左右右，半半衰衰期期25-39h，消消除除5个个半半衰衰期期（约约97%）需需5-8d。易易在在动动物物眼眼睛睛、毛毛发发、肝肝、肺肺、肾肾等等组组织织中蓄积。中蓄积。我我国国食
24、食品品中中的的限限量量：马马、牛牛肌肌肉肉0.1g/kg，肝肝、肾肾0.5g/kg，牛奶，牛奶0.05g/kg。概述概述v 药理性质和毒性药理性质和毒性曾用于防治人、畜支气管哮喘和痉挛曾用于防治人、畜支气管哮喘和痉挛后用于促进动物生长、提高瘦肉率后用于促进动物生长、提高瘦肉率人人食食用用含含CLB残残留留畜畜产产品品后后的的表表现现为为危危害害肝肝脏脏和和肾肾脏脏。长长期期摄摄入入可可致致染染色色体畸变，诱发恶性肿瘤。体畸变，诱发恶性肿瘤。概述概述v CLB检验、检疫现状检验、检疫现状1987年年，欧欧盟盟、美美国国宣宣布布禁禁止止使使用用CLB作作兽用饲料添加剂兽用饲料添加剂目目前前，欧欧盟
25、盟成成员员国国已已将将CLB残残留留作作为为肉肉品品进口必检项目进口必检项目我我国国政政府府也也于于97年年发发文文禁禁止止在在饲饲料料中中添添加加使用使用CLBCLB残留量的检验残留量的检验v 感官检测感官检测 健健康康肉肉暗暗红红色色，肉肉质质弹弹性性好好，无无“出出汗汗”现现象象；“问问题题肉肉”特特别别鲜鲜红红，脂脂肪肪非非常常薄薄，瘦肉纤维疏松，有瘦肉纤维疏松，有“出汗出汗”现象。现象。v ELISA法测定法测定 特特异异性性强强、灵灵敏敏度度高高、酶酶标标板板上上一一次次可可作多份样品检测；快速筛选方法。作多份样品检测；快速筛选方法。GC-MS测定法测定法v 原原理理：样样品品剪剪
26、碎碎，高高氯氯酸酸匀匀浆浆，超超声声波波加加热热提提取取，异异丙丙醇醇-乙乙酸酸乙乙酯酯萃萃取取，浓浓缩缩，弱弱阳阳离离子子交交换换柱柱分分离离，洗洗脱脱，浓缩后衍生化，测定浓缩后衍生化，测定GC-MS测定法测定法-样品处理样品处理v 提提取取：肉肉样样-高高氯氯酸酸匀匀浆浆-超超声声波波提提取取-水水 浴浴 加加 热热 -冷冷 却却 离离 心心 取取 上上 清清 -调调PH9.50.1-氯氯化化钠钠、异异丙丙醇醇-乙乙酸酸乙乙酯酯提提取取-旋旋转转水水浴浴蒸蒸发发至至近近干干-Na2H2PO4溶解溶解-过滤过滤- Na2H2PO4定容。定容。GC-MS测定法测定法-样品处理样品处理v净净化化
27、和和浓浓缩缩：离离子子交交换换柱柱-洗洗脱脱液液（乙醇乙醇-氨洗脱）氨洗脱）-氮气浓缩至干。氮气浓缩至干。v衍衍生生化化：甲甲醇醇溶溶解解残残渣渣-浓浓缩缩至至干干-衍衍生生剂剂BSTFA-蒸蒸干干-甲甲苯苯定定容容，待待用用。标准系列同时衍生化。标准系列同时衍生化。GC-MS测定法测定法-说明说明1.肉要先绞碎成肉糜。肉要先绞碎成肉糜。2.该方法的检出限是该方法的检出限是0.5g/kg。3.0.1mol/L的的高高氯氯酸酸匀匀浆浆，超超声声波波萃萃取取，离离心心，液液-液萃取，效果好。液萃取，效果好。4.加入加入NaCl，液，液-液萃取时可防止乳化。液萃取时可防止乳化。5.衍衍生生化化前前先
28、先净净化化，可可以以避避免免杂杂质质衍衍生生化化，干干扰测定。扰测定。HPLC测定法测定法v 原原理理：样样品品提提取取、净净化化，乙乙醇醇-氨氨洗洗脱后浓缩，流动相定容后脱后浓缩，流动相定容后HPLC测定测定v样样品品处处理理：提提取取、净净化化浓浓缩缩同同GC-MS，不需要衍生化。，不需要衍生化。HPLC测定法测定法v方法说明：方法说明：1.该该方方法法适适用用于于各各种种食食品品以以及及肝肝、肾肾等等组组织织及及汤汁中瘦肉精的测定。汤汁中瘦肉精的测定。2.标准品要临用时新鲜配制，避光保存。标准品要临用时新鲜配制，避光保存。3.除除GC-MS和和HPLC法法外外，还还可可用用ELISA法法
29、进行筛选，再用上述方法确认。进行筛选，再用上述方法确认。酶联免疫法酶联免疫法基于抗原抗体反应竞争性抑制进行测定基于抗原抗体反应竞争性抑制进行测定的。的。 GB/T 5009.192-2003动物性食品中克伦动物性食品中克伦特罗残留量的测定特罗残留量的测定第三法第三法GC/MS法。法。u 基基本本原原理理：微微孔孔板板包包被被有有针针对对克克伦伦特特罗罗IgG的的抗抗抗抗体体；加加入入克克伦伦特特罗罗抗抗体体，经经过过温温育育和和洗洗涤涤后后；加加入入酶酶标标记记物物、标标准准或或样样品品溶溶液液，克克伦伦特特罗罗与与酶酶标标记记物物竞竞争争与与抗抗体体结结合合；没没有有连连接接的的克克伦伦特特
30、罗罗酶酶标标记记物物在在被被洗洗涤涤除除去去；加加入入酶酶底底物物和和发发色色剂剂并并且且温温育育，结结合合的的酶酶标标记记物物将将无无色色的的发发色色剂剂为为蓝蓝色色的的产产物物，加加入入反反应应终终止止液液使使颜颜色色有有蓝蓝转转变变为为黄黄色色。在在450nm处比色测定处比色测定。酶联免疫法酶联免疫法竞争性酶联免疫吸附试验法测抗原的基本原理示意图竞争性酶联免疫吸附试验法测抗原的基本原理示意图酶联免疫法酶联免疫法 氯霉素检测试剂盒氯霉素检测试剂盒u 组组成成：微微量量测测试试孔孔；氯氯霉霉素素标标准准溶溶液液；10倍倍浓浓缩缩萃萃取取稀稀释释液液；10倍倍浓浓缩缩洗洗涤涤液液；氯氯霉霉素素
31、酶酶标标记记物；底物溶液；反应终止液。物；底物溶液；反应终止液。 主要试剂：主要试剂：氯霉素酶联免疫检测试剂盒。氯霉素酶联免疫检测试剂盒。酶联免疫法酶联免疫法主主要要仪仪器器：简简易易的的萃萃取取设设备备、氮氮吹吹仪仪、离离心心机机、酶酶标标分分析析仪。仪。 酶标仪酶标仪酶联免疫法酶联免疫法酶联免疫实验设计酶联免疫实验设计u 实验的关键操作：实验的关键操作： 试剂盒的选择和准备；试剂盒的选择和准备； 试样的处理（试样的处理（同同GC-MS）；）；加样；加样； 洗涤；洗涤； 比色。比色。第四节第四节激素类兽药残留的检验激素类兽药残留的检验l 什什么么是是激激素素：是是生生物物体体内内特特殊殊的的
32、腺腺体体或或组组织织产产生生的的，直直接接分分泌泌到到体体液液中中，通通过过体体液液运运送送到到特特定定的的部部位位，从从而而引引起起特特殊殊激激动作用的一群微量的有机化合物。动作用的一群微量的有机化合物。 l兽兽药药：同同化化激激素素和和其其他他生生长长促促进进剂剂的的简简称。称。激素作用激素作用促进促进氨基酸氨基酸中中蛋白质生物合成蛋白质生物合成 促进促进肌肉肌肉变大变壮变大变壮 促进促进食欲食欲 促进促进骨骼骨骼的生长的生长 刺激刺激骨髓骨髓，促进，促进红细胞红细胞的产生。的产生。分类分类l 按照来源：按照来源：动物激素和植物激素动物激素和植物激素l结结构构：甾甾体体（雄雄激激素素类类、
33、雌雌激激素素类类、孕激素类）和非甾体类同化激素。孕激素类）和非甾体类同化激素。 l 激激素素的的危危害害：扰扰乱乱激激素素平平衡衡，导导致致内内分分泌泌相相关关肿肿瘤瘤、生生长长缺缺陷陷、生生育育缺缺陷陷、性性早早熟熟、男男性性女女性性化化、女女性性乳乳腺癌、卵巢癌等。腺癌、卵巢癌等。禁止禁止同化类激素在食品动物中同化类激素在食品动物中使用。使用。测测试试方方法法：荧荧光光分分光光光光度度计计、GC、HPLC、GC-MS等。等。HPLC法测定禽肉中己烯雌酚残留法测定禽肉中己烯雌酚残留v 原原理理：样样品品匀匀浆浆，甲甲醇醇提提取取，HPLC紫紫外检测器（外检测器（230nm）测定。）测定。v 样样品品提提取取：肉肉样样-甲甲醇醇振振荡荡提提取取、离离心心（重复（重复2次）次）-合并上层提取液合并上层提取液-过滤、备用过滤、备用v 方方法法说说明明：甲甲醇醇可可以以使使蛋蛋白白质质的的氢氢键键发发生改变，蛋白质凝集，从而释放出药物。生改变，蛋白质凝集，从而释放出药物。谢谢 谢！谢！
