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1、第二章第二章蛋白质与非蛋白含氮化合物检验蛋白质与非蛋白含氮化合物检验蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件教学内容教学内容蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件第一节第一节 概述概述一、血浆蛋白质一、血浆蛋白质1.1.1.1.直接在血液中发挥作用直接在血液中发挥作用直接在血液中发挥作用直接在血液中发挥作用 在血浆中运载弱水溶性物质在血浆中运载弱水溶性物质在血浆中运载弱水溶性物质在血浆中运载弱水溶性物质 维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压 组成血液组成血液组成血液组成血液pHpHpHpH缓冲系统缓冲系统缓冲系统缓冲系统参与凝血与纤维蛋白溶解参与凝血与纤维蛋白溶解参与凝血
2、与纤维蛋白溶解参与凝血与纤维蛋白溶解血浆固有酶在血浆发挥作用血浆固有酶在血浆发挥作用血浆固有酶在血浆发挥作用血浆固有酶在血浆发挥作用2.2.需要时进入组织发挥作用需要时进入组织发挥作用需要时进入组织发挥作用需要时进入组织发挥作用对组织蛋白起修补作用对组织蛋白起修补作用对组织蛋白起修补作用对组织蛋白起修补作用组成体液免疫防御系统组成体液免疫防御系统组成体液免疫防御系统组成体液免疫防御系统抑制组织蛋白酶抑制组织蛋白酶抑制组织蛋白酶抑制组织蛋白酶参与代谢调控作用的激素参与代谢调控作用的激素参与代谢调控作用的激素参与代谢调控作用的激素血浆蛋白质功能血浆蛋白质功能蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件血浆蛋白
3、质的功能分类血浆蛋白质的功能分类运输载体运输载体血浆脂蛋白血浆脂蛋白(CM(CM、VLDLVLDL、LDLLDL、HDLHDL等等) )白蛋白白蛋白转铁蛋白转铁蛋白结合珠蛋白结合珠蛋白血色素结合蛋白血色素结合蛋白铜蓝蛋白铜蓝蛋白视黄醇结合蛋白视黄醇结合蛋白甲状腺素结合球蛋白甲状腺素结合球蛋白皮质素结合球蛋白皮质素结合球蛋白类固醇激素结合球蛋白类固醇激素结合球蛋白 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件凝血与纤溶蛋白:纤维蛋白原,凝血酶原,凝血因子凝血与纤溶蛋白:纤维蛋白原,凝血酶原,凝血因子 、,前激,前激 肽释放酶、肽释放酶、HMWHMW激肽原,激肽原, 抗凝血酶抗凝血酶,纤维蛋白溶酶原等纤维蛋白
4、溶酶原等 免疫球蛋白和补体蛋白:免疫球蛋白和补体蛋白:IgGIgG、A A 、M M、D D、E E C1q C1q、C1rC1r、C1sC1s、C2C2、C3C3、C4C4、C5C5、C6C6、 7 7、C8C8、C9C9、B B因子、因子、D D因子、备解素等因子、备解素等血浆蛋白质的功能分类血浆蛋白质的功能分类蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件蛋白酶抑制物:蛋白酶抑制物:1 1- -抗胰蛋白酶、抗胰蛋白酶、1 1- -抗糜蛋白酶抗糜蛋白酶 2 2- -巨球蛋白等巨球蛋白等6 6种以上种以上血浆酶:血浆酶:卵磷脂胆固醇酰基转移酶、假性胆碱酯酶等卵磷脂胆固醇酰基转移酶、假性胆碱酯酶等 蛋白类激
5、素:胰岛素、胰高血糖素、生长激素等蛋白类激素:胰岛素、胰高血糖素、生长激素等血浆蛋白质的功能分类血浆蛋白质的功能分类蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件血浆蛋白质的电泳分类血浆蛋白质的电泳分类醋纤膜电泳或琼脂糖电泳:醋纤膜电泳或琼脂糖电泳: 白蛋白白蛋白 1 1球蛋白球蛋白 2 2球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白 分辨率高时:可有分辨率高时:可有1 1和和2 2 2 2中也可有两条中也可有两条 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,在适当条件下可以分出在适当条件下可以分出3030多个区带多个区带蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件各各电电泳泳区区带带的的主主要要血血浆浆蛋蛋白白质质前
6、白蛋白前白蛋白甲状腺素转运蛋白甲状腺素转运蛋白 0.20.4g/L白蛋白白蛋白 白蛋白白蛋白35551-球蛋白球蛋白1-抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶0.92.01-酸性糖蛋白酸性糖蛋白0.51.5甲胎蛋白甲胎蛋白310-5高密度脂蛋白高密度脂蛋白1.73.252-球蛋白球蛋白结合珠蛋白结合珠蛋白 0.32.02-巨球蛋白巨球蛋白 1.254.1铜蓝蛋白铜蓝蛋白0.20.5-球蛋白球蛋白转铁蛋白转铁蛋白2.03.5低密度脂蛋白低密度脂蛋白0.61.55C4 0.10.42-微球蛋白微球蛋白0.0010.002纤维蛋白原纤维蛋白原2.04.0C30.71.5-球蛋白球蛋白IgA0.74.0IgG7.016
7、IgM0.42.3 C- C-反应蛋白反应蛋白 0.0080.008蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(一)前白蛋白(一)前白蛋白(prealbumin,PAprealbumin,PA)即甲状腺素转运蛋白即甲状腺素转运蛋白(transthyretin(transthyretin,TTR)TTR)电泳显示在白蛋白前方故名电泳显示在白蛋白前方故名PAPA,肝脏合成,肝脏合成,55kD55kD,半寿期仅,半寿期仅2.52.5天。天。50507070与视黄醇结合蛋白组成复合体。与视黄醇结合蛋白组成复合体。能转运甲状腺素和三碘甲腺原氨酸,能转运甲状腺素和三碘甲腺原氨酸, 大约结合血浆中大约结合血浆中101
8、0的甲状腺激素。的甲状腺激素。必需氨基酸含量很高,是组织修补材料。必需氨基酸含量很高,是组织修补材料。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)视黄醇结合蛋白(二)视黄醇结合蛋白 (retinol-binding proteinretinol-binding protein,RBPRBP )肝脏合成,仅肝脏合成,仅21kD21kD,半寿期,半寿期12h12h携带视黄醇从肝脏转运到各种靶组织。携带视黄醇从肝脏转运到各种靶组织。与与TTRTTR以以1:11:1比例结合,避免比例结合,避免RBPRBP从肾小球滤过,从肾小球滤过, 在靶细胞,在靶细胞,TTR-RBPTTR-RBP降解,视黄醇被摄入细胞,降
9、解,视黄醇被摄入细胞,无视黄醇的无视黄醇的RBPRBP载体蛋白与载体蛋白与TTRTTR无亲和性,无亲和性, 被肾小球滤出,肾近端小管细胞吸收并降解。被肾小球滤出,肾近端小管细胞吸收并降解。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(三)白蛋白(三)白蛋白(albumin albumin ,ALBALB) 生化特性生化特性占血浆总蛋白的占血浆总蛋白的57576868,不含糖,不含糖,66.3kD66.3kD由肝脏合成,由肝脏合成,111114.7g/d14.7g/d,半寿期约,半寿期约18182020天天 合成储备大,由血浆胶体渗透压和蛋白质摄入量调节合成储备大,由血浆胶体渗透压和蛋白质摄入量调节 肾病
10、综合征时合成量可增高到正常的肾病综合征时合成量可增高到正常的300300以上以上遗传性变异可发生电泳迁移率变化,出现双白蛋白区遗传性变异可发生电泳迁移率变化,出现双白蛋白区带带 (大量使用青霉素或水杨酸等药物亦可)(大量使用青霉素或水杨酸等药物亦可)蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(三)白蛋白生理作用(三)白蛋白生理作用最重要血浆营养蛋白,胞饮进入细胞,氨基酸合成组织蛋白最重要血浆营养蛋白,胞饮进入细胞,氨基酸合成组织蛋白最重要血浆载体蛋白最重要血浆载体蛋白维持血浆胶体渗透压的最重要成分维持血浆胶体渗透压的最重要成分缓冲酸碱物质的主要血浆蛋白质缓冲酸碱物质的主要血浆蛋白质高度溶于水,能运载许多
11、疏水分子高度溶于水,能运载许多疏水分子 生理生理pHpH中为负离子,每分子带中为负离子,每分子带200200个负电荷个负电荷 运输胆红素运输胆红素. .长链脂肪酸长链脂肪酸. .胆汁酸盐胆汁酸盐. .前列腺素前列腺素. .类固醇激素类固醇激素 无机离子无机离子( (如如CaCa2+2+、CuCu2+2+、NiNi2+2+).).药物药物( (如阿司匹林、青霉素如阿司匹林、青霉素) )结合型激素和药物无活性,结合型激素和药物无活性,ALBALB含量或含量或pHpH变化时其活性变化变化时其活性变化蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(四)(四)1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶 (1 1-antitry
12、psin-antitrypsin,1 1ATAT或或AAT AAT )蛋白酶和抗蛋白酶蛋白酶和抗蛋白酶蛋白酶:清除病原微生物、坏死组织和衰老红细胞蛋白酶:清除病原微生物、坏死组织和衰老红细胞 蛋白酶过多或活性过强可破坏正常组织和细胞蛋白酶过多或活性过强可破坏正常组织和细胞抗蛋白酶:机体为对抗蛋白酶的异常作用而产生抗蛋白酶:机体为对抗蛋白酶的异常作用而产生 抗蛋白酶减少可导致某些疾病发生抗蛋白酶减少可导致某些疾病发生蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(四)(四)1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶 生理功能生理功能占血清中抑制蛋白酶活力的占血清中抑制蛋白酶活力的9090左右左右能抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶
13、、胶原蛋白酶能抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、胶原蛋白酶 及白细胞释放的溶酶体蛋白水解酶及白细胞释放的溶酶体蛋白水解酶 形成不可逆的酶形成不可逆的酶- -抑制物复合体抑制物复合体 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(四)(四)1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶 AATAAT的多种遗传表型的多种遗传表型至少有至少有7575种,表达的蛋白质有种,表达的蛋白质有M M型和型和Z Z型、型、S S型型 PiMMPiMM型最多,占人群型最多,占人群95%95%以上以上类型:类型:PiMMPiMM、PiMSPiMS、PiMZPiMZ、PiSSPiSS、PiSZPiSZ、PiZZ PiZZ 活力:活力:100%100%
14、、8080、6060、6060、3535、1515 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(五)(五)1 1- -酸性糖蛋白酸性糖蛋白 (1 1-acid glycoprotein-acid glycoprotein,1 1 AG AG或或AAG)AAG)肝脏合成,肝脏合成,40kD40kD,又称血清类黏蛋白,又称血清类黏蛋白,含糖约含糖约4545,包括,包括11112020唾液酸,唾液酸,血清黏蛋白的主要成分,黏蛋白是能被血清黏蛋白的主要成分,黏蛋白是能被 高氯酸和其它强酸沉淀的一组蛋白质。高氯酸和其它强酸沉淀的一组蛋白质。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(五)(五)1 1- -酸性糖蛋白酸性糖
15、蛋白 (1 1-acid glycoprotein-acid glycoprotein,1 1 AG AG或或AAG)AAG)主要的急性时相反应蛋白主要的急性时相反应蛋白 急性炎症时增高,与免疫防御功能有关急性炎症时增高,与免疫防御功能有关AAGAAG可以结合利多卡因和心得安等可以结合利多卡因和心得安等 急性心肌梗死时升高,药物结合状态增加急性心肌梗死时升高,药物结合状态增加 游离状态减少,需要增加药物剂量。游离状态减少,需要增加药物剂量。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(六)结合珠蛋白(六)结合珠蛋白(haptoglobinhaptoglobin,HpHp) 生化特性和表型生化特性和表型由
16、肝脏合成,由肝脏合成,85kD85kD400kD400kD,分子量变化很大,分子量变化很大2 22 2四聚体,四聚体, 亚基不同而形成的四聚体表亚基不同而形成的四聚体表型型 不同不同亚基有三种遗传表型亚基有三种遗传表型1F1F、1s 1s 、2 2,氨氨 基基酸数不酸数不同同 有些表型的四聚体又形成聚合体,有些表型的四聚体又形成聚合体,在在 电电泳中出现多条带泳中出现多条带蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件 结合珠蛋白的几种遗传表型结合珠蛋白的几种遗传表型 表表 型型 亚单位的结构亚单位的结构 组组 成成Hp1-1 (Hp1-1 (1F1F) )2 22 2 80kD80kD,链氨基酸链氨基酸8
17、383个个 1F1F1S 1S 2 2 链氨基酸链氨基酸245245个个 (1S1S) ) 2 2 2 2Hp2-1 (Hp2-1 (1S1S2 2 2 2 )n 120kD-200kD)n 120kD-200kD的聚合体的聚合体 (1F1F2 2 2 2)n n)n n不同在电泳中呈多条带不同在电泳中呈多条带Hp2-2 (Hp2-2 (2 2)n 160kD-400kD)n 160kD-400kD n =3-8 n n =3-8 n不同在电泳中呈多条带不同在电泳中呈多条带蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件能与能与RBCRBC中释放的游离中释放的游离HbHb结合结合 每分子每分子HpHp结合两分
18、子结合两分子HbHb 防止防止HbHb从肾丢失而保留铁,避免从肾丢失而保留铁,避免HbHb对肾脏损伤。对肾脏损伤。HpHp不能被重新被利用,溶血后其含量急剧降低,不能被重新被利用,溶血后其含量急剧降低, 血浆血浆HpHp浓度多在一周内由再生而恢复。浓度多在一周内由再生而恢复。 (六)结合珠蛋白(六)结合珠蛋白生理功能生理功能蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件由肝实质细胞合成,分子量约由肝实质细胞合成,分子量约720kD720kD血浆最大的蛋白质,不能从血管扩散至细胞外液血浆最大的蛋白质,不能从血管扩散至细胞外液也是主要的蛋白酶抑制剂也是主要的蛋白酶抑制剂能结合并抑制各种类型的蛋白酶,能结合并抑制
19、各种类型的蛋白酶, 如纤维蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶等如纤维蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶等酶与酶与2 2MGMG处于复合物状态时处于复合物状态时 酶底物为大分子,蛋白水解酶活性被抑制酶底物为大分子,蛋白水解酶活性被抑制 酶底物为小分子,仍能被酶底物为小分子,仍能被2 2MG-MG-蛋白酶水解蛋白酶水解 (七)(七)2巨球蛋白巨球蛋白(2-acroglobulin,2MG或或AMG)蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(八)铜蓝蛋白(八)铜蓝蛋白(ceruloplasmin,Cpceruloplasmin,Cp) 生化特性生化特性肝实质细胞合成,肝实质细胞合成,132kD132
20、kD,2 2球蛋白球蛋白每分子含每分子含6 68 8个铜原子,含铜而呈蓝色个铜原子,含铜而呈蓝色95%95%的血清铜存在于的血清铜存在于CpCp中,另中,另5%5%呈可扩散状态呈可扩散状态 血循环中血循环中CpCp为铜没有毒性的代谢库。为铜没有毒性的代谢库。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件与氧化还原反应有关,与氧化还原反应有关, 既能起氧化作用又能起抗氧化作用。既能起氧化作用又能起抗氧化作用。具有铁氧化酶作用,能将具有铁氧化酶作用,能将FeFe2+2+氧化为氧化为FeFe3+3+ Fe Fe3+3+再结合到转铁蛋白上,使铁不具毒性再结合到转铁蛋白上,使铁不具毒性还有抑制膜脂质氧化的作用还有抑制
21、膜脂质氧化的作用 (八)铜蓝蛋白(八)铜蓝蛋白生理功能生理功能蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(九)转铁蛋白(九)转铁蛋白(transferrintransferrin,TRFTRF) 生化特性生化特性肝细胞合成,肝细胞合成,79.6kD79.6kD,区带,半寿期区带,半寿期10.5d10.5d能可逆结合多价阳离能可逆结合多价阳离子,如铁子,如铁、铜、锌、钴等,、铜、锌、钴等, 但已知其对铁的结合具有临床重要性但已知其对铁的结合具有临床重要性蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(九)转铁蛋白(九)转铁蛋白 生理功能生理功能从小肠进入血液的从小肠进入血液的FeFe2+2+被被CpCp氧化为氧化为Fe
22、Fe3+3+, 再被再被TRFTRF的载体蛋白结合。的载体蛋白结合。每种细胞表面都有每种细胞表面都有TRFTRF受体,对受体,对TRF-FeTRF-Fe3+3+ 复合物比对复合物比对TRFTRF的载体蛋白亲和力高得多的载体蛋白亲和力高得多TRF-FeTRF-Fe3+3+将大部分将大部分FeFe3+3+运输到骨髓合成运输到骨髓合成HbHb 小部分则运输到各组织细胞,形成铁蛋白小部分则运输到各组织细胞,形成铁蛋白 及合成肌红蛋白、细胞色素等及合成肌红蛋白、细胞色素等蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(十)(十)2 2- -微球蛋白微球蛋白 (2 2-microglobulin-microglobul
23、in,2 2M M,BMGBMG)存在于各种有核细胞表面,仅存在于各种有核细胞表面,仅11.8kD11.8kD是是HLAHLA的轻链或的轻链或链,可从细胞表面链,可从细胞表面 尤其是淋巴细胞和肿瘤细胞表面脱落到血浆中尤其是淋巴细胞和肿瘤细胞表面脱落到血浆中从肾小球滤过,再被肾近端小管重吸收和分解从肾小球滤过,再被肾近端小管重吸收和分解 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(十一(十一)C-)C-反应蛋白反应蛋白 (C-reactive protein,CRPC-reactive protein,CRP) 生化特性生化特性因在急性炎症病人血清中出现的可以结合因在急性炎症病人血清中出现的可以结合 肺炎
24、球菌细胞壁肺炎球菌细胞壁C-C-多糖的蛋白质而命名多糖的蛋白质而命名由肝细胞所合成,由肝细胞所合成,115kD115kD电泳分布在慢电泳分布在慢区带,有时可延伸到区带,有时可延伸到区带区带蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件不仅结合多种细胞、真菌及原虫等多糖物质不仅结合多种细胞、真菌及原虫等多糖物质 在钙离子存在下,还可以结合卵磷脂和核酸在钙离子存在下,还可以结合卵磷脂和核酸可引发对侵入细胞的免疫调理作用和吞噬作用可引发对侵入细胞的免疫调理作用和吞噬作用 结合后的复合体具有对补体系统的激活作用结合后的复合体具有对补体系统的激活作用 表现炎症反应表现炎症反应 ( (十一十一)C-)C-反应蛋白反应蛋
25、白 生理功能生理功能蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件二、体液氨基酸二、体液氨基酸(amino acidamino acid,AAAA) 氨基酸由消化道吸收、体内合成、组织蛋白分解氨基酸由消化道吸收、体内合成、组织蛋白分解作用:合成蛋白质,转变为其他含氮生物活性物质作用:合成蛋白质,转变为其他含氮生物活性物质分解途径:分解途径:脱氨基成氨及脱氨基成氨及-酮酸酮酸( (转变为糖、脂肪或分解供能转变为糖、脂肪或分解供能) )小部分脱羧基生成小部分脱羧基生成COCO2 2和胺类和胺类体液氨基酸含量可反映体内氨基酸代谢紊乱情况体液氨基酸含量可反映体内氨基酸代谢紊乱情况氨基酸代谢紊乱有遗传性性和继发性氨基
26、酸代谢紊乱有遗传性性和继发性 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(一)遗传性氨基酸代谢紊乱(一)遗传性氨基酸代谢紊乱 为遗传性代谢酶缺陷引起,种类很多为遗传性代谢酶缺陷引起,种类很多 是相关基因突变所致,至今已发现是相关基因突变所致,至今已发现7070余种余种绝大多数疾患罕见,而病情却严重绝大多数疾患罕见,而病情却严重如果诊断足够早,某些疾患可以治疗如果诊断足够早,某些疾患可以治疗蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件1.1.氨基酸血症(氨基酸血症(AminoacidemiaAminoacidemia)酶缺陷在氨基酸代谢起点,其催化氨基酸在血中增加酶缺陷在氨基酸代谢起点,其催化氨基酸在血中增加 酶缺陷
27、在代谢途径中间,酶催化前的中间代谢物堆积酶缺陷在代谢途径中间,酶催化前的中间代谢物堆积 有时因正常途径受阻,通过旁路代谢的产物可增多有时因正常途径受阻,通过旁路代谢的产物可增多氨基酸血症:氨基酸血症:氨基酸、或其中间代谢物、或其旁路代氨基酸、或其中间代谢物、或其旁路代 谢物在血液中增高称之。谢物在血液中增高称之。 如酪氨酸血症、组氨酸血症、精氨酸血症等如酪氨酸血症、组氨酸血症、精氨酸血症等蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件2. 2. 氨基酸尿症(氨基酸尿症(AminoaciduriaAminoaciduria)血浆增多的氨基酸及其代谢物均从肾小球滤过血浆增多的氨基酸及其代谢物均从肾小球滤过 超出
28、肾小管重吸收能力从尿排出即为超出肾小管重吸收能力从尿排出即为氨基酸尿症氨基酸尿症 尿液中浓度经常比血浆更高尿液中浓度经常比血浆更高血浆和尿液氨基酸增多可同时存在血浆和尿液氨基酸增多可同时存在 称某种氨基酸血症或氨基酸尿症有时是传统习惯称某种氨基酸血症或氨基酸尿症有时是传统习惯肾小管细胞膜存在氨基酸载体转运蛋白肾小管细胞膜存在氨基酸载体转运蛋白 当某种载体缺乏时,相应氨基酸从尿中排出增加当某种载体缺乏时,相应氨基酸从尿中排出增加 血浆中这些氨基酸浓度可在正常范围或偏低血浆中这些氨基酸浓度可在正常范围或偏低 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件 遗传性氨基酸代谢紊乱的缺陷酶遗传性氨基酸代谢紊乱的缺陷酶
29、 及其血和尿中增高的成分及其血和尿中增高的成分( (带带* *为尿中氨基酸为尿中氨基酸) ) 疾病名称疾病名称 缺乏的酶缺乏的酶 血浆中增高的成分血浆中增高的成分苯丙酮酸尿症苯丙酮酸尿症 苯丙氨酸羟化酶苯丙氨酸羟化酶 苯丙氨酸、苯丙酮酸苯丙氨酸、苯丙酮酸I I型酪氨酸血症型酪氨酸血症 延胡索酸乙酰乙酸酶延胡索酸乙酰乙酸酶 酪氨酸、甲硫氨酸酪氨酸、甲硫氨酸尿黑酸尿症尿黑酸尿症 尿黑酸氧化酶尿黑酸氧化酶 尿黑酸(轻度)尿黑酸(轻度)同型胱氨酸尿症同型胱氨酸尿症 胱硫醚合成酶胱硫醚合成酶 甲硫氨酸、同型胱氨酸甲硫氨酸、同型胱氨酸组氨酸血症组氨酸血症 组氨酸酶组氨酸酶 组氨酸、丙氨酸组氨酸、丙氨酸甘氨
30、酸血症甘氨酸血症 甘氨酸氧化酶甘氨酸氧化酶 甘氨酸甘氨酸支链酮酸尿症支链酮酸尿症 支链酮酸氧化酶支链酮酸氧化酶 缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等胱硫醚尿症胱硫醚尿症 胱硫醚酶胱硫醚酶 胱硫醚胱硫醚型高脯氨酸血症型高脯氨酸血症 脯氨酸氧化酶脯氨酸氧化酶 脯氨酸脯氨酸精氨酸琥珀酸尿症精氨酸琥珀酸尿症 精氨酸琥珀酸酶精氨酸琥珀酸酶 谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等精氨酸血症精氨酸血症 精氨酸酶精氨酸酶 精氨酸精氨酸胱氨酸尿症胱氨酸尿症肾小管碱性氨基酸载体肾小管碱性氨基酸载体*胱氨酸胱氨酸.精氨酸精氨酸.赖氨酸赖氨酸.鸟氨酸鸟氨酸色氨酸代谢综合症色氨酸代谢综合症
31、肾小管中性氨基酸载体肾小管中性氨基酸载体*所有中性氨基酸所有中性氨基酸二羧基氨基酸尿症二羧基氨基酸尿症肾小管酸性氨基酸载体肾小管酸性氨基酸载体*谷氨酸、天冬氨酸谷氨酸、天冬氨酸亚氨基甘氨酸尿症亚氨基甘氨酸尿症肾小管亚氨基酸载体肾小管亚氨基酸载体*脯氨酸、羟脯氨酸、甘氨酸脯氨酸、羟脯氨酸、甘氨酸蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)继发性氨基酸代谢紊乱(二)继发性氨基酸代谢紊乱 若与氨基酸代谢有关的器官出现严重病变若与氨基酸代谢有关的器官出现严重病变 也可发生某种氨基酸血症或氨基酸尿症也可发生某种氨基酸血症或氨基酸尿症见于肝脏和肾脏疾患、蛋白质营养不良、烧伤等见于肝脏和肾脏疾患、蛋白质营养不良、
32、烧伤等肝功能衰竭:支链氨基酸肝功能衰竭:支链氨基酸/ /芳香族氨基酸比值芳香族氨基酸比值(BCAA/AAABCAA/AAA比值)下降比值)下降继发性肾性氨基酸尿:由肾小管损害、肾近曲小继发性肾性氨基酸尿:由肾小管损害、肾近曲小管功能障碍,使氨基酸重吸收减少而引起管功能障碍,使氨基酸重吸收减少而引起 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件三、嘌呤核苷酸三、嘌呤核苷酸(一)嘌呤核苷酸代谢一)嘌呤核苷酸代谢 嘌呤核苷酸的合成:从头合成途径、补救途径嘌呤核苷酸的合成:从头合成途径、补救途径嘌呤核苷酸的分解:终产物是尿酸,人类不能再分解嘌呤核苷酸的分解:终产物是尿酸,人类不能再分解蛋白质与非蛋白含氮化合物检验
33、课件嘌嘌呤呤核核苷苷酸酸合合成成代代谢谢主要原料:主要原料:5-5-磷酸核糖磷酸核糖氨基酸氨基酸一碳单位一碳单位 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件二、高尿酸血症(二、高尿酸血症(hyperuricemiahyperuricemia) 可分为原发性和继发性两类,以前者为多可分为原发性和继发性两类,以前者为多原发性高尿酸血症:原发性高尿酸血症:遗传性嘌呤代谢紊乱和遗传性嘌呤代谢紊乱和/ /或尿酸排泄障碍引起或尿酸排泄障碍引起多数由多基因遗传缺陷所致多数由多基因遗传缺陷所致与代谢综合征也关系密切与代谢综合征也关系密切继发性高尿酸血症:继发性高尿酸血症:高嘌呤饮食、肾脏
34、疾病、血液病、药物等引起高嘌呤饮食、肾脏疾病、血液病、药物等引起蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件嘌呤代谢紊乱嘌呤代谢紊乱在原发性高尿酸血症的病因中约占在原发性高尿酸血症的病因中约占1010主要原因是嘌呤代谢酶缺陷主要原因是嘌呤代谢酶缺陷 其中大多数属多基因遗传缺陷,机制不明其中大多数属多基因遗传缺陷,机制不明 由单酶缺陷引起者仅占由单酶缺陷引起者仅占1 12 2 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件单酶缺陷原因:单酶缺陷原因:次黄嘌呤次黄嘌呤- -鸟嘌呤磷酸核糖转移酶鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)(HGPRT)缺乏缺乏 PRPPPRPP合成酶亢进合成酶亢进G-6-PG-6-P缺乏,引起缺乏,引
35、起G-6-G-6-磷酸增多磷酸增多 沿磷酸戊糖途径生成较多沿磷酸戊糖途径生成较多PRPPPRPP,嘌呤合成增多,嘌呤合成增多腺嘌呤磷酸核糖转移酶腺嘌呤磷酸核糖转移酶(APRT)(APRT)缺乏缺乏 腺嘌呤不能经补救途径合成腺苷酸而出现堆积腺嘌呤不能经补救途径合成腺苷酸而出现堆积 腺嘌呤代谢产物腺嘌呤代谢产物2 2,8-8-二羟腺嘌呤由尿排出增加二羟腺嘌呤由尿排出增加 可产生肾结石,可产生肾结石,不是高尿酸血症不是高尿酸血症 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件2.2.尿酸排泄障碍尿酸排泄障碍原发性高尿酸血症中原发性高尿酸血症中80809090具有尿酸排泄障碍具有尿酸排泄障碍肾脏功能大多正常,仅存在
36、尿酸排泄障碍肾脏功能大多正常,仅存在尿酸排泄障碍属多基因遗传性疾病,易感基因和发病机制不明确属多基因遗传性疾病,易感基因和发病机制不明确 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件2.2.尿酸排泄障碍尿酸排泄障碍肾脏对尿酸盐的排泄有四个阶段:肾脏对尿酸盐的排泄有四个阶段: 肾小球滤过血浆中的全部尿酸盐肾小球滤过血浆中的全部尿酸盐 滤液中大部分尿酸盐被近曲小管重吸收滤液中大部分尿酸盐被近曲小管重吸收 近端小管再分泌尿酸盐近端小管再分泌尿酸盐 髓绊降支被动重吸收尿酸盐髓绊降支被动重吸收尿酸盐终尿排出尿酸盐只占滤过量的终尿排出尿酸盐只占滤过量的6 61010 总量约为总量约为2.4mmol2.4mmol3.0
37、mmol/d3.0mmol/d肾脏尿酸排泄障碍涉及以上各个过程肾脏尿酸排泄障碍涉及以上各个过程 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件3.3.代谢综合征与高尿酸血症代谢综合征与高尿酸血症原发性高尿酸血症与肥胖、原发性高血压、原发性高尿酸血症与肥胖、原发性高血压、血脂异常、糖尿病、胰岛素抵抗关系密切。血脂异常、糖尿病、胰岛素抵抗关系密切。高尿酸血症是代谢综合征的一个组成部分高尿酸血症是代谢综合征的一个组成部分肥胖和高甘油三酯血症是高尿酸血症的相关因素肥胖和高甘油三酯血症是高尿酸血症的相关因素但血液尿酸和但血液尿酸和TG等之间相互作用的机制仍不清楚等之间相互作用的机制仍不清楚蛋白质与非蛋白含氮化合物检验
38、课件4.4.高嘌呤饮食高嘌呤饮食短时间内从饮食摄入大量含嘌呤食物会生成大量尿酸短时间内从饮食摄入大量含嘌呤食物会生成大量尿酸 超过肾脏排泄能力导致血液尿酸升高超过肾脏排泄能力导致血液尿酸升高各类荤菜都含嘌呤,尤其是各种动物内脏和海鲜各类荤菜都含嘌呤,尤其是各种动物内脏和海鲜嘌呤极高:脑嘌呤极高:脑. .肝肝. .肾肾. .心心. .蛤蜊蛤蜊. .凤尾鱼凤尾鱼. .沙丁鱼沙丁鱼. .肉汁等肉汁等嘌呤较高蔬菜:菠菜嘌呤较高蔬菜:菠菜. .韭菜韭菜. .扁豆扁豆. .豌豆豌豆. .大豆大豆. .豆制品等豆制品等饮料:咖啡、浓茶含一定量嘌呤饮料:咖啡、浓茶含一定量嘌呤酒类:啤酒引发痛风的可能性最大,烈
39、性酒次之酒类:啤酒引发痛风的可能性最大,烈性酒次之 葡萄酒基本上不存在这种危险葡萄酒基本上不存在这种危险鸡蛋和牛奶含丰富蛋白质而嘌呤较低,水果中嘌呤很少鸡蛋和牛奶含丰富蛋白质而嘌呤较低,水果中嘌呤很少蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件5.5.各种肾脏疾病各种肾脏疾病各种肾小球疾病因肾小球滤过功能等减退各种肾小球疾病因肾小球滤过功能等减退慢性铅中毒造成肾小管损害慢性铅中毒造成肾小管损害药物竞争性抑制肾小管排泌尿酸:药物竞争性抑制肾小管排泌尿酸: 双氢克尿塞双氢克尿塞/ /利尿酸利尿酸/ /速尿速尿/ /吡嗪酰胺吡嗪酰胺/ /小剂量阿司匹林小剂量阿司匹林血液乳酸或酮酸等有机阴离子浓度增高:血液乳酸或
40、酮酸等有机阴离子浓度增高: 肾小管对尿酸的分泌受到竞争性抑制而排出减少肾小管对尿酸的分泌受到竞争性抑制而排出减少蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件6.6.细胞破坏增多细胞破坏增多使核酸分解及尿酸生成增多:使核酸分解及尿酸生成增多:骨髓增生性疾病核酸合成增加和周转加速骨髓增生性疾病核酸合成增加和周转加速白血病、淋巴瘤、红细胞增多症等白血病、淋巴瘤、红细胞增多症等恶性肿瘤的化疗和放疗后细胞破坏过多恶性肿瘤的化疗和放疗后细胞破坏过多溶血性贫血、系统性红斑狼疮、牛皮癣、溶血性贫血、系统性红斑狼疮、牛皮癣、心肌梗死、肺结核等组织细胞破坏增多心肌梗死、肺结核等组织细胞破坏增多蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件
41、 高尿酸血症和痛风的病因分类高尿酸血症和痛风的病因分类类类型型病因或遗传特征病因或遗传特征原发性高尿酸血症原发性高尿酸血症尿酸排泄减少,占尿酸排泄减少,占80-90多基因性常染色体显性遗传多基因性常染色体显性遗传尿酸产生过多尿酸产生过多从头合成嘌呤过多从头合成嘌呤过多(占原发性占原发性10-20)多基因性常染色体显性遗传多基因性常染色体显性遗传特异性酶缺陷特异性酶缺陷(占原发性占原发性1)青春性原发性痛风青春性原发性痛风HGPRT部分缺乏,部分缺乏,X-连锁连锁 青春期尿酸结石症青春期尿酸结石症 (突变型)(突变型)PRS活性增强活性增强 Lesch-NyhanLesch-Nyhan综合征综合
42、征 HGPRT完全缺乏,完全缺乏,X-连锁连锁 Con gierkeCon gierke病病 葡萄糖葡萄糖-6-磷酸酶缺乏或不足磷酸酶缺乏或不足继发性高尿酸血症继发性高尿酸血症尿酸排泄减少尿酸排泄减少肾功能减退肾功能减退慢性肾疾患慢性肾疾患肾小球滤过减少肾小球滤过减少糖尿病肾病糖尿病肾病肾小管排泌尿酸减少肾小管排泌尿酸减少高血压、内分泌疾病、高血压、内分泌疾病、有机酸增加有机酸增加、铅中毒肾病、铅中毒肾病尿酸产生过多尿酸产生过多骨髓增殖性疾病:白血病、多发性骨髓瘤、红细胞增多症骨髓增殖性疾病:白血病、多发性骨髓瘤、红细胞增多症慢性溶血性贫血慢性溶血性贫血全身扩散的癌症,恶性肿瘤化疗或放疗全身扩
43、散的癌症,恶性肿瘤化疗或放疗严重的剥脱性牛皮癣严重的剥脱性牛皮癣蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件一、体液总蛋白一、体液总蛋白二、体液白蛋白二、体液白蛋白三、血清蛋白质电泳三、血清蛋白质电泳四、免疫固定电泳四、免疫固定电泳五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质六、体液氨基酸六、体液氨基酸七、体液尿酸七、体液尿酸 第二节第二节常用体液蛋白质与非蛋白含氮化合物检测项目常用体液蛋白质与非蛋白含氮化合物检测项目 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件一、一、 体液总蛋白体液总蛋白体液总蛋白包括数量众多的各种蛋白质体液总蛋白包括数量众多的各种蛋白质定量测定时作了如下假定:定量测定时作了如下假定:1.1.所有血浆蛋
44、白是单纯的多肽链,糖脂类和金所有血浆蛋白是单纯的多肽链,糖脂类和金 属有机物等均不计在内,其含氮量平均为属有机物等均不计在内,其含氮量平均为16162.2.各种蛋白质理化性质虽不同,各种蛋白质理化性质虽不同,但与化学试剂的但与化学试剂的 反应性(如呈色、沉淀)一致。反应性(如呈色、沉淀)一致。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件测定蛋白质时利用蛋白质特有的结构或性质:测定蛋白质时利用蛋白质特有的结构或性质:重复的肽链结构;重复的肽链结构;分子中均含有氮原子;分子中均含有氮原子;与色素结合的能力;与色素结合的能力;沉淀后借浊度或光折射测定;沉淀后借浊度或光折射测定;酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫
45、外光吸收酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收临床实验室测定体液蛋白质的方法有多种临床实验室测定体液蛋白质的方法有多种 各种方法性能和应用情况不同各种方法性能和应用情况不同 最多用的是双缩脲法,以下将重点介绍最多用的是双缩脲法,以下将重点介绍 一、一、 体液总蛋白体液总蛋白蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(一)双缩脲法(一)双缩脲法(biureamethod)【测定原理测定原理】蛋白质中两个相邻肽键蛋白质中两个相邻肽键(-CO-NH-)(-CO-NH-)在碱性溶液与二在碱性溶液与二价铜离子作用产生稳定的紫红色络和物。价铜离子作用产生稳定的紫红色络和物。此反应与双缩脲此反应与双缩脲( (两个
46、尿素缩合物两个尿素缩合物H H2 2N-OC-NH-CO-N-OC-NH-CO-NHNH2 2) )在碱性溶液与在碱性溶液与CuCu2+2+作用形成紫红色反应相似。作用形成紫红色反应相似。因此将蛋白质与碱性铜反应的方法称为双缩脲法因此将蛋白质与碱性铜反应的方法称为双缩脲法蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(一)双缩脲法(一)双缩脲法【参考区间参考区间】随年龄增大有所增高,随年龄增大有所增高,6060岁后则稍有下降。岁后则稍有下降。新生儿新生儿:46:4670 g/L70 g/L,数月到,数月到2 2岁岁:51:5175g/L75g/L, 3 3岁及以上岁及以上:60:6080 g/L80 g/L
47、。成人成人:64:6483g/L(83g/L(直立行走直立行走) )和和606078g/L(78g/L(卧床卧床) )【临床意义临床意义】浓度下降常由白蛋白浓度下降而引起浓度下降常由白蛋白浓度下降而引起浓浓度度增增高高见见于于慢慢性性炎炎症症等等多多克克隆隆免免疫疫球球蛋蛋白白增增多多,以及浆细胞病的单克隆免疫球蛋白增多症。以及浆细胞病的单克隆免疫球蛋白增多症。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(一)双缩脲法(一)双缩脲法【方法评价方法评价】(1 1)特异性:)特异性:至少含两个至少含两个-CONH-CONH-才能与才能与CuCu2+2+络合,络合, 氨基酸及二肽无反应,三肽以上才能反应。氨基酸
48、及二肽无反应,三肽以上才能反应。 体液小分子肽含量极低,可忽略不计。体液小分子肽含量极低,可忽略不计。(2 2)呈色一致性:)呈色一致性:因呈色强度与肽键数量即蛋白质因呈色强度与肽键数量即蛋白质 含量成正比,故各种蛋白质呈色强度基本相同,含量成正比,故各种蛋白质呈色强度基本相同, 此为目前所有总蛋白测定方法中最好。此为目前所有总蛋白测定方法中最好。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(一)双缩脲法(一)双缩脲法【方法评价方法评价】(3 3)临床应用:)临床应用:检测范围检测范围1010120g/L120g/L灵敏度不高,但很适合血清总蛋白浓度灵敏度不高,但很适合血清总蛋白浓度对胸腹水总蛋白的检测低
49、限为对胸腹水总蛋白的检测低限为0.47g/L0.47g/L 生物检测限为生物检测限为1.33g/L1.33g/L 胸腹腔积液胸腹腔积液TPTP在在4.54.550 g/L50 g/L,能采用该法,能采用该法蛋白质浓度很低的脑脊液和尿液无法定量蛋白质浓度很低的脑脊液和尿液无法定量蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)测定体液总蛋白的其他方法(二)测定体液总蛋白的其他方法 1.1.染料结合法染料结合法 酸酸性性环环境境蛋蛋白白质质带带正正电电荷荷,可可与与染染料料阴阴离离子子反反应应而而产生颜色改变。产生颜色改变。染染料料有有氨氨基基黑黑、丽丽春春红红、考考马马斯斯亮亮蓝蓝、邻邻苯苯三三酚酚红红钼
50、等,前两种常作血清蛋白电泳的染料。钼等,前两种常作血清蛋白电泳的染料。考考马马斯斯亮亮蓝蓝可可用用于于尿尿液液、脑脑脊脊液液等等定定量量测测定定,虽虽简简便和灵敏,但比色杯对染料有吸附作用。便和灵敏,但比色杯对染料有吸附作用。邻苯三酚红钼法没有考马斯亮蓝法的缺点。邻苯三酚红钼法没有考马斯亮蓝法的缺点。各法均存在与不同蛋白质结合力不一致的问题各法均存在与不同蛋白质结合力不一致的问题蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)测定体液总蛋白的其他方法(二)测定体液总蛋白的其他方法1.1.染料结合法染料结合法 邻苯三酚红钼法邻苯三酚红钼法(pyrogallolredmolybdate,PRM)原理:原理:
51、在酸性介质中,邻苯三酚红在酸性介质中,邻苯三酚红- -钼酸盐与蛋白质钼酸盐与蛋白质形成复合物,最大吸收峰从形成复合物,最大吸收峰从467nm467nm转移至转移至594nm594nm。灵敏度高,检测下限约灵敏度高,检测下限约101020mg/L20mg/L,上限约,上限约2g/L2g/L 试剂不吸附比色杯,可用于自动生化分析仪中试剂不吸附比色杯,可用于自动生化分析仪中各种蛋白质呈色程度不同,球蛋白约为白蛋白各种蛋白质呈色程度不同,球蛋白约为白蛋白7070 加入适量十二烷基磺酸钠,球蛋白反应性有所升高加入适量十二烷基磺酸钠,球蛋白反应性有所升高该法适用于蛋白质浓度低的尿液、脑脊液等该法适用于蛋白
52、质浓度低的尿液、脑脊液等 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)测定体液总蛋白的其他方法(二)测定体液总蛋白的其他方法 2.2.凯氏定氮法(凯氏定氮法(Kjeldahl methodKjeldahl method)18831883年建立,是经典的蛋白质测定方法。年建立,是经典的蛋白质测定方法。原理:测定样品中的含氮量,推算出蛋白质含量。蛋原理:测定样品中的含氮量,推算出蛋白质含量。蛋白质中含氮量较为恒定,平均白质中含氮量较为恒定,平均1616, ,即即1 1克氮相当于克氮相当于6.256.25克蛋白质。克蛋白质。 准确性好,精密度高,灵敏度高,适用于任何形态的准确性好,精密度高,灵敏度高,适用
53、于任何形态的样品测定,至今仍被认为是测定许多生物样品中蛋白样品测定,至今仍被认为是测定许多生物样品中蛋白质含量的参考方法。质含量的参考方法。但操作复杂、费时,不适合临床常规测定。但操作复杂、费时,不适合临床常规测定。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)测定体液总蛋白的其他方法(二)测定体液总蛋白的其他方法3比浊法(比浊法(turbidimetry)某些酸如三氯乙酸、磺基水杨酸等能与蛋白某些酸如三氯乙酸、磺基水杨酸等能与蛋白质结合而产生微细沉淀,由此产生的悬浮液质结合而产生微细沉淀,由此产生的悬浮液浊度大小与蛋白质的浓度成正比。浊度大小与蛋白质的浓度成正比。优点是操作简便、灵敏度高,优点是操
54、作简便、灵敏度高,可测定尿液、脑脊液等蛋白质较低的样品。可测定尿液、脑脊液等蛋白质较低的样品。缺点是影响浊度大小的因素较多,包括加入缺点是影响浊度大小的因素较多,包括加入试剂的手法、混匀技术、反应温度等,且各试剂的手法、混匀技术、反应温度等,且各种蛋白质形成的浊度亦有较大的差别。种蛋白质形成的浊度亦有较大的差别。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)测定体液总蛋白的其他方法(二)测定体液总蛋白的其他方法3比浊法比浊法苄乙氯铵法苄乙氯铵法是目前临床上较多应用的比浊法是目前临床上较多应用的比浊法原理:原理:苄乙氯铵在碱性条件下与蛋白质形成沉苄乙氯铵在碱性条件下与蛋白质形成沉淀,其悬浮液稳定,淀,其
55、悬浮液稳定,660nm 660nm 处进行浊度测定。处进行浊度测定。灵敏度、准确度、对白蛋白和球蛋白的反应一灵敏度、准确度、对白蛋白和球蛋白的反应一致性都优于其他比浊法,检测范围较广。致性都优于其他比浊法,检测范围较广。精密度仍不够理想。精密度仍不够理想。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)测定体液总蛋白的其他方法(二)测定体液总蛋白的其他方法4.酚试剂法酚试剂法(phenolreagentmethod)FolinFolin在在19211921年首创,用于酪氨酸和色氨酸测定年首创,用于酪氨酸和色氨酸测定 后由吴宪用于蛋白质定量后由吴宪用于蛋白质定量原理:原理:蛋白质中酪氨酸和色氨酸使磷钨酸
56、和磷钼蛋白质中酪氨酸和色氨酸使磷钨酸和磷钼酸还原为钨蓝和钼蓝。酸还原为钨蓝和钼蓝。灵敏度较高灵敏度较高各种蛋白质酪氨酸和色氨酸含量不同,各种蛋白质酪氨酸和色氨酸含量不同, 如如ALBALB含色氨酸含色氨酸0.20.2,球蛋白色氨酸,球蛋白色氨酸2 23 3 因此只适合测定单一蛋白质。因此只适合测定单一蛋白质。受还原性物质干扰受还原性物质干扰( (带带-SH-SH化合物、糖类、酚类等化合物、糖类、酚类等) ) 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)测定体液总蛋白的其他方法(二)测定体液总蛋白的其他方法5直接紫外吸收法直接紫外吸收法根据蛋白质在根据蛋白质在280nm280nm或或215/225nm
57、215/225nm紫外吸收值,紫外吸收值,计算蛋白质含量。计算蛋白质含量。蛋白质浓度(蛋白质浓度(g/L)1.45A280nm-0.74A260nm 准确性受蛋白中芳香族氨基酸含量影响甚大准确性受蛋白中芳香族氨基酸含量影响甚大 而且尿酸和胆红素在而且尿酸和胆红素在280nm280nm附近有干扰。附近有干扰。不适合血清、尿液等组成复杂的体液蛋白质,不适合血清、尿液等组成复杂的体液蛋白质, 常用于较纯的酶、免疫球蛋白等测定。常用于较纯的酶、免疫球蛋白等测定。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件二、体液白蛋白二、体液白蛋白【检测方法检测方法】包括电泳法、免疫化学法和染料结合法。包括电泳法、免疫化学法和
58、染料结合法。电泳法只能测其百分含量,乘电泳法只能测其百分含量,乘TPTP浓度得其浓度浓度得其浓度 用于用于ALBALB定量不方便且精密度不如直接定量定量不方便且精密度不如直接定量免疫化学法包括免疫比浊法和放射免疫法等免疫化学法包括免疫比浊法和放射免疫法等 特异性好、灵敏度高,特异性好、灵敏度高,ALBALB易纯化、抗血清易制备,易纯化、抗血清易制备,适合尿液和脑脊液等低浓度适合尿液和脑脊液等低浓度ALBALB的测定的测定血清血清ALBALB测定可采用染料结合法测定可采用染料结合法 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件二、体液白蛋白二、体液白蛋白【检测方法检测方法】染料结合法染料结合法原理:原理:阴
59、离子染料溴甲酚绿阴离子染料溴甲酚绿(bromcresol green (bromcresol green ,BCG)BCG) 溴甲酚紫溴甲酚紫(bromcresol purple (bromcresol purple ,BCP)BCP)能与能与ALBALB结合,结合, 其最大吸收峰发生转移。其最大吸收峰发生转移。 BCGBCG与与ALBALB形成的蓝绿色复合物在形成的蓝绿色复合物在630nm630nm处有吸收峰,处有吸收峰, BCPBCP与与ALBALB形成的绿色复合物在形成的绿色复合物在603nm603nm处有吸收峰。处有吸收峰。 而球蛋白基本不结合这些染料。而球蛋白基本不结合这些染料。 蛋
60、白质与非蛋白含氮化合物检验课件二、体液白蛋白二、体液白蛋白【参考区间参考区间】随年龄有所变化,随年龄有所变化,0 04 4天:天:282844 g/L44 g/L 4 4天天1414岁:岁:383854 g/L54 g/L,此后下降,此后下降成人:成人:353552 g/L52 g/L,6060岁为岁为323246 g/L46 g/L 走动者比卧床者平均高走动者比卧床者平均高3 g/L3 g/L【医学决定水平医学决定水平】:35g35gL L时正常时正常 282834g34gL L为轻度缺乏为轻度缺乏 212127g27gL L为中度缺乏为中度缺乏 21g21gL L则严重缺乏则严重缺乏 低于
61、低于28g28gL L时,会出现组织水肿时,会出现组织水肿蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件【临床意义临床意义】ALBALB增高仅见于严重失水时,无重要临床意义增高仅见于严重失水时,无重要临床意义低低ALBALB血症见于下述许多疾病情况:血症见于下述许多疾病情况:(1 1)白蛋白合成不足)白蛋白合成不足: 严重肝脏合成功能下降如肝硬化、重症肝炎严重肝脏合成功能下降如肝硬化、重症肝炎 蛋白质营养不良或吸收不良蛋白质营养不良或吸收不良ALBALB受饮食蛋白质摄入量影响,可作为营养状态受饮食蛋白质摄入量影响,可作为营养状态的评价指标,早期缺乏时不易检出。的评价指标,早期缺乏时不易检出。二、体液白蛋白二
62、、体液白蛋白蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件【临床意义临床意义】(2 2)白蛋白丢失:)白蛋白丢失: 尿中丢失如肾病综合征、慢性肾小球肾炎、尿中丢失如肾病综合征、慢性肾小球肾炎、 糖尿病肾病、系统性红斑狼疮性肾病等糖尿病肾病、系统性红斑狼疮性肾病等 胃肠道蛋白质丢失,因黏膜炎症坏死胃肠道蛋白质丢失,因黏膜炎症坏死 皮肤丢失如烧伤及渗出性皮炎等皮肤丢失如烧伤及渗出性皮炎等(3 3)白蛋白分解代谢增加:)白蛋白分解代谢增加: 组织损伤如外科手术和创伤组织损伤如外科手术和创伤 组织分解增加如感染性炎症疾病等组织分解增加如感染性炎症疾病等 二、体液白蛋白二、体液白蛋白蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件【
63、临床意义临床意义】(4 4)白蛋白的分布异常:)白蛋白的分布异常: 门静脉高压时大量门静脉高压时大量ALBALB从血管内漏入腹腔从血管内漏入腹腔(5 5)无白蛋白血症)无白蛋白血症: 极少见的遗传性缺陷,血浆极少见的遗传性缺陷,血浆ALBALB含量常低于含量常低于1g/L1g/L二、体液白蛋白二、体液白蛋白蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件【方法评价方法评价】(1 1)两种染料结合法均操作简便、重复性好)两种染料结合法均操作简便、重复性好(2 2)特异性)特异性BCGBCG与与ALBALB为快反应,为快反应,3030秒基本完全秒基本完全 血清血清和和球蛋白能起慢反应,程度较球蛋白能起慢反应,程度
64、较ALBALB低低 缩短反应时间能避免非特异性反应缩短反应时间能避免非特异性反应BCPBCP与与ALBALB即时完全反应即时完全反应 无球蛋白非特异性干扰无球蛋白非特异性干扰 但但BCPBCP与牛、猪等与牛、猪等ALBALB的反应性比人的反应性比人ALBALB程度低程度低二、体液白蛋白二、体液白蛋白蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件【方法评价方法评价】 (3 3)临床应用:)临床应用:两法均适合于血清白蛋白测定两法均适合于血清白蛋白测定BCPBCP法检测范围为法检测范围为5 550g/L50g/L,上限较低,上限较低BCGBCG法检测范围为法检测范围为5 560g/L60g/L,应用更方便,应用
65、更方便BCGBCG法测定胸腹腔积液法测定胸腹腔积液ALBALB检测低限为检测低限为0.44g/L0.44g/L 生物检测限生物检测限0.98g/L0.98g/L,胸腹腔积液,胸腹腔积液1.51.535 g/L35 g/L 能采用能采用BCGBCG法测定法测定尿液和脑脊液尿液和脑脊液ALBALB定量则不适宜采用该法定量则不适宜采用该法二、体液白蛋白二、体液白蛋白蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件三、血清蛋白电泳三、血清蛋白电泳(serumproteinelectrophoresis,SPE) 【检测原理检测原理】pH 8.6pH 8.6缓冲液中血清中各种蛋白质都电离成负缓冲液中血清中各种蛋白质都电
66、离成负离子,在电场中向正极移动;因各种蛋白质离子,在电场中向正极移动;因各种蛋白质pIpI不同,在相同不同,在相同pHpH下带电荷量有差异,各蛋白质下带电荷量有差异,各蛋白质分子大小与分子形状也不相同,故在同一电场分子大小与分子形状也不相同,故在同一电场中泳动速度不同。中泳动速度不同。血清蛋白质被分成血清蛋白质被分成5 5个主要区带个主要区带 从正极起依次为从正极起依次为ALBALB、1 1、2 2、球蛋白球蛋白蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件三、血清蛋白电泳三、血清蛋白电泳【参考区间参考区间】白蛋白白蛋白575768681 1球蛋白球蛋白1.01.05.75.72 2球蛋白球蛋白4.94.9
67、11.211.2球蛋白球蛋白7 71313球蛋白球蛋白9.89.818.218.2不同染色剂和电泳条件参考区间不同不同染色剂和电泳条件参考区间不同 各实验室应建立自己的参考区间各实验室应建立自己的参考区间正常人正常人SPE图谱图谱蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件三、血清蛋白电泳三、血清蛋白电泳 图谱类型图谱类型TPTPAlbAlb1 12 2低蛋白血症型低蛋白血症型NNN NNN肾病型肾病型NNNN肝硬化型肝硬化型NNNNNN-(融合)(融合)弥漫性肝损害型弥漫性肝损害型NNM M蛋白血症型蛋白血症型在在 - - 区区 带带 中中 出出 现现 M M 蛋蛋 白白 区带区带慢性炎症型慢性炎症型急
68、性时相反应型急性时相反应型N NNNN N高高2 2()-()-球蛋白血症型球蛋白血症型妊娠型妊娠型NNN N蛋白质缺陷型蛋白质缺陷型个个 别别 区区 带带 出出 现现 特特 征征 性性 缺缺 乏乏【临床意义临床意义】1.血清蛋白电泳异常图谱血清蛋白电泳异常图谱 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件三、血清蛋白电泳三、血清蛋白电泳【临床意义临床意义】2.血清蛋白电泳典型图谱血清蛋白电泳典型图谱(1 1)肾病型:)肾病型:ALBALB下降,下降,2 2显著升高显著升高 明显升高,明显升高,不变或相对下降不变或相对下降(2 2)肝硬化型:)肝硬化型:ALBALB下降,下降,明显升高明显升高 典型者典型
69、者和和区带融合,见区带融合,见-桥桥肾病型肾病型肝硬化型肝硬化型蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件三、血清蛋白电泳三、血清蛋白电泳【临床意义临床意义】3.3.免疫球蛋白增多免疫球蛋白增多(1 1)单克隆免疫球蛋白增多:)单克隆免疫球蛋白增多:或或间色泽深染的窄区带间色泽深染的窄区带, ,单克隆免疫球蛋白或单克隆免疫球蛋白或其轻链或重链片段,称其轻链或重链片段,称M M蛋白蛋白(monoclonal protein)(monoclonal protein),见于浆细胞病。见于浆细胞病。M M蛋蛋白白电电泳泳位位置置大大致致反反应应IgIg类类型型,IgAIgA位位于于区区后后部部或或和和之间,之间
70、,IgMIgM位于位于区中部,区中部,IgGIgG位于位于区后部。区后部。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件三、血清蛋白电泳三、血清蛋白电泳【临床意义临床意义】 3.3.免疫球蛋白增多免疫球蛋白增多 (2 2)多克隆免疫球蛋白增多)多克隆免疫球蛋白增多为各种合成为各种合成IgIg细胞的全面增殖细胞的全面增殖 区带呈弥散性升高区带呈弥散性升高见见于于慢慢性性肝肝病病、肝肝硬硬化化、结结缔缔组组织织病病、慢慢性性感感染染、恶恶性性肿肿瘤瘤、获获得得性性免免疫疫缺缺陷陷综综合合征征、淋巴母细胞性淋巴结病。淋巴母细胞性淋巴结病。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件三、血清蛋白电泳三、血清蛋白电泳【方法评价方
71、法评价】影影响响精精密密度度的的因因素素很很多多,如如电电泳泳介介质质性性质质,缓缓冲冲液液成成分分和和浓浓度度、电电压压大大小小、电电泳泳时时间间、染染色色液液成成分分、电电泳泳时时温温度。度。实实验验室室之之间间的的精精密密度度较较差差,实实验验室室内内精精密密度度也也远远不不如如生生化指标定量测定。化指标定量测定。采采用用自自动动电电泳泳仪仪及及其其配配套套的的商商品品试试剂剂,每每次次电电泳泳时时电电压压. .时间时间. .甚至温度等都能准确控制,精密度明显提高。甚至温度等都能准确控制,精密度明显提高。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件四、蛋白质免疫固定电泳四、蛋白质免疫固定电泳(Imm
72、unofixationelectrophoresis,IFE) 能确定蛋白质的单克隆属性,从而诊断浆细胞病等能确定蛋白质的单克隆属性,从而诊断浆细胞病等检测标本可以是血清、尿液、脑脊液或其他体液检测标本可以是血清、尿液、脑脊液或其他体液以血清蛋白免疫固定电泳较多用以血清蛋白免疫固定电泳较多用 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件四、蛋白质免疫固定电泳四、蛋白质免疫固定电泳【检测原理检测原理】包括蛋白电泳和免疫沉淀两个过程包括蛋白电泳和免疫沉淀两个过程电泳:电泳:同一份标本加样在同一份标本加样在6 6个不同位置。个不同位置。加抗血清:加抗血清:抗抗IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、链和链和链
73、分别加到各链分别加到各 份电泳区带表面孵育,在适当的区带位置抗份电泳区带表面孵育,在适当的区带位置抗 原抗体复合物形成并沉淀。原抗体复合物形成并沉淀。清洗:清洗:电泳区带中未被固定的电泳区带中未被固定的ALB.ALB.1 1.2 2.球蛋白,球蛋白, 及未结合的游离抗原或抗体被洗去。及未结合的游离抗原或抗体被洗去。染色:染色:考马斯亮蓝等灵敏度较高的染色液。考马斯亮蓝等灵敏度较高的染色液。观察:有否单克隆免疫球蛋白,其抗原特异性、电泳位观察:有否单克隆免疫球蛋白,其抗原特异性、电泳位 置、该蛋白质量及其与其他蛋白质的大概比例。置、该蛋白质量及其与其他蛋白质的大概比例。蛋白质与非蛋白含氮化合物检
74、验课件四、蛋白质免疫固定电泳四、蛋白质免疫固定电泳【区带表现区带表现】对照电泳见血清蛋白电泳区带对照电泳见血清蛋白电泳区带第第2 2至至6 6份份电电泳泳分分别别显显示示IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、链链、链链与与其其相相应抗体的蛋白质复合物区带。应抗体的蛋白质复合物区带。正正常常区区带带染染色色程程度度依依次次是是IgGIgGIgAIgA和和链链链链IgMIgM,均均呈呈宽而弥散的区带。宽而弥散的区带。单单克克隆隆蛋蛋白白为为边边界界清清晰晰的的局局部部致致密密条条带带,条条带带宽宽度度和和深深度度与与其其含含量量成成正正比比,多多数数出出现现在在或或区,偶见于区,偶见于区。区。
75、蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件四、蛋白质免疫固定电泳四、蛋白质免疫固定电泳【临床意义临床意义】恶性浆细胞病诊断;与多克隆增殖的鉴别诊断;恶性浆细胞病诊断;与多克隆增殖的鉴别诊断; 脑脊液寡克隆蛋白的判断。脑脊液寡克隆蛋白的判断。恶恶性性浆浆细细胞胞病病包包括括骨骨髓髓瘤瘤、原原发发性性巨巨球球蛋蛋白白血血症症、重重链病、原发性淀粉样变性等。链病、原发性淀粉样变性等。各种单克隆蛋白频率:各种单克隆蛋白频率:IgG52IgG52.IgA21.IgA21.IgM12.IgM12. . IgD2 IgD2.IgE0.01.IgE0.01. .轻链轻链(或或)11)11. .重链重链(.(. 或或)1
76、)1,两种或多种克隆蛋白,两种或多种克隆蛋白0.50.5 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件四、蛋白质免疫固定电泳四、蛋白质免疫固定电泳【方法评价方法评价】检测速度较快,整个过程约检测速度较快,整个过程约1.51.5至至2h2h敏感性高,能检测到敏感性高,能检测到0.50.51.5g/L1.5g/L的单克隆抗体的单克隆抗体分辨率高,很短的电泳距离分离出单克隆蛋白组分分辨率高,很短的电泳距离分离出单克隆蛋白组分抗抗原原抗抗体体沉沉淀淀模模式式对对照照常常规规血血清清蛋蛋白白电电泳泳模模式式分分析析区区带,结果较容易判断带,结果较容易判断但良性但良性M M蛋白血症蛋白血症(BMG)(BMG)也表现为
77、类似的单克隆条带也表现为类似的单克隆条带 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【检测方法检测方法】蛋白质都由氨基酸组成,性质相似,除蛋白质都由氨基酸组成,性质相似,除ALBALB等极等极少数因有某种特性可用,能用染料结合法外,少数因有某种特性可用,能用染料结合法外,都需制备特异性抗体,用都需制备特异性抗体,用免疫化学法免疫化学法测定。测定。包括免疫比浊法、发光免疫法、放射免疫法、包括免疫比浊法、发光免疫法、放射免疫法、酶免疫法等。酶免疫法等。灵敏度均很高,适用于血、尿、脑脊液等大部灵敏度均很高,适用于血、尿、脑脊液等大部分标本,目前以分标本,目前以免疫比浊法免疫
78、比浊法最多用。最多用。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质免疫比浊法免疫比浊法原理:原理:体液中的某种蛋白质与其特异性抗体体液中的某种蛋白质与其特异性抗体形成抗原抗体复合物使反应液出现浊度形成抗原抗体复合物使反应液出现浊度反应液保持抗体过量时复合物随抗原量增加反应液保持抗体过量时复合物随抗原量增加反应液浊度随之增加,与一系列校准品对照计算反应液浊度随之增加,与一系列校准品对照计算免疫比浊法包括透射比浊法和散射比浊法免疫比浊法包括透射比浊法和散射比浊法透射比浊法检测反应终点或一定时间后吸光度值透射比浊法检测反应终点或一定时间后吸光度值散射比浊法检测入射光遇到复合
79、物后呈一定角度散射比浊法检测入射光遇到复合物后呈一定角度散射的光量,常测定浊度形成的速率。散射的光量,常测定浊度形成的速率。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【参考区间参考区间】 参见表参见表2-22-2。 【临床意义临床意义】1. 1. 血浆血浆PAPA 下降是肝功能不全的灵敏指标。下降是肝功能不全的灵敏指标。指示蛋白质营养不良:指示蛋白质营养不良: 200mg/L200mg/L400mg/L400mg/L正常正常 100mg/L100mg/L150mg150mgL L 轻度缺乏轻度缺乏 50mg/L50mg/L100mg100mgL L 中度缺乏中度缺乏
80、50mg50mgL L 严重缺乏严重缺乏蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】2. RBP2. RBP 血浆血浆RBPRBP增高见于肾小球损伤增高见于肾小球损伤血浆血浆RBPRBP下降见于:下降见于: 急性时相反应、肝脏疾病和蛋白质营养不良急性时相反应、肝脏疾病和蛋白质营养不良尿液尿液RBPRBP排泄量增加可反映肾小管功能损害排泄量增加可反映肾小管功能损害蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】3. 3. 血浆血浆AATAAT(1 1)AATAAT缺陷与肺气肿缺陷与肺气肿PiZZPiZZ型、型、P
81、iSZPiSZ型个体常出现年青时肺气肿型个体常出现年青时肺气肿低血浆低血浆AATAAT还可出现在胎儿呼吸窘迫综合征还可出现在胎儿呼吸窘迫综合征(2 2)AATAAT缺陷与肝病缺陷与肝病:新生儿新生儿PiZZPiZZ型和型和PiSZPiSZ型与其胆汁淤积、肝硬化型与其胆汁淤积、肝硬化和肝细胞癌的发生有关和肝细胞癌的发生有关PiZZPiZZ表型的某些成人也会发生肝损害表型的某些成人也会发生肝损害蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】4.4.血浆血浆AAGAAG 作为急性时相反应的指标作为急性时相反应的指标 在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死等炎症或组织在
82、风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死等炎症或组织坏死时坏死时48h48h后浓度迅速增高后浓度迅速增高 3 35 5天时出现高峰,一般增加天时出现高峰,一般增加3 34 4倍倍蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】 5. 5. 血浆血浆HpHp(1 1)溶血性疾病)溶血性疾病:含量明显下降;因参考范围较:含量明显下降;因参考范围较宽,一次测定价值不大,需连续观察。宽,一次测定价值不大,需连续观察。生化组合试验:血浆生化组合试验:血浆HpHp、LDHLDH和游离和游离FbFb; 血管外溶血可使后两者增高,血管外溶血可使后两者增高,HpHp则不会变化。则不会变
83、化。(2 2)烧伤和肾病综合征)烧伤和肾病综合征:ALBALB大量丢失时,大分大量丢失时,大分子子HpHp可代偿性明显增加。可代偿性明显增加。但但Hp1-1Hp1-1(两个(两个均为均为1 1表型)个体选择性蛋表型)个体选择性蛋白尿时血浆白尿时血浆HpHp通常下降通常下降 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】 6. 6. 血浆血浆2 2MGMG 低白蛋白血症尤其是肾病综合征时低白蛋白血症尤其是肾病综合征时 血浆血浆2 2MGMG含量可显著增高含量可显著增高 可能为代偿机制以保持血浆胶体渗透压可能为代偿机制以保持血浆胶体渗透压 蛋白质与非蛋白含
84、氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】7. 7. 血浆血浆CpCp 主要作为主要作为WilsonWilson病的辅助诊断指标病的辅助诊断指标WilsonWilson病:一种常染色体隐性遗传病,因血浆病:一种常染色体隐性遗传病,因血浆CpCp减少,血浆游离铜增加并沉积在肝引起肝硬化,减少,血浆游离铜增加并沉积在肝引起肝硬化,沉积在脑基底节豆状核导致豆状核变性。沉积在脑基底节豆状核导致豆状核变性。 该病又称为肝豆状核变性。该病又称为肝豆状核变性。患者:血清总铜降低、游离铜增加、尿铜增加患者:血清总铜降低、游离铜增加、尿铜增加 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体
85、液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】8. 8. 血浆血浆TRFTRF 贫血的鉴别诊断和铁缺乏的治疗监测:贫血的鉴别诊断和铁缺乏的治疗监测:缺铁性低血色素贫血时,缺铁性低血色素贫血时,TRFTRF代偿性合成增加;代偿性合成增加;血浆铁低,结合到血浆铁低,结合到TRFTRF的铁少,铁饱和度下降的铁少,铁饱和度下降(正常参考值为(正常参考值为30303838)再生障碍性贫血,血浆再生障碍性贫血,血浆TRFTRF正常或低下正常或低下 红细胞对铁的利用障碍,使铁饱和度增高红细胞对铁的利用障碍,使铁饱和度增高蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意
86、义】8. 8. 血浆血浆TRFTRF总铁结合力总铁结合力(total iron binding capacity,TIBC) (total iron binding capacity,TIBC) 血浆蛋白质对铁的结合容量血浆蛋白质对铁的结合容量( (主要是主要是TRFTRF对铁结对铁结合容量合容量) ),单位与血清铁相同。,单位与血清铁相同。铁饱和度()血清铁铁饱和度()血清铁/TIBC/TIBC 两者尤其是后者对贫血诊断和鉴别诊断更好两者尤其是后者对贫血诊断和鉴别诊断更好蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】9. BMG9. BMG 血浆血浆
87、BMGBMG增高:增高: 见于肾衰竭、炎症、肿瘤见于肾衰竭、炎症、肿瘤 尤其是与尤其是与B B淋巴细胞相关的肿瘤淋巴细胞相关的肿瘤尿液尿液BMGBMG排泄量增加:排泄量增加: 可反映肾小管功能损害可反映肾小管功能损害蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】10. 10. 血浆血浆CRPCRP (1 1)急性时相反应极灵敏的指标:在急性心肌梗)急性时相反应极灵敏的指标:在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿癌浸润等死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿癌浸润等时迅速显著增高,心肌梗死时迅速显著增高,心肌梗死6 612h12h即升高,可达即升高,
88、可达正常水平的正常水平的20002000倍。倍。5mg/L5mg/L作为明显的炎症信号作为明显的炎症信号1 15mg/L5mg/L为慢性低程度的炎症或急性时相反应始为慢性低程度的炎症或急性时相反应始 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【临床意义临床意义】10. 10. 血浆血浆CRPCRP (2 2)做为心血管疾病的独立危险因子)做为心血管疾病的独立危险因子为血浆为血浆CRPCRP低浓度增高,须用更灵敏测定方法低浓度增高,须用更灵敏测定方法大多健康成年人大多健康成年人1mg/L1mg/L作为心血管疾病危险因子的标记:作为心血管疾病危险因子的标记: 1mg/L
89、3.0mg/L 3.0mg/L 为高度危险性。为高度危险性。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【方法评价方法评价】免疫比浊法免疫比浊法检测限为检测限为101020mg/L20mg/L精密度较好,批内变异系数通常小于精密度较好,批内变异系数通常小于5 5需加促聚剂聚乙二醇加速大的免疫复合物形成需加促聚剂聚乙二醇加速大的免疫复合物形成抗原或抗体量大大过剩时易出现可溶性复合物抗原或抗体量大大过剩时易出现可溶性复合物受血脂影响,尤其是低稀释度时,脂蛋白的小颗粒受血脂影响,尤其是低稀释度时,脂蛋白的小颗粒可形成浊度,使测定值假性升高。可形成浊度,使测定值假性升高。 蛋
90、白质与非蛋白含氮化合物检验课件五、体液个别蛋白质五、体液个别蛋白质【方法评价方法评价】免疫化学法已应用于许多体液蛋白质测定免疫化学法已应用于许多体液蛋白质测定 ALBALB、PAPA、AATAAT、AAGAAG、HAPHAP、AMGAMG、CERCER、TRFTRF、CRPCRP、IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA、C3C3、C4C4和和1 1抗糜蛋白酶共抗糜蛋白酶共1515种种蛋白质均已有国际公认的标准参考物质蛋白质均已有国际公认的标准参考物质CRM470CRM470(Certified Reference MaterialCertified Reference Material)。)
91、。免疫球蛋白轻链免疫球蛋白轻链和和、2 2-mG-mG、1 1- mG- mG、RBPRBP、IgDIgD、IgEIgE等,也可采用免疫比浊法测定等,也可采用免疫比浊法测定蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件六、体液氨基酸六、体液氨基酸(一)过筛试验检测氨基酸(一)过筛试验检测氨基酸1 1氨基酸薄层层析氨基酸薄层层析 能将体液中氨基酸分离,并常用茚三酮显色能将体液中氨基酸分离,并常用茚三酮显色 大多数氨基酸与茚三酮反应呈紫色大多数氨基酸与茚三酮反应呈紫色蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件六、体液氨基酸六、体液氨基酸(一)过筛试验检测氨基酸(一)过筛试验检测氨基酸试验和颜色试验和颜色被检测的代谢物被检
92、测的代谢物被检测疾病被检测疾病三氯化铁三氯化铁暗蓝绿(持久)暗蓝绿(持久)苯丙酮酸苯丙酮酸苯丙酮酸尿症苯丙酮酸尿症绿(短暂)绿(短暂)对对羟苯丙酮酸羟苯丙酮酸酪氨酸血症酪氨酸血症蓝(短暂)蓝(短暂)尿黑酸尿黑酸尿黑酸尿症尿黑酸尿症灰绿灰绿咪唑、丙酮酸咪唑、丙酮酸组氨酸血症组氨酸血症灰蓝灰蓝支链酮酸支链酮酸支链酮酸尿症支链酮酸尿症蓝绿蓝绿5-羟吲哚乙酸羟吲哚乙酸类癌类癌紫色紫色水杨酸盐水杨酸盐(干扰物)(干扰物)紫褐紫褐吩噻嗪吩噻嗪(干扰物)(干扰物)氰化物氰化物/硝基氰酸盐硝基氰酸盐樱桃红樱桃红胱氨酸胱氨酸胱氨酸尿症胱氨酸尿症同型胱氨酸同型胱氨酸同型胱氨酸尿症同型胱氨酸尿症胱氨酸胱氨酸同型胱氨
93、酸二硫化物同型胱氨酸二硫化物同型胱氨酸尿症同型胱氨酸尿症青霉胺青霉胺-胱氨酸二硫化物胱氨酸二硫化物(治疗)(治疗)2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼黄白色黄白色支链酮酸,苯丙酮酸支链酮酸,苯丙酮酸支链酮酸尿症,苯丙酮酸尿症支链酮酸尿症,苯丙酮酸尿症亚硝基萘酚:橙红色亚硝基萘酚:橙红色酪氨酸及其代谢物酪氨酸及其代谢物酪氨酸代谢紊乱,酪氨酸血症酪氨酸代谢紊乱,酪氨酸血症2 2尿氨基酸颜色试验尿氨基酸颜色试验 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件六、体液氨基酸六、体液氨基酸(一)过筛试验检测氨基酸(一)过筛试验检测氨基酸3.Guthrie3.Guthrie微生物试验微生物试验 琼琼脂脂培培养养基基中中含含有有
94、能能特特异异针针对对某某种种待待检检氨氨基基酸酸的的竞争性抑制剂,结构与待检氨基酸相似。竞争性抑制剂,结构与待检氨基酸相似。将将枯枯草草芽芽孢孢杆杆菌菌芽芽孢孢加加入入,样样品品点点到到纸纸片片上上并并放放到琼脂表面,琼脂板孵育后观察细菌生长。到琼脂表面,琼脂板孵育后观察细菌生长。若若有有高高浓浓度度待待检检氨氨基基酸酸,氨氨基基酸酸抑抑制制剂剂的的作作用用减减弱或被克服,能观察到菌株生长。弱或被克服,能观察到菌株生长。将将系系统统设设计计成成待待检检氨氨基基酸酸超超过过其其参参考考上上限限时时显显示示细菌生长,来检测疾病。细菌生长,来检测疾病。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件六、体液氨基酸六
95、、体液氨基酸(二)氨基酸定量(二)氨基酸定量1 1色谱法色谱法 GCGC法法:样样品品用用量量少少、灵灵敏敏和和快快速速,但但在在仪仪器器所所具有的温度下可挥发性低。临床实验室应用少具有的温度下可挥发性低。临床实验室应用少HPLCHPLC法法:分分辨辨率率和和灵灵敏敏度度均均高高,分分析析时时间间相相对对短,较广泛地应用于体液氨基酸的测定。短,较广泛地应用于体液氨基酸的测定。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件六、体液氨基酸六、体液氨基酸(二)氨基酸定量(二)氨基酸定量2.2.酶法酶法 L-L-苯丙氨酸:苯丙氨酸: L-L-苯丙氨酸脱氢酶法苯丙氨酸脱氢酶法 L-L-苯丙氨酸氧化酶法,生成醌亚胺苯
96、丙氨酸氧化酶法,生成醌亚胺苯丙酮酸:苯丙酮酸:L-L-苯丙氨酸脱氢酶法。苯丙氨酸脱氢酶法。谷氨酰胺:谷氨酰胺酶和谷氨酸脱氢酶催化。谷氨酰胺:谷氨酰胺酶和谷氨酸脱氢酶催化。支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸):支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸): 亮氨酸脱氢酶法,亮氨酸脱氢酶法,氧化脱氨生成酮酸,氧化脱氨生成酮酸,NADNAD还原成还原成NADHNADH蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件七、体液尿酸七、体液尿酸【检测方法检测方法】早期常采用氧化还原法,以磷钨酸法较常用,早期常采用氧化还原法,以磷钨酸法较常用, 特异性差,临床实验室已不再采用。特异性差,临床实验室已不再采用。尿酸酶紫外吸收法是
97、测定尿酸的参考方法。尿酸酶紫外吸收法是测定尿酸的参考方法。尿酸酶尿酸酶- -过氧化物酶法:目前常采用过氧化物酶法:目前常采用 原原理理:尿尿酸酸酶酶氧氧化化尿尿酸酸生生成成尿尿囊囊素素和和H H2 2O O2 2,后后者者在在过过氧氧化化物物酶酶催催化化下下,使使2 2,4-4-二二氯氯酚酚和和4-4-氨氨基基安安替替比林缩合生成醌类有色化合物。比林缩合生成醌类有色化合物。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件七、体液尿酸七、体液尿酸【参考区间参考区间】1 1血清尿酸血清尿酸 男性男性210210420mol/L420mol/L,女性,女性150150350mol/L350mol/L2 2尿液尿酸尿
98、液尿酸 膳食嘌呤含量对尿酸排出量影响很大膳食嘌呤含量对尿酸排出量影响很大无嘌呤膳食:男无嘌呤膳食:男2480mol/d2480mol/d,女稍低,女稍低低嘌呤膳食:男低嘌呤膳食:男2830mol/d2830mol/d,女,女2360mol/d2360mol/d高嘌呤膳食:高嘌呤膳食:5900mol/d5900mol/d均衡膳食:均衡膳食:148014804430mmol/d4430mmol/d蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件七、体液尿酸七、体液尿酸【临床意义临床意义】1 1血清尿酸血清尿酸 为发现高尿酸血症,后者的主要危害是引起痛风为发现高尿酸血症,后者的主要危害是引起痛风2 2尿尿酸排出量尿
99、尿酸排出量 可判断肾脏排泄尿酸的能力可判断肾脏排泄尿酸的能力 分析高尿酸血症是否由肾脏排泄障碍所引起分析高尿酸血症是否由肾脏排泄障碍所引起蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件七、体液尿酸七、体液尿酸【方法评价方法评价】尿酸酶尿酸酶- -过氧化物酶法过氧化物酶法过过氧氧化化物物酶酶催催化化反反应应特特异异性性较较差差,维维生生素素C C、胆胆红红素等还原性物质有负干扰。素等还原性物质有负干扰。血血清清尿尿酸酸浓浓度度在在几几百百mol/Lmol/L水水平平,远远低低于于血血糖糖、总胆固醇等,胆红素等负干扰容易被观察到。总胆固醇等,胆红素等负干扰容易被观察到。 试剂中加入胆红素氧化酶能消除胆红素干扰。
100、试剂中加入胆红素氧化酶能消除胆红素干扰。可用于血清和尿液尿酸测定可用于血清和尿液尿酸测定 检测上限约为检测上限约为700mol/L700mol/L,尿液尿酸应稀释测定,尿液尿酸应稀释测定 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件一、蛋白质代谢紊乱的生物化学诊断一、蛋白质代谢紊乱的生物化学诊断蛋白质的变化与人类许多疾病密切相关蛋白质的变化与人类许多疾病密切相关病理情况下血浆蛋白质的变化资料已越来越多病理情况下血浆蛋白质的变化资料已越来越多随技术发展许多微量血浆蛋白质分析已较容易随技术发展许多微量血浆蛋白质分析已较容易第三节第三节体液蛋白质与非蛋白含氮化合物检测的临床应用体液蛋白质与非蛋白含氮化合物检测的
101、临床应用蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(一)肝脏疾病的血浆蛋白质变化(一)肝脏疾病的血浆蛋白质变化1.1.多种血浆蛋白质含量下降多种血浆蛋白质含量下降 ALBALB为血浆中含量最多的蛋白质,是肝病最常用的为血浆中含量最多的蛋白质,是肝病最常用的蛋白质指标,因半寿期长而不很灵敏,在严重慢性蛋白质指标,因半寿期长而不很灵敏,在严重慢性肝炎、肝硬化以及重症肝炎时有明显下降。肝炎、肝硬化以及重症肝炎时有明显下降。PAPA是肝脏合成功能的敏感指标,肝功能下降时显著是肝脏合成功能的敏感指标,肝功能下降时显著降低。肝病时血浆胆碱酯酶因合成减少而降低。降低。肝病时血浆胆碱酯酶因合成减少而降低。其他如转铁蛋白
102、、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、其他如转铁蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、1 1- -酸酸性糖蛋白等在肝功能明显下降时也可出现减少。性糖蛋白等在肝功能明显下降时也可出现减少。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(一)肝脏疾病的血浆蛋白质变化(一)肝脏疾病的血浆蛋白质变化2.2.凝血蛋白质和凝血酶原时间凝血蛋白质和凝血酶原时间(PT)(PT)严重肝脏疾病有明显严重肝脏疾病有明显FgFg缺乏和某些凝血因子减少缺乏和某些凝血因子减少凝血酶原时间是真正的功能性试验,延长提示严重凝血酶原时间是真正的功能性试验,延长提示严重肝功能障碍,对肝合成功能的快速变化敏感。肝功能障碍,对肝合成功能的快速变化敏感。PTPT对轻微的肝
103、细胞功能障碍不敏感,急性病毒性或对轻微的肝细胞功能障碍不敏感,急性病毒性或中毒性肝炎若中毒性肝炎若PTPT延长,是爆发性肝衰竭早期指标。延长,是爆发性肝衰竭早期指标。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(一)肝脏疾病的血浆蛋白质变化(一)肝脏疾病的血浆蛋白质变化3.3.免疫球蛋白(免疫球蛋白(IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM)增高)增高 慢性肝病网状内皮系统受损或门静脉旁路形成时升高慢性肝病网状内皮系统受损或门静脉旁路形成时升高急性肝炎轻度升高,慢性活动性肝炎和肝硬化显著升高急性肝炎轻度升高,慢性活动性肝炎和肝硬化显著升高 尤其是自身免疫性肝炎尤其是自身免疫性肝炎IgGIgG升高常见于慢性
104、活动性肝炎升高常见于慢性活动性肝炎IgAIgA升高常见于各种肝硬化,酒精性肝硬化时尤其显著升高常见于各种肝硬化,酒精性肝硬化时尤其显著原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化IgMIgM大量升高大量升高 病毒性肝炎早期可出现病毒性肝炎早期可出现IgMIgM升高升高蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)对某些疾病的重要诊断意义(二)对某些疾病的重要诊断意义1.1.遗传性蛋白合成缺陷与疾病遗传性蛋白合成缺陷与疾病 年轻肺气肿者应检测年轻肺气肿者应检测1 1- -抗胰蛋白酶是否缺陷抗胰蛋白酶是否缺陷wilsonwilson病时可能存在铜蓝蛋白遗传性合成减少病时可能存在铜蓝蛋白遗传性合成减少2.2.贫血的
105、诊断和鉴定贫血的诊断和鉴定 缺铁性贫血患者转铁蛋白升高缺铁性贫血患者转铁蛋白升高溶血性贫血时结合珠蛋白减少溶血性贫血时结合珠蛋白减少 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(三)急性时相反应(三)急性时相反应(acute phase reactionacute phase reaction,APRAPR)急性时相反应急性时相反应 是对炎症是对炎症( (如感染、自身免疫性疾病等如感染、自身免疫性疾病等) )和组织损伤和组织损伤( (如创伤、手术、心肌梗死、肿瘤等如创伤、手术、心肌梗死、肿瘤等) )的非特异性反应,的非特异性反应,血浆蛋白质如血浆蛋白质如AATAAT、AAGAAG、HpHp、CpCp、C
106、4C4、C3C3、FgFg和和CRPCRP等显著升高或升高,等显著升高或升高,PAPA、ALBALB、TFRTFR出现下降。出现下降。这些血浆蛋白质统称为这些血浆蛋白质统称为急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 (acute phase proteins,APPsacute phase proteins,APPs) 增加的蛋白质称为增加的蛋白质称为正向正向APPsAPPs 下降的蛋白质称为下降的蛋白质称为负向负向APPsAPPs 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件APRAPR的机制的机制是对炎症的一般反应是对炎症的一般反应损伤部位释放的细胞因子引发肝细胞中上述损伤部位释放的细胞因子引发肝细胞中上述
107、蛋白质合成量的改变。蛋白质合成量的改变。正向正向APPsAPPs是机体防御机制的一个部分是机体防御机制的一个部分尤其是活化补体、蛋白酶抑制剂对酶活性的控制尤其是活化补体、蛋白酶抑制剂对酶活性的控制HpHp对被破坏红细胞中释放对被破坏红细胞中释放HbHb的保护作用等的保护作用等作为营养蛋白的负向作为营养蛋白的负向APPsAPPs此时合成减少此时合成减少 可为合成正向可为合成正向APPsAPPs提供更多的氨基酸原料提供更多的氨基酸原料 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件APRAPR的时相的时相C-C-反应蛋白首先升高反应蛋白首先升高1212小时内小时内AAGAAG也升高也升高然后然后AATAAT、H
108、pHp、C4C4和和FgFg升高升高最后是最后是C3C3和铜蓝蛋白升高和铜蓝蛋白升高通常在通常在2 25 5天内这些天内这些APPsAPPs达到最高值达到最高值蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(四)类固醇激素对血浆蛋白质的影响(四)类固醇激素对血浆蛋白质的影响雌激素增多:雌激素增多:如妊娠、使用避孕药如妊娠、使用避孕药 AATAAT、TRFTRF升高,升高,CpCp显著增加,显著增加,AMGAMG增加增加 AAGAAG和和HpHp合成减少合成减少糖皮质激素增加:糖皮质激素增加: 包括库欣综合征和外源性强的松、地塞米松等包括库欣综合征和外源性强的松、地塞米松等 可引起可引起AAGAAG升高升高蛋
109、白质与非蛋白含氮化合物检验课件(五)器官组织损伤导致的血浆蛋白质变化(五)器官组织损伤导致的血浆蛋白质变化正常血浆含来源于组织细胞的各种各样蛋白质,正常血浆含来源于组织细胞的各种各样蛋白质,但相当微量。但相当微量。某些器官或组织病变时,如肝炎、心肌损伤、某些器官或组织病变时,如肝炎、心肌损伤、胰腺炎、恶性肿瘤等,则能向血浆中释放出更胰腺炎、恶性肿瘤等,则能向血浆中释放出更多的某种蛋白质或酶。多的某种蛋白质或酶。检测这些蛋白质有助于以上疾病的诊断,这些检测这些蛋白质有助于以上疾病的诊断,这些将在其他相关章中叙述。将在其他相关章中叙述。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件二、氨基酸代谢紊乱的生物化学
110、诊断二、氨基酸代谢紊乱的生物化学诊断遗传性氨基酸代谢紊乱可从三个水平上诊断:遗传性氨基酸代谢紊乱可从三个水平上诊断: 异常的异常的DNADNA检测检测 产前筛查和产后检测酶缺陷产前筛查和产后检测酶缺陷 血清和尿液氨基酸检测血清和尿液氨基酸检测血清或尿液氨基酸定性和血清或尿液氨基酸定性和/ /或定量检测最常用或定量检测最常用蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件三、高尿酸血症与痛风的生物化学诊断三、高尿酸血症与痛风的生物化学诊断(一)高尿酸血症和痛风的概念(一)高尿酸血症和痛风的概念血血清清尿尿酸酸浓浓度度超超过过参参考考值值上上限限称称为为高高尿尿酸酸血血症症,即即男男性性和和绝绝经经后后女女性性大
111、大于于420mol/L420mol/L,绝绝经经前前女性大于女性大于350mol/L350mol/L。血血液液尿尿酸酸浓浓度度增增高高到到一一定定程程度度时时,可可出出现现尿尿酸酸盐盐结结晶晶形形成成和和沉沉积积,并并引引起起特特征征性性急急性性关关节节炎炎、痛痛风风石石、慢慢性性关关节节炎炎、关关节节畸畸形形、慢慢性性间间质质性性肾炎和尿酸性尿路结石,即为痛风。肾炎和尿酸性尿路结石,即为痛风。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)痛风的发生机制(二)痛风的发生机制血液或滑囊液中的尿酸钠浓度达到饱和状态,血液或滑囊液中的尿酸钠浓度达到饱和状态,将出现结晶沉淀。将出现结晶沉淀。在体温在体温373
112、7、pH7.4pH7.4时,尿酸钠的溶解度约为时,尿酸钠的溶解度约为420mol/L420mol/L,而在,而在3030时为时为268mol/L268mol/L。饱和状态的尿酸钠,与血浆特异性饱和状态的尿酸钠,与血浆特异性1 1、2 2球蛋球蛋白结合后,仍具有一定的稳定性。白结合后,仍具有一定的稳定性。遇有下列情况即可使尿酸钠呈微小结晶析出:遇有下列情况即可使尿酸钠呈微小结晶析出: 血浆血浆1 1、2 2球蛋白减少球蛋白减少 局部局部pHpH降低降低 局部体温降低局部体温降低 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(二)痛风的发生机制(二)痛风的发生机制尿酸钠结晶易沉淀在血管较少、粘多糖含量较尿酸钠
113、结晶易沉淀在血管较少、粘多糖含量较丰富的软骨、关节腔内及其他结缔组织中。丰富的软骨、关节腔内及其他结缔组织中。运动时这些组织容易发生缺氧,糖酵解加速和运动时这些组织容易发生缺氧,糖酵解加速和乳酸产生增多,乳酸产生增多,pHpH降低。降低。运动、饮酒、应激、局部损伤等都可诱发这些运动、饮酒、应激、局部损伤等都可诱发这些部位的尿酸钠结晶形成及急性炎症发作。部位的尿酸钠结晶形成及急性炎症发作。尿酸钠结晶可吸附尿酸钠结晶可吸附IgGIgG,在补体参与下诱发多型,在补体参与下诱发多型核白细胞吞噬作用,促使白细胞膜破裂,释放核白细胞吞噬作用,促使白细胞膜破裂,释放各种炎症介质,导致组织发生炎症反应。各种炎
114、症介质,导致组织发生炎症反应。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(三)高尿酸血症和痛风(三)高尿酸血症和痛风的生物化学诊断及治疗的生物化学诊断及治疗1.1.高尿酸血症及其类型的判断高尿酸血症及其类型的判断(1 1)尿酸排泄量)尿酸排泄量 普通饮食普通饮食4800mol/24h4800mol/24h 低嘌呤饮食低嘌呤饮食3600mol/24h3600mol/24h 为生成过多型为生成过多型蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(三)高尿酸血症和痛风(三)高尿酸血症和痛风的生物化学诊断及治疗的生物化学诊断及治疗1.1.高尿酸血症及其类型的判断高尿酸血症及其类型的判断(2 2)尿酸清除率:)尿酸清除率:C
115、uaCua= =(UuaVUuaV)/Sua/Sua Uua Uua为尿尿酸浓度,为尿尿酸浓度,V V表示尿液表示尿液mL/minmL/min Sua Sua为血清尿酸浓度为血清尿酸浓度参考区间:参考区间:6.66.612.6mL/min12.6mL/minUuaUua下降属排泄减少型下降属排泄减少型UuaUua升高属生成过多型升高属生成过多型 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(三)高尿酸血症和痛风(三)高尿酸血症和痛风的生物化学诊断及治疗的生物化学诊断及治疗1.1.高尿酸血症及其类型的判断高尿酸血症及其类型的判断(3 3)尿酸清除率与肌酐清除率比值)尿酸清除率与肌酐清除率比值 Cua/Ccr
116、=Cua/Ccr=(Uua/SuaUua/Sua)/ /(Ucr/ScrUcr/Scr)100%100% 10%10%: 生成过多型生成过多型 5%5%: 排泄减少型排泄减少型 5 51010:混合型:混合型(4 4)随意尿的尿酸)随意尿的尿酸/ /肌酐比值肌酐比值 1 1: 生成过多型生成过多型 0.50.5:排泄减少型:排泄减少型蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件(三)高尿酸血症和痛风(三)高尿酸血症和痛风的生物化学诊断及治疗的生物化学诊断及治疗2.2.痛风的诊断和生物化学治疗痛风的诊断和生物化学治疗 诊诊断断:除除高高尿尿酸酸血血症症外外,表表现现为为急急性性关关节节炎炎、痛痛风风石石、慢
117、慢性性关关节节炎炎、关关节节畸畸形形、慢慢性性间间质质性性肾肾炎炎和和尿尿酸酸性性尿尿路结石中的一种或多种。路结石中的一种或多种。治疗:治疗:常用别嘌呤醇常用别嘌呤醇与与次次黄黄嘌嘌呤呤结结构构相相似似,被被黄黄嘌嘌呤呤氧氧化化酶酶氧氧化化为为别别黄黄嘌嘌呤呤,牢牢固固结结合合在在该该酶酶活活性性部部位位,抑抑制制次次黄黄嘌嘌呤呤和和黄黄嘌嘌呤转变为尿酸。呤转变为尿酸。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件四、病例分析四、病例分析【病史病史】 男性,男性,5858岁,反复乏力腹胀岁,反复乏力腹胀2 2年,年,1 1月前再次出现月前再次出现全身乏力不适,上腹饱胀。全身乏力不适,上腹饱胀。既往史:有嗜酒
118、史,白酒既往史:有嗜酒史,白酒500mL/d500mL/d。体检:体温、脉搏、呼吸正常,慢肝面容,巩膜体检:体温、脉搏、呼吸正常,慢肝面容,巩膜轻微黄染,腹膨隆,腹壁静脉无曲张,肝、脾肋轻微黄染,腹膨隆,腹壁静脉无曲张,肝、脾肋下未及。下未及。B B超:显示腹腔积液。超:显示腹腔积液。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件四、病例分析四、病例分析【实验室检查实验室检查】血清指标:总胆红素血清指标:总胆红素71mol/L71mol/L,直接胆红素,直接胆红素52mol/L52mol/L,TP69.3g/LTP69.3g/L,Alb24.9 g/LAlb24.9 g/L,丙氨酸氨基转移酶,丙氨酸氨基转
119、移酶25U/L25U/L,天冬氨酸氨基转移酶天冬氨酸氨基转移酶62U/L62U/L,碱性磷酸酶,碱性磷酸酶62U/L62U/L,IgG28.2 g/LIgG28.2 g/L,IgA9.52 g/LIgA9.52 g/L,IgM4.0 g/LIgM4.0 g/L。蛋白电泳:蛋白电泳:Alb35.9%Alb35.9%、1 1球蛋白球蛋白2.3%2.3%、2 2球蛋白球蛋白4.1%4.1%,球蛋白球蛋白8.1%8.1%,球蛋白球蛋白49.7%49.7%,甲胎蛋白,甲胎蛋白3.5g/L3.5g/L,HBsAgHBsAg(- -)。)。凝血指标:凝血指标:PT 15.8sPT 15.8s(参考区间(参考
120、区间9.19.112.3s12.3s),),APTT 1.48APTT 1.48(参考区间(参考区间0.80.81.201.20),),Fg1.19 g/LFg1.19 g/L。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件四、病例分析四、病例分析【临床诊断临床诊断】酒精性肝硬化伴腹水。酒精性肝硬化伴腹水。【诊断依据诊断依据】血清血清ALBALB25 g/L25 g/L,胆红素和氨基转移酶增高,说明,胆红素和氨基转移酶增高,说明肝功能明显下降,结合蛋白电泳结果和肝功能明显下降,结合蛋白电泳结果和IgIg增高,可增高,可诊断为肝硬化。诊断为肝硬化。IgIg增高以增高以IgAIgA幅度最高,结合其幅度最高,结合
121、其HBsAgHBsAg(- -)及嗜酒史,)及嗜酒史,初步判断为酒精性肝硬化。初步判断为酒精性肝硬化。凝血功能和凝血功能和FgFg明显下降,说明肝功能已严重障碍,明显下降,说明肝功能已严重障碍,病史、病史、B B超及超及ALBALB浓度,均说明患者已出现腹水。浓度,均说明患者已出现腹水。蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件本章小结本章小结血浆蛋白质有多种功能,血浆蛋白质有多种功能,PAPA即即TTRTTR能转运甲状腺能转运甲状腺激素,并结合携带视黄醇的激素,并结合携带视黄醇的RBPRBP;ALBALB是最重要是最重要的血浆营养蛋白和血浆载体蛋白;的血浆营养蛋白和血浆载体蛋白;AATAAT是最重要是
122、最重要的蛋白酶抑制物;的蛋白酶抑制物;AAGAAG是主要的是主要的APPAPP;HpHp结合结合HbHb并防止并防止HbHb从肾脏丢失;从肾脏丢失;2 2MGMG也是主要的蛋白酶也是主要的蛋白酶抑制剂;血浆铜抑制剂;血浆铜9595存在于存在于CpCp中;中;TRFTRF携带铁在携带铁在血液中运输;血液中运输;CRPCRP能结合异物并激活补体。能结合异物并激活补体。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件本章小结本章小结氨基酸代谢紊乱有遗传性和继发性,表现为氨氨基酸代谢紊乱有遗传性和继发性,表现为氨基酸血症和氨基酸尿症,遗传性为代谢酶缺陷,基酸血症和氨基酸尿症,遗传性为代谢酶缺陷,种类很多。种类很多。
123、高尿酸血症可分为原发性和继发性两类,主要高尿酸血症可分为原发性和继发性两类,主要病因为嘌呤代谢紊乱、尿酸排泄障碍、代谢综病因为嘌呤代谢紊乱、尿酸排泄障碍、代谢综合征相关、高嘌呤饮食、各种肾脏疾病和细胞合征相关、高嘌呤饮食、各种肾脏疾病和细胞破坏增多。破坏增多。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件本章小结本章小结双缩脲法测定血清双缩脲法测定血清TPTP,邻苯三酚红钼法常测定尿液,邻苯三酚红钼法常测定尿液TPTP。血清血清ALBALB可用可用BCGBCG法或法或BCPBCP法测定,其下降在临床多见。法测定,其下降在临床多见。异常血清蛋白质电泳图谱类型较多,异常血清蛋白质电泳图谱类型较多, 其中肾病型
124、、肝硬化型和其中肾病型、肝硬化型和M M蛋白型较典型。蛋白型较典型。IFEIFE能确定蛋白质的单克隆属性,诊断浆细胞病等。能确定蛋白质的单克隆属性,诊断浆细胞病等。体液中个别蛋白质测定多采用免疫比浊法,体液中个别蛋白质测定多采用免疫比浊法, 其中其中1515种蛋白质已有国际公认的标准参考物质。种蛋白质已有国际公认的标准参考物质。体液氨基酸有定性过筛试验,定量测定可采用体液氨基酸有定性过筛试验,定量测定可采用HPLCHPLC法。法。体液尿酸常采用尿酸酶体液尿酸常采用尿酸酶- -过氧化物酶法,还原性物质对过氧化物酶法,还原性物质对其结果有负干扰。其结果有负干扰。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件本
125、章小结本章小结血浆蛋白质在临床上应用较多,肝脏疾病时血浆蛋白质在临床上应用较多,肝脏疾病时ALBALB、PAPA、胆碱酯酶等下降,胆碱酯酶等下降,PTPT延长和延长和IgIg升高;年青肺气肿者升高;年青肺气肿者AATAAT可能缺陷,可能缺陷,wilsonwilson病时可能病时可能CpCp减少;缺铁性贫血者减少;缺铁性贫血者TRFTRF升高,溶血性贫血时升高,溶血性贫血时HpHp减少。减少。APRAPR时血浆蛋白质有正向时血浆蛋白质有正向APPsAPPs和负向和负向APPsAPPs;某些器官或;某些器官或组织病变时某种血浆蛋白质含量增高。组织病变时某种血浆蛋白质含量增高。遗传性氨基酸代谢紊乱最常用遗传性氨基酸代谢紊乱最常用体液氨基酸检测。体液氨基酸检测。血清尿酸血清尿酸420mol/L(420mol/L(绝经前女性绝经前女性350mol/L)350mol/L)为为高尿酸血症,并可引起痛风,尿液尿酸有助于分析高高尿酸血症,并可引起痛风,尿液尿酸有助于分析高尿酸血症是生成过多型还是排泄减少型或是混合型。尿酸血症是生成过多型还是排泄减少型或是混合型。 蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件谢谢!谢谢!蛋白质与非蛋白含氮化合物检验课件