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1、2024/7/191脑脊液标本微生物学脑脊液标本微生物学检验检验2024/7/192主要内容主要内容中枢神经系统感染病常见病原微生物中枢神经系统感染病常见病原微生物 与主要临床特征与主要临床特征n n脑脊液标本的采集、运送与外观观察脑脊液标本的采集、运送与外观观察 n n脑脊液标本的细菌学检验程序脑脊液标本的细菌学检验程序n n病毒性脑炎病原学检查原则病毒性脑炎病原学检查原则2024/7/193主要内容主要内容n n化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、新生隐球菌化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、新生隐球菌性脑膜炎的病原学检查方法与临床意义性脑膜炎的病原学检查方法与临床意义n n（1 1）直接涂片检查）直接涂
2、片检查 革兰染色、抗酸染色或革兰染色、抗酸染色或金胺金胺“O O”染色、墨汁染色染色、墨汁染色 n n（2 2）分离培养）分离培养 培养基选择、菌落性状、生培养基选择、菌落性状、生化鉴定化鉴定2024/7/194中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病n n中枢神经系统（中枢神经系统（中枢神经系统（中枢神经系统（Central nervous systemCentral nervous systemCentral nervous systemCentral nervous system，CNSCNSCNSCNS）感染系指病原微生物侵犯感染系指病原微生物侵犯感染系指病原微生物侵犯感染系指病原微生物侵
3、犯CNSCNSCNSCNS实质、被膜及血管等实质、被膜及血管等实质、被膜及血管等实质、被膜及血管等引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。2024/7/195n n一般而言，微生物难以侵入中枢神经系统，一般而言，微生物难以侵入中枢神经系统，其周围不仅具有坚固的骨骼，亦存在特殊的其周围不仅具有坚固的骨骼，亦存在特殊的毛细血管循环供养。这种毛细血管微循环为毛细血管循环供养。这种毛细血管微循环为非渗漏性血管，若非局灶性炎症，抗生素也非渗漏性血管，若非局灶性炎症，抗生素也难以
4、进入其中。难以进入其中。中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病2024/7/196n n中枢神经系统感染较为少见，但是脑和脊髓中枢神经系统感染较为少见，但是脑和脊髓一旦受到感染则后果严重。患者即使免于死一旦受到感染则后果严重。患者即使免于死亡，也可能遗留神经性损伤。快速的鉴别诊亡，也可能遗留神经性损伤。快速的鉴别诊断与早期治疗均有助于降低本病的死亡率和断与早期治疗均有助于降低本病的死亡率和致残率。致残率。中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病常见病原微生物常见病原微生物2024/7/197中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病常见病原微生物常见病原微生物2024/7/198n n中枢神经系统感染除可
5、出现与其他急性中枢神经系统感染除可出现与其他急性感染相似症状如：发热、不适、食欲不感染相似症状如：发热、不适、食欲不振、恶心、乏力外，还可出现头疼、喷振、恶心、乏力外，还可出现头疼、喷射性呕吐及颈强直症状脑膜刺激征。射性呕吐及颈强直症状脑膜刺激征。中枢神经系统感染中枢神经系统感染的一般临床特征的一般临床特征 2024/7/199n n体检时，患者克氏征（体检时，患者克氏征（KernigKernig征）和布氏征征）和布氏征（BrudzinskiBrudzinski征）阳性。征）阳性。n n颅内压升高时，患者出现头疼的症状，平躺后颅内压升高时，患者出现头疼的症状，平躺后疼痛加剧。颅内压增高严重者易
6、出现脑疝。疼痛加剧。颅内压增高严重者易出现脑疝。n n除此之外，患者亦可出现意识障碍、视乳头神除此之外，患者亦可出现意识障碍、视乳头神经水肿等临床表现。经水肿等临床表现。中枢神经系统感染中枢神经系统感染的一般临床特征的一般临床特征 2024/7/1910中枢神经系统的主要感染性疾病中枢神经系统的主要感染性疾病及其常见临床特征及其常见临床特征n n脑膜炎脑膜炎n n化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎n n结核性脑膜炎结核性脑膜炎结核性脑膜炎结核性脑膜炎n n新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎2024/7/1911化脓性脑膜炎常见临床特征化脓性脑
7、膜炎常见临床特征及其细菌及其细菌n n化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎本病是由各种化脓性细菌感本病是由各种化脓性细菌感本病是由各种化脓性细菌感本病是由各种化脓性细菌感染引起的脑膜炎症。软脑膜染引起的脑膜炎症。软脑膜染引起的脑膜炎症。软脑膜染引起的脑膜炎症。软脑膜和蛛网膜因细菌感染而发生和蛛网膜因细菌感染而发生和蛛网膜因细菌感染而发生和蛛网膜因细菌感染而发生化脓性改变，并使脑脊液产化脓性改变，并使脑脊液产化脓性改变，并使脑脊液产化脓性改变，并使脑脊液产生炎症性变化起病急，高热、生炎症性变化起病急，高热、生炎症性变化起病急，高热、生炎症性变化起病急，高热、畏寒、头疼、烦躁、惊厥、畏
8、寒、头疼、烦躁、惊厥、畏寒、头疼、烦躁、惊厥、畏寒、头疼、烦躁、惊厥、喷射性呕吐、意识障碍等中喷射性呕吐、意识障碍等中喷射性呕吐、意识障碍等中喷射性呕吐、意识障碍等中毒症状。脑膜刺激征阳性。毒症状。脑膜刺激征阳性。毒症状。脑膜刺激征阳性。毒症状。脑膜刺激征阳性。 n n脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌n n肺炎链球菌肺炎链球菌肺炎链球菌肺炎链球菌n n流感嗜血杆菌感流感嗜血杆菌感流感嗜血杆菌感流感嗜血杆菌感染染染染n n产单核细胞李斯产单核细胞李斯产单核细胞李斯产单核细胞李斯特菌特菌特菌特菌n nB B B B群链球菌群链球菌群链球菌群链球菌n n大肠埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌
9、大肠埃希菌2024/7/1912结核性脑膜炎常见临床特征结核性脑膜炎常见临床特征及其细菌及其细菌n n结核性脑膜炎结核性脑膜炎结核性脑膜炎结核性脑膜炎起病缓慢，早起病缓慢，早起病缓慢，早起病缓慢，早期有低热、盗汗、食欲不振、期有低热、盗汗、食欲不振、期有低热、盗汗、食欲不振、期有低热、盗汗、食欲不振、恶心、便秘、易激动等症状。恶心、便秘、易激动等症状。恶心、便秘、易激动等症状。恶心、便秘、易激动等症状。12121212周后病情加剧，出现典周后病情加剧，出现典周后病情加剧，出现典周后病情加剧，出现典型的脑膜刺激征。部分患者型的脑膜刺激征。部分患者型的脑膜刺激征。部分患者型的脑膜刺激征。部分患者可
10、出现意识障碍、抽搐、瞳可出现意识障碍、抽搐、瞳可出现意识障碍、抽搐、瞳可出现意识障碍、抽搐、瞳孔改变等。若脑神经受损则孔改变等。若脑神经受损则孔改变等。若脑神经受损则孔改变等。若脑神经受损则可有眼睑下垂、面瘫等。可有眼睑下垂、面瘫等。可有眼睑下垂、面瘫等。可有眼睑下垂、面瘫等。n n结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌2024/7/1913新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎常见临床特征及其细菌常见临床特征及其细菌n n新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎亚急性起病，亚急性起病，亚急性起病，亚急性起病，病初可表现为轻度间歇性头痛，此病初可表现为轻
11、度间歇性头痛，此病初可表现为轻度间歇性头痛，此病初可表现为轻度间歇性头痛，此后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有恶心、喷射性呕吐、多数患者有发恶心、喷射性呕吐、多数患者有发恶心、喷射性呕吐、多数患者有发恶心、喷射性呕吐、多数患者有发热、精神异常。热、精神异常。热、精神异常。热、精神异常。1/31/31/31/3患者有意识障碍，患者有意识障碍，患者有意识障碍，患者有意识障碍，表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。脑膜表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。脑膜表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。脑膜表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。脑膜刺激征明显，常有多颅
12、神经受损的刺激征明显，常有多颅神经受损的刺激征明显，常有多颅神经受损的刺激征明显，常有多颅神经受损的表现，以视神经受累最多。少数患表现，以视神经受累最多。少数患表现，以视神经受累最多。少数患表现，以视神经受累最多。少数患者有脑疝形成最后死亡。者有脑疝形成最后死亡。者有脑疝形成最后死亡。者有脑疝形成最后死亡。n n新生隐球菌新生隐球菌新生隐球菌新生隐球菌2024/7/1914病毒性脑炎常见临床特征病毒性脑炎常见临床特征及其病毒及其病毒n n病毒性脑炎病毒性脑炎病毒性脑炎病毒性脑炎 急性发病，可有上呼吸道感染如头痛、急性发病，可有上呼吸道感染如头痛、急性发病，可有上呼吸道感染如头痛、急性发病，可有
13、上呼吸道感染如头痛、乏力、肌痛等前驱症状。记忆力下降、计算力及乏力、肌痛等前驱症状。记忆力下降、计算力及乏力、肌痛等前驱症状。记忆力下降、计算力及乏力、肌痛等前驱症状。记忆力下降、计算力及定向力下降等智力减退症状。淡漠、易激动、缄定向力下降等智力减退症状。淡漠、易激动、缄定向力下降等智力减退症状。淡漠、易激动、缄定向力下降等智力减退症状。淡漠、易激动、缄默等精神症状。嗜睡、昏睡、甚至昏迷等意识障默等精神症状。嗜睡、昏睡、甚至昏迷等意识障默等精神症状。嗜睡、昏睡、甚至昏迷等意识障默等精神症状。嗜睡、昏睡、甚至昏迷等意识障碍。偏瘫、抽搐、震颤等神经系统局灶症状或体碍。偏瘫、抽搐、震颤等神经系统局灶
14、症状或体碍。偏瘫、抽搐、震颤等神经系统局灶症状或体碍。偏瘫、抽搐、震颤等神经系统局灶症状或体征。征。征。征。n n单纯疱疹病毒、乙型脑炎病毒、柯萨奇病单纯疱疹病毒、乙型脑炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒肠道病毒毒、埃可病毒肠道病毒7070、71 71 腮腺炎病毒、腮腺炎病毒、狂犬病病、毒麻疹病毒、风疹病毒、淋巴狂犬病病、毒麻疹病毒、风疹病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、朊粒细胞性脉络丛脑膜炎病毒、朊粒2024/7/1915慢病毒性脑炎和脑病慢病毒性脑炎和脑病常见临床特征及其病毒常见临床特征及其病毒n n亚急性硬化性全脑炎亚急性硬化性全脑炎亚急性硬化性全脑炎亚急性硬化性全脑炎较为罕见，多见于儿童及少
15、较为罕见，多见于儿童及少较为罕见，多见于儿童及少较为罕见，多见于儿童及少年的神经系统疾病。发病隐匿，根据病程演变及年的神经系统疾病。发病隐匿，根据病程演变及年的神经系统疾病。发病隐匿，根据病程演变及年的神经系统疾病。发病隐匿，根据病程演变及临床特征分为如下四期：行为精神障碍期；运动临床特征分为如下四期：行为精神障碍期；运动临床特征分为如下四期：行为精神障碍期；运动临床特征分为如下四期：行为精神障碍期；运动障碍期；昏迷角弓反张期；大脑皮质功能丧失期障碍期；昏迷角弓反张期；大脑皮质功能丧失期障碍期；昏迷角弓反张期；大脑皮质功能丧失期障碍期；昏迷角弓反张期；大脑皮质功能丧失期n n进行性风疹性全脑炎
16、进行性风疹性全脑炎进行性风疹性全脑炎进行性风疹性全脑炎早期表现为学习成绩下降，早期表现为学习成绩下降，早期表现为学习成绩下降，早期表现为学习成绩下降，反应迟钝，成痴呆状。小脑共济失调。患者无头反应迟钝，成痴呆状。小脑共济失调。患者无头反应迟钝，成痴呆状。小脑共济失调。患者无头反应迟钝，成痴呆状。小脑共济失调。患者无头痛、发热、颈强直等感染的表现。痛、发热、颈强直等感染的表现。痛、发热、颈强直等感染的表现。痛、发热、颈强直等感染的表现。2024/7/1916中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病n n可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病朊病毒朊病毒朊病毒朊病毒疾
17、病，是人和动物共患的一疾病，是人和动物共患的一疾病，是人和动物共患的一疾病，是人和动物共患的一类遗传性类遗传性类遗传性类遗传性、传染性和散发性传染性和散发性传染性和散发性传染性和散发性的中央神经系统退行性脑病，的中央神经系统退行性脑病，的中央神经系统退行性脑病，的中央神经系统退行性脑病，最终可以导致患者死亡，最终可以导致患者死亡，最终可以导致患者死亡，最终可以导致患者死亡，它它它它能在人和动物中进行传染能在人和动物中进行传染能在人和动物中进行传染能在人和动物中进行传染 n n克克克克- - - -雅病雅病雅病雅病潜伏期长，最初临潜伏期长，最初临潜伏期长，最初临潜伏期长，最初临床症状表现在精神和
18、感觉方床症状表现在精神和感觉方床症状表现在精神和感觉方床症状表现在精神和感觉方面，继而出现共济失调，进面，继而出现共济失调，进面，继而出现共济失调，进面，继而出现共济失调，进一步发展为肌肉痉挛并伴有一步发展为肌肉痉挛并伴有一步发展为肌肉痉挛并伴有一步发展为肌肉痉挛并伴有痴呆，最终导致死亡。发病痴呆，最终导致死亡。发病痴呆，最终导致死亡。发病痴呆，最终导致死亡。发病年龄多在年龄多在年龄多在年龄多在50505050岁以上。岁以上。岁以上。岁以上。2024/7/1917中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病n n可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病n n库鲁病库鲁病
19、库鲁病库鲁病起病隐匿，以小脑起病隐匿，以小脑起病隐匿，以小脑起病隐匿，以小脑受损为主。表现为下肢颤受损为主。表现为下肢颤受损为主。表现为下肢颤受损为主。表现为下肢颤抖，行走困难，共济失调抖，行走困难，共济失调抖，行走困难，共济失调抖，行走困难，共济失调等。依病程发展分为三个等。依病程发展分为三个等。依病程发展分为三个等。依病程发展分为三个阶段即可行动期、静坐期阶段即可行动期、静坐期阶段即可行动期、静坐期阶段即可行动期、静坐期和终期。和终期。和终期。和终期。2024/7/1918中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病一般实验室检查一般实验室检查n n诊断中枢神经系统感染的一般实验室检查诊断中枢神经
20、系统感染的一般实验室检查包括包括外周血常规检查外周血常规检查和和脑脊液检查脑脊液检查。其中。其中最重要的就是通过腰穿术采集脑脊液标本最重要的就是通过腰穿术采集脑脊液标本进行的脑脊液检查。正确的腰穿术对脑膜进行的脑脊液检查。正确的腰穿术对脑膜炎患者无任何危险，但若是怀疑患者脑脓炎患者无任何危险，但若是怀疑患者脑脓肿或颅内压增高，则应避免腰椎穿刺。肿或颅内压增高，则应避免腰椎穿刺。2024/7/1919中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病一般实验室检查一般实验室检查n n血常规血常规 白细胞计数白细胞计数明显增高：化脓性感染，且以中性粒细胞为明显增高：化脓性感染，且以中性粒细胞为主，可出现核左移主
21、，可出现核左移正常或略微增高：病毒或结核分枝杆菌感染正常或略微增高：病毒或结核分枝杆菌感染2024/7/1920中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病实验室检查实验室检查n n脑脊液脑脊液一般性状检查一般性状检查细胞计数检查细胞计数检查化学检查化学检查病原生物学检查病原生物学检查2024/7/1921中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病一般实验室检查一般实验室检查n n脑脊液常规检测项目包括：脑脊液常规检测项目包括：脑脊液的外脑脊液的外观检查（颜色、透明度、薄膜及凝块）；观检查（颜色、透明度、薄膜及凝块）；脑脊液有形成分检查；脑脊液有形成分检查；脑脊液细菌直脑脊液细菌直接涂片检查；接涂片检查；脑
22、脊液蛋白定性；脑脊液蛋白定性；脑脊脑脊液蛋白定量；液蛋白定量；脑脊液葡萄糖定量（需同脑脊液葡萄糖定量（需同时比较脑脊液和血清中的葡萄糖水平）；时比较脑脊液和血清中的葡萄糖水平）；脑脊液氯化物测定脑脊液氯化物测定 2024/7/1922不同病原体所致中枢神经系统感染不同病原体所致中枢神经系统感染的早期脑脊液标本检查结果的早期脑脊液标本检查结果2024/7/1923中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病其他其他检查检查n n影像学技术如计算机扫描分析（影像学技术如计算机扫描分析（CTCT）、核）、核磁共振成像（磁共振成像（MRIMRI）已成为对中枢神经系统）已成为对中枢神经系统感染患者进行急性评估的
23、重要手段之一，感染患者进行急性评估的重要手段之一，如果怀疑患者存在占位性脓肿或有导致颅如果怀疑患者存在占位性脓肿或有导致颅内压升高的病因，则应先进行内压升高的病因，则应先进行CTCT或或MRIMRI检查。检查。2024/7/1924中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检查真菌学检查n n（一）（一） 标本采集标本采集n n 采用腰椎穿刺术无菌采集脑脊液标本。用采用腰椎穿刺术无菌采集脑脊液标本。用碘伏进行局部皮肤消毒，在第三、四腰椎碘伏进行局部皮肤消毒，在第三、四腰椎或第四、五腰椎间隙插入带有管芯针的空或第四、五腰椎间隙插入带有管芯针的空针，进针至蛛网膜间隙，拔去管芯针
24、，收针，进针至蛛网膜间隙，拔去管芯针，收集脑脊液集脑脊液5ml5ml10ml10ml，分装于，分装于3 3支无菌小瓶支无菌小瓶中立即送检。取第中立即送检。取第2 2支或最混浊的支或最混浊的1 1支做微支做微生物学检查，做脑脊液培养时应同时采集生物学检查，做脑脊液培养时应同时采集病人血液标本进行血培养。病人血液标本进行血培养。2024/7/1925n n腰椎穿刺法腰椎穿刺法穿刺后先作压力测定穿刺后先作压力测定穿刺后先作压力测定穿刺后先作压力测定u脑脊液采集后分别收集脑脊液采集后分别收集于于3 3个无菌小瓶或无菌试个无菌小瓶或无菌试管中，每瓶管中，每瓶12ml12mlu标本采集后床边接种或标本采集
25、后床边接种或立即送检，存放时间不得立即送检，存放时间不得超过超过1 1小时小时2024/7/1926脑脊液脑脊液n n压力（包括初压和终压测定）压力（包括初压和终压测定）：成人成人成人成人0.69-1.97kPa0.69-1.97kPa，儿童儿童儿童儿童0.69-1.96kPa0.69-1.96kPa，婴儿婴儿婴儿婴儿0.29-0.78kPa0.29-0.78kPan n颜色：无色水样颜色：无色水样n n透明度：透明清晰；透明度：透明清晰； n n凝块或薄膜形成：无；凝块或薄膜形成：无； n n酸碱度（酸碱度（pH）：）：7.357.40； n n相对密度：相对密度：1.0051.009 20
26、24/7/1927脑脊液脑脊液n n颜色颜色颜色颜色： n n红色：脑出血，蛛网膜下腔出血，出血性脑膜炎红色：脑出血，蛛网膜下腔出血，出血性脑膜炎红色：脑出血，蛛网膜下腔出血，出血性脑膜炎红色：脑出血，蛛网膜下腔出血，出血性脑膜炎等。如为穿刺创伤出血，最初数滴为红色，以后等。如为穿刺创伤出血，最初数滴为红色，以后等。如为穿刺创伤出血，最初数滴为红色，以后等。如为穿刺创伤出血，最初数滴为红色，以后逐渐变清。逐渐变清。逐渐变清。逐渐变清。 黄色：陈旧性出血，重症黄疸或胡萝蔔素血症等。黄色：陈旧性出血，重症黄疸或胡萝蔔素血症等。黄色：陈旧性出血，重症黄疸或胡萝蔔素血症等。黄色：陈旧性出血，重症黄疸或
27、胡萝蔔素血症等。当当当当CSFCSFCSFCSF中蛋白含量中蛋白含量中蛋白含量中蛋白含量50mg/dl50mg/dl50mg/dl50mg/dl时，其外观亦呈淡黄时，其外观亦呈淡黄时，其外观亦呈淡黄时，其外观亦呈淡黄色。色。色。色。 白色：化脓性脑膜炎为米汤样，结核性脑膜炎或真白色：化脓性脑膜炎为米汤样，结核性脑膜炎或真白色：化脓性脑膜炎为米汤样，结核性脑膜炎或真白色：化脓性脑膜炎为米汤样，结核性脑膜炎或真菌性脑膜炎为毛玻璃样外观。菌性脑膜炎为毛玻璃样外观。菌性脑膜炎为毛玻璃样外观。菌性脑膜炎为毛玻璃样外观。 褐色或黑色：中枢神经系统黑色素细胞瘤。褐色或黑色：中枢神经系统黑色素细胞瘤。褐色或黑
28、色：中枢神经系统黑色素细胞瘤。褐色或黑色：中枢神经系统黑色素细胞瘤。 n n。 2024/7/1928脑脊液脑脊液n n凝块或薄膜形成：结核性脑膜炎常有薄膜形成，化脓性脑膜炎则易出现凝块。 n n酸碱度（pH）：增高：代谢性或呼吸性碱中毒降低：代谢性或呼吸性酸中毒，脑缺血，缺氧等。 n n相对密度：增高：脑炎、脑膜炎、脑出血、脑寄生虫病、脊髓肿瘤等。n n透明度透明度：浑浊：细菌性脑膜炎，真菌性脑膜炎。：浑浊：细菌性脑膜炎，真菌性脑膜炎。 2024/7/1929脑脊液脑脊液n n(1)(1)(1)(1)无红细胞。无红细胞。无红细胞。无红细胞。 n n(2)(2)白细胞极少，白细胞极少，n n成
29、人：（成人：（0 08 8）10106 6/L/L，n n儿童：（儿童：（1 11515）10106 6/L/L，主要为单个核细胞，淋巴细主要为单个核细胞，淋巴细胞与单核细胞之比为胞与单核细胞之比为7:3. 7:3. 标本采集后应在1h内进行细胞计数。标本放置过久，细胞可能凝集成团或被破坏，影响计数结果。标本必须混匀后方可进行检查，否则会影响计数结果。2024/7/1930脑脊液脑脊液n n蛋白定量：蛋白定量：0.20.20.45g/L0.45g/L；n n葡萄糖：葡萄糖：2.52.54.5mmol/L4.5mmol/L，n n脑脊液血浆葡萄糖比率脑脊液血浆葡萄糖比率0.30.30.90.9；
30、n n氯化物：氯化物：120120130mmol/L130mmol/L。2024/7/1931中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检查真菌学检查n n（一）（一） 标本采集标本采集n n标本采集后应在常温下立即送检，培养脑标本采集后应在常温下立即送检，培养脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应将标本置于应将标本置于3535保温送检。用于常规细保温送检。用于常规细菌检测的脑脊液量应为菌检测的脑脊液量应为1ml1ml或大于或大于1ml1ml；用；用于检测抗酸菌的脑脊液量应为于检测抗酸菌的脑脊液量应为5ml5ml或大于或大于5ml5ml
31、。2024/7/1932中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检查真菌学检查n n正常脑脊液无菌、外观清亮。有时可见血正常脑脊液无菌、外观清亮。有时可见血性脑脊液，可能是因穿刺过程中小血窦受性脑脊液，可能是因穿刺过程中小血窦受损所致，可通过连续收集三管标本，并计损所致，可通过连续收集三管标本，并计数其中的红细胞，以区分数其中的红细胞，以区分“穿刺性出血穿刺性出血（traumatic taptraumatic tap）”与病理性出血。若脑与病理性出血。若脑脊液第脊液第1 1管为红色，第管为红色，第2 2、3 3管红色逐渐变淡，管红色逐渐变淡，红细胞计数依次减少，离心沉淀后
32、上清液红细胞计数依次减少，离心沉淀后上清液透明为穿刺性出血。若脑脊液透明为穿刺性出血。若脑脊液3 3管均呈红色，管均呈红色，红细胞计数无明显差别，离心沉淀后上清红细胞计数无明显差别，离心沉淀后上清液呈淡红色或黄色，则为病理性出血。液呈淡红色或黄色，则为病理性出血。2024/7/1933中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检查真菌学检查2024/7/1934中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n1 1直接涂片检查直接涂片检查n n（1 1）革兰染色）革兰染色 脑脊液混浊或呈脓性者可直脑脊液混浊或呈脓性者可直接涂片，无色
33、透明的脑脊液接涂片，无色透明的脑脊液3000r/min3000r/min离心离心10min10min15min15min，取沉淀物涂片，革兰染色镜，取沉淀物涂片，革兰染色镜检。流行性脑脊髓膜炎患者可取皮肤瘀点渗检。流行性脑脊髓膜炎患者可取皮肤瘀点渗出液涂片检查。若为革兰阴性双球菌，肾形出液涂片检查。若为革兰阴性双球菌，肾形或咖啡豆样，凹面相对，位于白细胞内外，或咖啡豆样，凹面相对，位于白细胞内外，则提示则提示脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌感染；感染；2024/7/1935中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n1 1直接涂片检查直接涂片检查n n若为
34、革兰阳性双球菌，矛头状，宽端相若为革兰阳性双球菌，矛头状，宽端相对，尖端相背，菌体周围有明显荚膜，对，尖端相背，菌体周围有明显荚膜，则提示则提示肺炎链球菌肺炎链球菌感染；若为革兰阴性、感染；若为革兰阴性、多形态，短小球杆状或丝状，可同时做多形态，短小球杆状或丝状，可同时做荚膜肿胀试验，进行快速鉴定荚膜肿胀试验，进行快速鉴定, ,则提示则提示流流感嗜血杆菌感嗜血杆菌感染；若为革兰阳性短小杆感染；若为革兰阳性短小杆菌，菌，V V字形或成双排列，出现于大量单核字形或成双排列，出现于大量单核细胞之间，则提示细胞之间，则提示产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌感染。感染。2024/7/1936中枢神经系
35、统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n涂片染色显微镜检查意义涂片染色显微镜检查意义n标本直接涂片、干燥、固定后染色，或经标本直接涂片、干燥、固定后染色，或经离心浓缩集菌，涂片染色，置光学显微镜离心浓缩集菌，涂片染色，置光学显微镜下观察细菌的形态、染色性、排列与特殊下观察细菌的形态、染色性、排列与特殊结构；结果对病原学诊断具有一定意义，结构；结果对病原学诊断具有一定意义，尤其是无菌体液的直接镜检更具有诊断价尤其是无菌体液的直接镜检更具有诊断价值。值。2024/7/1937脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌2024/7/1938 肺炎链球菌（革兰
36、染色）肺炎链球菌（革兰染色）肺炎链球菌（革兰染色）肺炎链球菌（革兰染色）无乳链球菌无乳链球菌（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）2024/7/1939流感嗜血杆菌脑脊液涂片流感嗜血杆菌脑脊液涂片流感嗜血杆菌脑脊液涂片流感嗜血杆菌脑脊液涂片（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌 （革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）2024/7/1940中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n1 1直接涂片检查直接涂片检查n n根据细菌形态和染色特性可初步提示感染根据细菌形态和染色特性可初步提示
37、感染细菌的种类。细菌的种类。80%80%左右未经治疗的急性细菌左右未经治疗的急性细菌性脑膜炎患者，脑脊液革兰染色可观察到性脑膜炎患者，脑脊液革兰染色可观察到细菌。若患者检查前已接受过抗生素治疗，细菌。若患者检查前已接受过抗生素治疗，则观察到细菌的比例下降为则观察到细菌的比例下降为60%60%。2024/7/1941中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n1 1直接涂片检查直接涂片检查n n（2 2）抗酸染色或金胺）抗酸染色或金胺“O O”染色染色 n n脑脊液标本脑脊液标本4000r/min4000r/min离心离心30min30min，取沉淀
38、，取沉淀物涂片，抗酸染色或金胺物涂片，抗酸染色或金胺“0 0”荧光染色镜荧光染色镜检。镜检时应仔细检查整个涂片或观察至检。镜检时应仔细检查整个涂片或观察至少少100100个视野。若油镜检查，在蓝色背景下个视野。若油镜检查，在蓝色背景下找到红色杆菌或荧光显微镜检查，在黑色找到红色杆菌或荧光显微镜检查，在黑色背景中找到亮黄色菌体，可报告背景中找到亮黄色菌体，可报告“找到抗找到抗酸杆菌酸杆菌”。2024/7/1942中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n（2 2）抗酸染色或金胺）抗酸染色或金胺“O O”染色染色 n n结核性脑膜炎时脑脊液蛋白质含量
39、显著升结核性脑膜炎时脑脊液蛋白质含量显著升高，而革兰染色镜检细菌阴性，但若将脑高，而革兰染色镜检细菌阴性，但若将脑脊液标本进行抗酸染色，则脊液标本进行抗酸染色，则25%25%左右的患者左右的患者呈现抗酸菌阳性。如果取呈现抗酸菌阳性。如果取5ml-10ml5ml-10ml脑脊液，脑脊液，离心，进行快速抗酸染色检查，则可在离心，进行快速抗酸染色检查，则可在80%80%的病例中发现抗酸杆菌。的病例中发现抗酸杆菌。2024/7/1943n n1 1 1 1直接涂片检查直接涂片检查直接涂片检查直接涂片检查n n墨汁染色墨汁染色墨汁染色墨汁染色 脑脊液标本脑脊液标本脑脊液标本脑脊液标本3000r/min3
40、000r/min3000r/min3000r/min离心离心离心离心10min10min10min10min15min15min15min15min，取沉，取沉，取沉，取沉淀物做墨汁负染色，显微镜下见黑色背景中的透亮菌体和淀物做墨汁负染色，显微镜下见黑色背景中的透亮菌体和淀物做墨汁负染色，显微镜下见黑色背景中的透亮菌体和淀物做墨汁负染色，显微镜下见黑色背景中的透亮菌体和宽厚荚膜，有时见出芽，可报告宽厚荚膜，有时见出芽，可报告宽厚荚膜，有时见出芽，可报告宽厚荚膜，有时见出芽，可报告“ “找到新生隐球菌找到新生隐球菌找到新生隐球菌找到新生隐球菌” ”。直接涂片染色不易见假丝酵母菌及曲霉菌的菌丝与孢
41、子。直接涂片染色不易见假丝酵母菌及曲霉菌的菌丝与孢子。直接涂片染色不易见假丝酵母菌及曲霉菌的菌丝与孢子。直接涂片染色不易见假丝酵母菌及曲霉菌的菌丝与孢子。2024/7/1944中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n2 2分离培养分离培养n n（1 1）疑似为化脓性球菌感染者，将血液或）疑似为化脓性球菌感染者，将血液或脑脊液标本先增菌，再接种巧克力平板和脑脊液标本先增菌，再接种巧克力平板和血平板，血平板，5 51010二氧化碳环境，二氧化碳环境，35 35 培培养养1824h1824h，挑取可疑菌落涂片染色镜检，挑取可疑菌落涂片染色镜检，进一步
42、作生化试验、血清学试验等鉴定。进一步作生化试验、血清学试验等鉴定。2024/7/19452024/7/1946Optochin Optochin 敏感试验敏感试验2024/7/1947胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验2024/7/1948肺炎链球菌肺炎链球菌n n血液、脑脊液标本需肉汤培养基增菌培养，血液、脑脊液标本需肉汤培养基增菌培养，接种血平板。需置接种血平板。需置5%5% 10%CO210%CO2环境培养。环境培养。观察菌落性状和溶血特性。观察菌落性状和溶血特性。2024/7/1949肺炎链球菌鉴定肺炎链球菌鉴定n n肺炎链球菌呈肺炎链球菌呈矛头状矛头状，常，常成双成双排列，有荚排列，有荚膜；血
43、平板上形成灰白色、圆形凸起的细膜；血平板上形成灰白色、圆形凸起的细小菌落，培养小菌落，培养48h48h后后菌落呈菌落呈“脐状脐状”凹陷凹陷，有有草绿色溶血环草绿色溶血环，多数菌株分解菊糖，多数菌株分解菊糖，胆胆盐溶解试验和盐溶解试验和optochinoptochin敏感试验阳性敏感试验阳性，籍，籍此可区别肺炎链球菌与草绿色链球菌。此可区别肺炎链球菌与草绿色链球菌。2024/7/1950药物敏感性试验药物敏感性试验n n青霉素是抗链球菌的首选药物，值得注意青霉素是抗链球菌的首选药物，值得注意的是的是耐青霉素的肺炎链球菌耐青霉素的肺炎链球菌(penicillinresistant(penicill
44、inresistant Streptococous Streptococous pneomoniapneomonia，PRSP)PRSP)和草绿色链球菌，若来和草绿色链球菌，若来源于血和脑脊液，则应检测该菌株对头孢源于血和脑脊液，则应检测该菌株对头孢曲松、头孢噻肟和美洛培南的曲松、头孢噻肟和美洛培南的MICMIC以判断敏以判断敏感、中介或耐药。感、中介或耐药。2024/7/19512024/7/19521.1.1.1.与类白喉杆菌与类白喉杆菌与类白喉杆菌与类白喉杆菌 幼龄为革兰阳性，陈旧为革兰阴性幼龄为革兰阳性，陈旧为革兰阴性幼龄为革兰阳性，陈旧为革兰阴性幼龄为革兰阳性，陈旧为革兰阴性 252
45、52525动力阳性而不符合革兰阴性杆菌动力阳性而不符合革兰阴性杆菌动力阳性而不符合革兰阴性杆菌动力阳性而不符合革兰阴性杆菌 2.2.2.2.与与与与B B B B群链球菌群链球菌群链球菌群链球菌 相同：呈短链状排列，相同：呈短链状排列，相同：呈短链状排列，相同：呈短链状排列，37373737无动力，无动力，无动力，无动力，CAMPCAMPCAMPCAMP试验阳性试验阳性试验阳性试验阳性 鉴别：触酶试验鉴别：触酶试验鉴别：触酶试验鉴别：触酶试验- - - -本菌阳性本菌阳性本菌阳性本菌阳性 3.3.3.3.与粪肠球菌与粪肠球菌与粪肠球菌与粪肠球菌 相同：耐盐、耐碱、耐胆汁相同：耐盐、耐碱、耐胆汁
46、相同：耐盐、耐碱、耐胆汁相同：耐盐、耐碱、耐胆汁 鉴别：触酶试验。鉴别：触酶试验。鉴别：触酶试验。鉴别：触酶试验。在在在在 BAPBAP形成狭窄形成狭窄形成狭窄形成狭窄 溶血，在半固体培养提高分离阳性率溶血，在半固体培养提高分离阳性率溶血，在半固体培养提高分离阳性率溶血，在半固体培养提高分离阳性率n n药物敏感性试验药物敏感性试验药物敏感性试验药物敏感性试验n n本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等多种本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等多种本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等多种本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等多种抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄
47、青霉素、多粘菌素抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素B B耐药，首选药物为氨苄青霉素。耐药，首选药物为氨苄青霉素。耐药，首选药物为氨苄青霉素。耐药，首选药物为氨苄青霉素。产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌44冷增菌生长成扩散呈倒松树状冷增菌生长成扩散呈倒松树状冷增菌生长成扩散呈倒松树状冷增菌生长成扩散呈倒松树状，2024/7/1953产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌n n药物敏感性试验药物敏感性试验n n本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素
48、和红霉素等多种抗生素敏感；对磺胺类、和红霉素等多种抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素B B耐药，首耐药，首选药物为氨苄青霉素。选药物为氨苄青霉素。2024/7/1954脑膜炎奈瑟菌革兰染色脑膜炎奈瑟菌革兰染色2024/7/1955脑膜炎奈瑟菌透射电镜图脑膜炎奈瑟菌透射电镜图2024/7/1956糖发酵试验糖发酵试验糖发酵试验糖发酵试验（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、阴性对照）（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、阴性对照）（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、阴性对照）（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、阴性对照）返回返回2024/7/1957中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌
49、、真菌学检验方法真菌学检验方法脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌 脑脊液先经血清肉汤培养基增菌后脑脊液先经血清肉汤培养基增菌后, ,再经巧再经巧克力平板划线分离克力平板划线分离. .平板置于平板置于5%CO25%CO2环境中环境中3718-24h3718-24h后可形成直径后可形成直径1-2mm,1-2mm,圆形圆形, ,凸起凸起, ,光滑光滑, ,湿润湿润, ,灰褐色露珠状菌落灰褐色露珠状菌落. .挑取可疑菌挑取可疑菌落涂片染色检查落涂片染色检查, ,并进一步作生化反应等实并进一步作生化反应等实验予以鉴定。验予以鉴定。2024/7/1958中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学
50、检验方法真菌学检验方法脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌用已知脑膜炎奈瑟菌多价诊断血清与待检菌作直用已知脑膜炎奈瑟菌多价诊断血清与待检菌作直接凝集试验接凝集试验, ,再用单价血清鉴别型别再用单价血清鉴别型别; ; 通过氧化通过氧化酶试验酶试验, ,触酶试验及糖类发酵等生化反应作出鉴定触酶试验及糖类发酵等生化反应作出鉴定. .氧化酶和触酶阳性，脑膜炎奈瑟菌分解葡萄糖、氧化酶和触酶阳性，脑膜炎奈瑟菌分解葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气；麦芽糖，产酸不产气； 淋病奈瑟菌只分解葡萄糖，淋病奈瑟菌只分解葡萄糖，产酸不产气。产酸不产气。2024/7/19592024/7/1960B B群链球菌群链球菌- -无乳链球菌无乳
51、链球菌（S. agalactiaeS. agalactiae），），n n主要引起新生儿败血症和脑膜炎。主要引起新生儿败血症和脑膜炎。n n菌的主要特征是：革兰阳性球菌，链状排列菌的主要特征是：革兰阳性球菌，链状排列n n乙型（乙型（或透明）溶血：菌落周围有或透明）溶血：菌落周围有2 24mm4mm宽的宽的透明溶血环透明溶血环n nCAMPCAMP试验试验 无乳链球菌的初步鉴定试验无乳链球菌的初步鉴定试验n n无乳链球菌能产生无乳链球菌能产生CAMPCAMP因子，它可促进金黄色葡因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。试验时
52、先将金黄色葡萄球菌试验时先将金黄色葡萄球菌(ATCC25923)(ATCC25923)，沿直径，沿直径划线接种，再沿该线垂直方向接种无乳链球菌，划线接种，再沿该线垂直方向接种无乳链球菌，两线不得相接，间隔约两线不得相接，间隔约3 34mm4mm。3535孵育过夜，孵育过夜，两种划线交界处出现箭头状溶血，即为阳性反应。两种划线交界处出现箭头状溶血，即为阳性反应。 2024/7/1961流感嗜血杆菌菌落特征（巧克力琼脂）流感嗜血杆菌菌落特征（巧克力琼脂）流感嗜血杆菌菌落特征（巧克力琼脂）流感嗜血杆菌菌落特征（巧克力琼脂）2024/7/1962流感嗜血杆菌卫星现象（血平板）流感嗜血杆菌卫星现象（血平
53、板）流感嗜血杆菌卫星现象（血平板）流感嗜血杆菌卫星现象（血平板） 2024/7/1963流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌X X因子和因子和因子和因子和V V因子需求试验因子需求试验因子需求试验因子需求试验 2024/7/19642024/7/1965中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n 2 2分离培养分离培养n n（2 2）疑似为）疑似为嗜血杆菌感染嗜血杆菌感染者，将脑脊液标者，将脑脊液标本接种巧克力平板和血平板，本接种巧克力平板和血平板，5 51010二二氧化碳环境，氧化碳环境，35 35 培养培养18-24h18-24h
54、，根据菌落，根据菌落形态、菌体形态及各种嗜血杆菌对生长因形态、菌体形态及各种嗜血杆菌对生长因子的不同需求，进一步作生化试验、血清子的不同需求，进一步作生化试验、血清学试验等鉴定。（详见第学试验等鉴定。（详见第2727章）章）根据菌落特根据菌落特征征, ,菌体形态菌体形态, ,溶血情况溶血情况, ,卫星试验卫星试验, , 和和因因子需求试验定种。子需求试验定种。2024/7/1966嗜血杆菌卫星现象嗜血杆菌卫星现象n n嗜血杆菌在巧克力平板上经35培养2448h 后形成的菌落小而透明，有荚膜的菌株形成光滑的菌落，比同样培养的无荚膜的菌落大一些。溶血嗜血杆菌和副溶血嗜血杆菌产生溶血。将流感嗜血杆菌
55、与金黄色葡萄球菌共同培养时，因金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，靠近金黄色葡萄球菌周围的流感嗜血杆菌菌落较大，距离越远的菌落越小，这种现象称为卫星现象 2024/7/1967药物敏感性试验药物敏感性试验n n药敏试验必须使用嗜血杆菌专用药敏培养基-HTMn n对于脑膜炎等危及生命的感染常规报告氨苄西林、三代头孢菌素、氯霉素及美洛培南的测试结果 2024/7/1968药物敏感性试验药物敏感性试验n n流感嗜血杆菌对青霉素、氨苄西林、氯霉素的耐药性非常普遍，通常的耐药监测只需检测-内酰胺酶及氯霉素的耐药性即可，不需检测其他抗生素敏感性。-内酰胺酶检测阳性提示流感嗜血杆菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林
56、均耐药，主要机制是产生了TEM型-内酰胺酶。若-内酰胺酶阴性则临床治疗首选氨苄西林、阿莫西林；次选磺胺及增效剂（TMP-SMZ）、头孢菌素、红霉素及氨曲南。2024/7/1969 一类细长，略带弯曲，呈分枝状生长细菌一类细长，略带弯曲，呈分枝状生长细菌n n抗酸染色阳性抗酸染色阳性n n革兰染色阳性，无芽胞、无荚膜革兰染色阳性，无芽胞、无荚膜n n营养要求较高，常用罗琴培养基营养要求较高，常用罗琴培养基n n生长缓慢，生长缓慢，n n2828周后方可见菌落周后方可见菌落n nG+C mol%G+C mol%为为62%70%62%70%2024/7/1970 结核分枝杆菌金胺结核分枝杆菌金胺结核
57、分枝杆菌金胺结核分枝杆菌金胺“ “OO” ”染色染色染色染色 2024/7/19712024/7/1972中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n 2 2分离培养分离培养n n（3 3）疑似为结核性脑膜炎患者将脑脊液标）疑似为结核性脑膜炎患者将脑脊液标本接种罗氏培养基本接种罗氏培养基5 51010二氧化碳环境，二氧化碳环境，35 35 培养，第一周每日观察一次，后每周培养，第一周每日观察一次，后每周观察一次，直至第八周。根据菌落特征，观察一次，直至第八周。根据菌落特征，进一步作生化检测、免疫学检测及核酸检进一步作生化检测、免疫学检测及核酸检测。
58、结核分枝杆菌生长缓慢，培养时间长，测。结核分枝杆菌生长缓慢，培养时间长，若观察若观察6 6周周88周仍无菌落生长，可报告阴性。周仍无菌落生长，可报告阴性。2024/7/1973中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n 2 2分离培养分离培养结核分枝杆菌结核分枝杆菌:将经中和集菌材料接种于罗氏培将经中和集菌材料接种于罗氏培养基养基,一般需一般需24周长成肉眼可见的落菌。菌周长成肉眼可见的落菌。菌落表面干燥，粗糙，隆起，呈颗粒状，菜花状，落表面干燥，粗糙，隆起，呈颗粒状，菜花状，乳白色或淡黄色，不透明。乳白色或淡黄色，不透明。2024/7/1974
59、中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n 2分离培养分离培养n n（4）其他细菌感染依照常规细菌学鉴定程）其他细菌感染依照常规细菌学鉴定程序，选择接种增菌培养基、血平板以及麦序，选择接种增菌培养基、血平板以及麦康凯平板，观察菌落形态并进行生化鉴定康凯平板，观察菌落形态并进行生化鉴定和血清学试验。和血清学试验。2024/7/19752024/7/19762024/7/1977新生隐球菌菌落新生隐球菌菌落2024/7/1978中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n 2 2分离培养分离培养n n（4
60、 4）疑似真菌感染，可将脑脊液接种于含）疑似真菌感染，可将脑脊液接种于含抗生素的沙氏培养基及血琼脂培养基上，抗生素的沙氏培养基及血琼脂培养基上，分别在室温、分别在室温、3535培养培养2323天，观察菌落特天，观察菌落特点，进一步鉴定可做生化试验、动物试验点，进一步鉴定可做生化试验、动物试验等。等。n n非选择性增菌培养基有利于苛养菌的生长。非选择性增菌培养基有利于苛养菌的生长。同时应做血培养，以使那些无法采集脑脊同时应做血培养，以使那些无法采集脑脊液标本的患者，通过血培养检出病原菌。液标本的患者，通过血培养检出病原菌。 2024/7/1979中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的
61、细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n2 2分离培养分离培养n n隐球菌：经隐球菌：经0.45m滤膜膜过滤，真菌可留在，真菌可留在滤膜上，直接将膜上，直接将滤膜种于培养基上膜种于培养基上25天天。隐球球菌的菌落表面光滑，粘性，奶油色至黄棕色，菌的菌落表面光滑，粘性，奶油色至黄棕色，在在CACA(咖啡酸玉米咖啡酸玉米琼脂脂) 培养基上呈棕色，培养基上呈棕色，边缘整整齐，尿素，尿素酶试验阳性。阳性。n n念珠菌念珠菌 :沙氏培养基沙氏培养基 n n曲霉菌曲霉菌:察氏琼脂察氏琼脂n n毛霉菌毛霉菌:不含放线菌酮的葡萄糖蛋白胨琼脂不含放线菌酮的葡萄糖蛋白胨琼脂2024/7/1980中枢神经系统感染标
62、本的中枢神经系统感染标本的病毒学检查病毒学检查n n（一） 标本采集n n依临床资料和有关资料判断可能感染的病毒，并以此决定采集何种标本为宜。如病毒性脑膜炎和脑炎，一般多采集脑脊液；如疑似单纯疱疹病毒感染，宜采集脑组织标本；虫媒病毒感染应采集血液和脑组织；肠道病毒或腺病毒感染应采集粪便和咽拭子；麻疹病毒和风疹病毒感染应采集咽拭子。脑脊液标本应低温保存，迅速送检。2024/7/1981中枢神经系统感染标本的中枢神经系统感染标本的病毒学检查病毒学检查n n（二）检测方法二）检测方法n n神经系统病毒感染实验室诊断方法包括神经系统病毒感染实验室诊断方法包括病毒病毒的分离与培养、病毒的鉴定、血清学试验
63、、的分离与培养、病毒的鉴定、血清学试验、核酸分子杂交以及核酸扩增技术核酸分子杂交以及核酸扩增技术等等 2024/7/19822024/7/19832024/7/19842024/7/19852024/7/19862024/7/19872024/7/1988脊髓灰质炎病毒电镜图脊髓灰质炎病毒电镜图 柯萨奇病毒电镜图柯萨奇病毒电镜图 2024/7/19892024/7/1990中枢神经系统感染标本的中枢神经系统感染标本的病毒学检查病毒学检查n n1 1直接显微镜检查直接显微镜检查n n（1 1）光镜）光镜 病毒感染敏感性细胞后，其形病毒感染敏感性细胞后，其形态学变化用光镜检查不染色即可见到。依态学
64、变化用光镜检查不染色即可见到。依病毒所致细胞病变的特征判断病毒的种类。病毒所致细胞病变的特征判断病毒的种类。n n（2 2）电镜和免疫电镜）电镜和免疫电镜 电镜可看到病毒的电镜可看到病毒的形态，适用于鉴定含有高滴度病毒样品以形态，适用于鉴定含有高滴度病毒样品以及尚不能在细胞培养中增殖的病毒。及尚不能在细胞培养中增殖的病毒。2024/7/1991中枢神经系统感染标本的中枢神经系统感染标本的病毒学检查病毒学检查n n分离培养分离培养 n n培养出病毒可确诊，但此项检测费时、费培养出病毒可确诊，但此项检测费时、费力、要求技术条件高，医院实验室很少开力、要求技术条件高，医院实验室很少开展。常用的病毒分
65、离方法包括动物接种、展。常用的病毒分离方法包括动物接种、鸡胚培养以及组织细胞培养。目前组织细鸡胚培养以及组织细胞培养。目前组织细胞培养已用于多种病毒分离，故前两种方胞培养已用于多种病毒分离，故前两种方法较为少用。法较为少用。2024/7/1992n n乙脑病毒乙脑病毒: :从脑脊液中分离病毒，以从脑脊液中分离病毒，以C6/36C6/36细细胞培养。结果以抗乙脑病毒单克隆抗体免疫胞培养。结果以抗乙脑病毒单克隆抗体免疫萤光检测。萤光检测。n n肠道病毒肠道病毒: :以原代猴肾细胞培养，根据以原代猴肾细胞培养，根据CPE(CPE(致致细胞病变效应）情况收集病毒液进行血清中细胞病变效应）情况收集病毒液
66、进行血清中和试验来定型分类。和试验来定型分类。n n单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒: :接种易感细胞红培养接种易感细胞红培养1212天，天，出现细胞肿胀、变圆、相互融合等病变，可出现细胞肿胀、变圆、相互融合等病变，可作初步诊断。作初步诊断。2024/7/1993中枢神经系统感染标本的中枢神经系统感染标本的病毒学检查病毒学检查n n3. 3. 血清学检测血清学检测 临床上常用补体结合试验、间接临床上常用补体结合试验、间接免疫荧光试验、中和试验、放射免疫法、酶联免免疫荧光试验、中和试验、放射免疫法、酶联免疫吸附法、间接血凝试验以及血细胞凝集抑制试疫吸附法、间接血凝试验以及血细胞凝集抑制试验。验。4. 4
67、. 病理检查病理检查 可对脑组织标本进行培养、病理学可对脑组织标本进行培养、病理学及电镜检查。如有条件还应做免疫荧光或免疫过及电镜检查。如有条件还应做免疫荧光或免疫过氧化物酶染色检查。氧化物酶染色检查。n n5.5.脑脊液病毒脑脊液病毒DNADNA检测检测 用基因扩增技术检测脑脊用基因扩增技术检测脑脊液中各种病毒核酸，有极高的敏感性和特异性，液中各种病毒核酸，有极高的敏感性和特异性，可用于早期诊断。可用于早期诊断。2024/7/1994n n病毒抗原病毒抗原n n乙脑病毒乙脑病毒：采用反向间接血凝法：采用反向间接血凝法(IRHT)(IRHT)测早期脑脊测早期脑脊液中的抗原，阳性率为液中的抗原，
68、阳性率为66.7%66.7%，本方法灵敏，简便，本方法灵敏，简便，快速，不需特殊设备。用快速，不需特殊设备。用McAbMcAb的反向被动血凝法测的反向被动血凝法测急性期血清中乙脑病毒抗原阳性率急性期血清中乙脑病毒抗原阳性率71.5%71.5%，是目前较，是目前较好的快速诊断方法。好的快速诊断方法。n n单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒:IFA,EIA:IFA,EIA2024/7/1995乙脑病毒抗体测定抗体测定(1)(1)(1)(1)特异性特异性特异性特异性IgMIgMIgMIgM抗体测定：抗体测定：抗体测定：抗体测定：免疫荧光技术：用间接免疫荧光法测乙脑免疫荧光技术：用间接免疫荧光法测乙脑免疫荧光技
69、术：用间接免疫荧光法测乙脑免疫荧光技术：用间接免疫荧光法测乙脑特异性特异性特异性特异性IgMIgMIgMIgM抗体，阳性率高，可达抗体，阳性率高，可达抗体，阳性率高，可达抗体，阳性率高，可达97%97%97%97%，有快速敏，有快速敏，有快速敏，有快速敏感的特点。感的特点。感的特点。感的特点。捕获法捕获法捕获法捕获法ELISA(MAC-ELISA)ELISA(MAC-ELISA)ELISA(MAC-ELISA)ELISA(MAC-ELISA)：近年采用：近年采用：近年采用：近年采用MAC-MAC-MAC-MAC-ELISAELISAELISAELISA法检测乙脑特异性法检测乙脑特异性法检测乙脑
70、特异性法检测乙脑特异性IgMIgMIgMIgM具有较强的敏感性与具有较强的敏感性与具有较强的敏感性与具有较强的敏感性与特异性，阳性率为特异性，阳性率为特异性，阳性率为特异性，阳性率为74.4%74.4%74.4%74.4%，其中在病程第，其中在病程第，其中在病程第，其中在病程第4 4 4 4天出现天出现天出现天出现阳性者为阳性者为阳性者为阳性者为93%93%93%93%，可用于早期诊断。，可用于早期诊断。，可用于早期诊断。，可用于早期诊断。ABC-ELISAABC-ELISAABC-ELISAABC-ELISA：检测乙脑特异性：检测乙脑特异性：检测乙脑特异性：检测乙脑特异性IgMIgMIgMI
71、gM抗体敏感，抗体敏感，抗体敏感，抗体敏感，阳性率高，可达到阳性率高，可达到阳性率高，可达到阳性率高，可达到75.3%75.3%75.3%75.3%，用于早期诊断。，用于早期诊断。，用于早期诊断。，用于早期诊断。2024/7/1996乙脑病毒抗体测定乙脑病毒抗体测定(2)血凝抑制试验：血凝抑制抗体于病程第5天出现，第2周达高峰，可维持1年以上，血凝抑制试验的阳性率可达81.1%，高于补体结合试验，但有时出现假阳性，是由于乙脑病毒的血凝素抗原与同属病毒如登革热及黄热病病毒等有弱的交叉反应，故双份血清效价呈4倍以上升高或单份效价达180以上可作诊断依据，此法操作简便，可应用于临床诊断及流行病学检查
72、。 (3)补体结合试验 (4)中和试验：2024/7/1997单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒ELISAELISAn n双份脑脊液做双份脑脊液做双份脑脊液做双份脑脊液做HSVHSVHSVHSV抗体的动态测定，发现脑抗体的动态测定，发现脑抗体的动态测定，发现脑抗体的动态测定，发现脑脊液抗体有升高趋势，滴度达脊液抗体有升高趋势，滴度达脊液抗体有升高趋势，滴度达脊液抗体有升高趋势，滴度达1 1 1 1：80808080以上，以上，以上，以上，血与脑脊液抗体比血与脑脊液抗体比血与脑脊液抗体比血与脑脊液抗体比40404040，双份脑脊液单纯疱，双份脑脊液单纯疱，双份脑脊液单纯疱，双份脑脊液单纯疱疹病毒抗体滴定度
73、增高达倍以上；疹病毒抗体滴定度增高达倍以上；疹病毒抗体滴定度增高达倍以上；疹病毒抗体滴定度增高达倍以上；n n标本中标本中标本中标本中HSVHSVHSVHSV1 1 1 1的的的的IgMIgMIgMIgM抗体阳性者有诊断意义。抗体阳性者有诊断意义。抗体阳性者有诊断意义。抗体阳性者有诊断意义。2024/7/1998病原体核酸检测病原体核酸检测技术： PCR和DNA探针杂交临床意义： 适用于临床标本中尚不能分离培养或很难分离培养的病原微生物，如病毒的检测优点： 高度的特异性 很高的敏感性 检测范围广泛 快速2024/7/1999病原体核酸检测病原体核酸检测n n1.1.脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌:P
74、CR,:PCR,用于检测病人脑脊液中存在用于检测病人脑脊液中存在的脑膜炎奈瑟菌的脑膜炎奈瑟菌DNA,DNA,特异性与阳性率均高于其他特异性与阳性率均高于其他方法。方法。n n2.2.结核分枝杆菌：操作中需注意实验器材的污染结核分枝杆菌：操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。又细菌问题，以免出现假阳性。又细菌L L型由于缺壁并有型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出细胞膜破裂释出DNADNA，以致造成，以致造成PCRPCR假阴性。假阴性。n n3.3.单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒:PCR:PCR 乙脑病毒、肠道病毒乙
75、脑病毒、肠道病毒:RT-PCR:RT-PCR 2024/7/19100脑膜炎奈瑟菌脑膜炎脑膜炎奈瑟菌脑膜炎的实验诊断的实验诊断n n皮肤瘀点标本涂片，检出率较高，可达皮肤瘀点标本涂片，检出率较高，可达80%80%以上；以上；血液培养在败血症期、爆发休血液培养在败血症期、爆发休克型和慢性败血症型脑膜炎中，检出阳性克型和慢性败血症型脑膜炎中，检出阳性率较高，是本病诊断的重要手段；率较高，是本病诊断的重要手段；用免用免疫学方法，如疫学方法，如ELISAELISA，对流免疫电泳等，检，对流免疫电泳等，检测血液、测血液、CSFCSF以及尿液中脑膜炎奈瑟菌抗原，以及尿液中脑膜炎奈瑟菌抗原，阳性率约为阳性率
76、约为70%70%。2024/7/19101肺炎链球菌脑膜炎肺炎链球菌脑膜炎的实验诊断的实验诊断n n脑脊液中有大量脓细胞；多数病例涂片可脑脊液中有大量脓细胞；多数病例涂片可见革兰阳性双球菌。患者见革兰阳性双球菌。患者CSFCSF对流免疫电泳对流免疫电泳阳性率可达阳性率可达79%79%；乳胶凝集试验的阳性率为；乳胶凝集试验的阳性率为90%90%。2024/7/19102流血嗜血杆菌脑膜炎流血嗜血杆菌脑膜炎的实验诊断的实验诊断n nCSFCSF沉渣涂片和培养是诊断本病的主要依据。沉渣涂片和培养是诊断本病的主要依据。涂片可见革兰阴性球杆菌或短小杆菌，阳涂片可见革兰阴性球杆菌或短小杆菌，阳性率可达性率
77、可达80%80%，应与肺炎链球菌鉴别。可应，应与肺炎链球菌鉴别。可应用酶联免疫吸附试验等免疫学方法检测用酶联免疫吸附试验等免疫学方法检测CSFCSF中流血嗜血杆菌荚膜多糖抗原，从而迅速中流血嗜血杆菌荚膜多糖抗原，从而迅速做出病原学诊断。做出病原学诊断。2024/7/19103结核性脑膜炎结核性脑膜炎的实验诊断的实验诊断n n脑脊液离心浓缩后涂片抗酸染色，镜检若脑脊液离心浓缩后涂片抗酸染色，镜检若见抗酸杆菌可确诊；培养阳性亦可确诊，见抗酸杆菌可确诊；培养阳性亦可确诊，进一步做药敏试验可指导临床合理治疗。进一步做药敏试验可指导临床合理治疗。脑脊液结核抗体阳性具有诊断价值。脑脊液结核抗体阳性具有诊断
78、价值。2024/7/19104新生隐球菌脑膜炎新生隐球菌脑膜炎的实验诊断的实验诊断n nCSFCSF涂片用印度墨汁染色较易发现新生隐球涂片用印度墨汁染色较易发现新生隐球菌，只有在菌，只有在CSFCSF或脑组织标本中检出新生隐或脑组织标本中检出新生隐球菌才可确诊为新生隐球菌脑膜炎。但球菌才可确诊为新生隐球菌脑膜炎。但CSFCSF检查并非每次均能检出该菌，因此需多次检查并非每次均能检出该菌，因此需多次反复检查。反复检查。CSFCSF培养培养210210天可有新生隐球菌天可有新生隐球菌生长。新生隐球菌荚膜多糖抗体、抗原检生长。新生隐球菌荚膜多糖抗体、抗原检测阳性有助于诊断，但需要注意测阳性有助于诊断
79、，但需要注意CSFCSF乳胶凝乳胶凝集试验法中集试验法中的假阳性问题。的假阳性问题。2024/7/19105隐球菌隐球菌 深部感染真菌检验深部感染真菌检验n n6.6.6.6.抗原检测抗原检测抗原检测抗原检测 利用单克隆抗体，直接或通过乳胶利用单克隆抗体，直接或通过乳胶利用单克隆抗体，直接或通过乳胶利用单克隆抗体，直接或通过乳胶凝集试验、凝集试验、凝集试验、凝集试验、ELISAELISAELISAELISA等免疫学方法检测新生隐球菌荚等免疫学方法检测新生隐球菌荚等免疫学方法检测新生隐球菌荚等免疫学方法检测新生隐球菌荚膜多糖特异性抗原，已成为临床的常规诊断方法，膜多糖特异性抗原，已成为临床的常规
80、诊断方法，膜多糖特异性抗原，已成为临床的常规诊断方法，膜多糖特异性抗原，已成为临床的常规诊断方法，其中以乳胶凝集试验最为常用。其中以乳胶凝集试验最为常用。其中以乳胶凝集试验最为常用。其中以乳胶凝集试验最为常用。2024/7/19106脑曲霉病脑曲霉病的实验诊断的实验诊断n nCSFCSF涂片染色不易发现曲霉菌菌丝及孢子，涂片染色不易发现曲霉菌菌丝及孢子，但培养可见黄绿色毛状菌落生长。由于该但培养可见黄绿色毛状菌落生长。由于该菌为条件致病菌，故必须经多次培养阳性菌为条件致病菌，故必须经多次培养阳性并结合临床表现、脑组织活检或颅脑手术并结合临床表现、脑组织活检或颅脑手术后病理检查，于病理组织中找到
81、曲霉菌才后病理检查，于病理组织中找到曲霉菌才能确诊本病。能确诊本病。2024/7/19107神经梅毒神经梅毒的实验诊断的实验诊断n n主要依据脑脊液常规检查及脑脊液的梅毒主要依据脑脊液常规检查及脑脊液的梅毒抗体检查试验结果。脑脊液抗体检查试验结果。脑脊液VDRLVDRL检查阳性、检查阳性、脑脊液脑脊液FTA-ABSFTA-ABS阳性、脑脊液梅毒特异性阳性、脑脊液梅毒特异性 IgGIgG增高有助于诊断。增高有助于诊断。2024/7/19108单纯疱疹病毒性脑炎（单纯疱疹病毒性脑炎（HSVEHSVE）的实验诊断的实验诊断n n因HSV引起的脑炎难以诊断，所以脑组织的活检是惟一有效的方法，在脑组织活
82、检标本中可发现病毒或嗜酸性包涵体。另外，为了缩短检测时间，尽快确诊病原体，建立了一些快速诊断检测，目前常用的是免疫荧光染色法。若给予及时的治疗，HSV引起的脑炎会预后良好。值得注意的是，在患者脑脊液中发现IgG，可诊断为HSV性脑炎，但由于IgG的产生需要几周的时间，因此，对于病毒的早期诊断和治疗其意义不大。”2024/7/19109流行性乙型脑炎流行性乙型脑炎的实验诊断的实验诊断n n病程第一周内死亡病例的脑组织中可分离到病病程第一周内死亡病例的脑组织中可分离到病毒，但脑脊液和血中不易分离到病毒；毒，但脑脊液和血中不易分离到病毒；乙脑病乙脑病毒抗原检测，包括免疫荧光法，毒抗原检测，包括免疫荧
83、光法，ELISAELISA等，用于发等，用于发病初期患者血液和病初期患者血液和CSFCSF中乙脑病毒抗原检测，具有中乙脑病毒抗原检测，具有早期诊断的意义；早期诊断的意义；在诊断流行性乙型脑炎中多在诊断流行性乙型脑炎中多种血清学试验方法具有一定的诊断价值：补体结种血清学试验方法具有一定的诊断价值：补体结合试验可作为回顾性诊断；中和试验可用于人群合试验可作为回顾性诊断；中和试验可用于人群免疫水平的流行病学调查和对新分离病毒的鉴定；免疫水平的流行病学调查和对新分离病毒的鉴定；特异性特异性IgMIgM抗体检测可用于乙脑的早期诊断。抗体检测可用于乙脑的早期诊断。2024/7/19110肠道病毒脑炎、脑膜
84、炎肠道病毒脑炎、脑膜炎的实验诊断的实验诊断n n用中和试验可确定病毒分离株的特性。埃可病毒可从粪便、咽拭子以及CSF中获得，用人或猴肾细胞分离病毒，应用中和试验或血细胞凝集抑制试验进行病毒分型。肠道病毒70、71感染神经系统后，难以分离，只有依靠血清学试验方法进行诊断。2024/7/19111淋巴细胞脉络丛脑膜炎淋巴细胞脉络丛脑膜炎的实验诊断的实验诊断n n通过通过CSFCSF培养、动物接种、免疫测定和血清培养、动物接种、免疫测定和血清学技术确诊本病。小鼠脑内接种标本分离学技术确诊本病。小鼠脑内接种标本分离LCMVLCMV的阳性率较高。以细胞培养物做免疫的阳性率较高。以细胞培养物做免疫荧光试验
85、对早期诊断本病有帮助。荧光试验对早期诊断本病有帮助。 2024/7/19112狂犬病病毒脑炎狂犬病病毒脑炎的实验诊断的实验诊断 n n（1 1 1 1）抗原检测和病毒分离）抗原检测和病毒分离）抗原检测和病毒分离）抗原检测和病毒分离 直接荧光抗体法直接荧光抗体法直接荧光抗体法直接荧光抗体法（DFADFADFADFA），用于检测脑组织中狂犬病抗原，本法是），用于检测脑组织中狂犬病抗原，本法是），用于检测脑组织中狂犬病抗原，本法是），用于检测脑组织中狂犬病抗原，本法是优先选择的狂犬病诊断方法，灵敏度高、特异性优先选择的狂犬病诊断方法，灵敏度高、特异性优先选择的狂犬病诊断方法，灵敏度高、特异性优先选择
86、的狂犬病诊断方法，灵敏度高、特异性好，并具有费用低、速度快、易操作的优点；好，并具有费用低、速度快、易操作的优点；好，并具有费用低、速度快、易操作的优点；好，并具有费用低、速度快、易操作的优点；小鼠接种分离病毒，接种的小鼠出现临床症状或小鼠接种分离病毒，接种的小鼠出现临床症状或小鼠接种分离病毒，接种的小鼠出现临床症状或小鼠接种分离病毒，接种的小鼠出现临床症状或死亡只是钱，即可在大脑中通过死亡只是钱，即可在大脑中通过死亡只是钱，即可在大脑中通过死亡只是钱，即可在大脑中通过DFADFADFADFA试验检测到病试验检测到病试验检测到病试验检测到病毒，如果接种的小鼠很多，接种后每日检测大脑，毒，如果接
87、种的小鼠很多，接种后每日检测大脑，毒，如果接种的小鼠很多，接种后每日检测大脑，毒，如果接种的小鼠很多，接种后每日检测大脑，则可做出早期诊断；则可做出早期诊断；则可做出早期诊断；则可做出早期诊断；组织学和（或）电镜检测组织学和（或）电镜检测组织学和（或）电镜检测组织学和（或）电镜检测NegriNegriNegriNegri小，本法虽具有快速、廉价和特异的优点，小，本法虽具有快速、廉价和特异的优点，小，本法虽具有快速、廉价和特异的优点，小，本法虽具有快速、廉价和特异的优点，但仅能检出但仅能检出但仅能检出但仅能检出5080%DFA5080%DFA5080%DFA5080%DFA阳性的标本，由于该法林
88、敏阳性的标本，由于该法林敏阳性的标本，由于该法林敏阳性的标本，由于该法林敏度不高，限制了它的使用。度不高，限制了它的使用。度不高，限制了它的使用。度不高，限制了它的使用。2024/7/19113狂犬病病毒脑炎狂犬病病毒脑炎的实验诊断的实验诊断 n n（2 2）抗体检测）抗体检测 狂犬病病毒抗体检测方法狂犬病病毒抗体检测方法的灵敏度和特异度有较大的差异。国际上的灵敏度和特异度有较大的差异。国际上推荐巴斯德研究所专门生产检测狂犬病病推荐巴斯德研究所专门生产检测狂犬病病毒抗糖蛋白抗体试剂盒。抗体检测多用于毒抗糖蛋白抗体试剂盒。抗体检测多用于流行病学调查，也可证实狂犬病诊断。然流行病学调查，也可证实狂
89、犬病诊断。然而其诊断意义有限，因感染者抗体只能在而其诊断意义有限，因感染者抗体只能在临床症状出现后才能检测到。临床症状出现后才能检测到。2024/7/19114亚急性硬化性全脑炎亚急性硬化性全脑炎的实验诊断的实验诊断n n脑组织活检可找到核内嗜酸性包涵体，包脑组织活检可找到核内嗜酸性包涵体，包涵体周围有一晕圈谓之涵体周围有一晕圈谓之Cowdry ACowdry A型包涵体，型包涵体，其结果呈小管状和小球状结构，小球状的其结果呈小管状和小球状结构，小球状的病毒粒子偶尔也见于细胞浆内。病毒分离病毒粒子偶尔也见于细胞浆内。病毒分离可采用易感的可采用易感的HelaHela细胞或绿猴肾细胞或绿猴肾C-1
90、C-1细胞协细胞协同培养获得麻疹病毒；荧光素标记抗体方同培养获得麻疹病毒；荧光素标记抗体方法检测检查显示麻疹抗原存在。法检测检查显示麻疹抗原存在。2024/7/19115进行性多灶性白质脑病进行性多灶性白质脑病（PMLPML）的实验诊断的实验诊断n n脑组织活检是诊断脑组织活检是诊断PMLPML唯一准确的确诊方法。唯一准确的确诊方法。电镜下在病变的少突胶质细胞的核内可见电镜下在病变的少突胶质细胞的核内可见病毒颗粒。组织标本还可接种到胚胎脑组病毒颗粒。组织标本还可接种到胚胎脑组织中进行病毒培养分离。织中进行病毒培养分离。2024/7/19116 朊粒朊粒感染的实验诊断感染的实验诊断 n n免疫蛋
91、白印迹法、免疫组织化学法、酶联免疫蛋白印迹法、免疫组织化学法、酶联免疫吸附试验以及基因序列分析。特异性免疫吸附试验以及基因序列分析。特异性诊断抗体可有效区分诊断抗体可有效区分PrPscPrPsc和和PrPcPrPc。传染性。传染性克克- -雅病（雅病（CJDCJD）患者脑脊液）患者脑脊液14-3-314-3-3蛋白测蛋白测定阳性，结合患者脑电图检查的异常波形，定阳性，结合患者脑电图检查的异常波形，是支持是支持CJDCJD诊断的有力证据。诊断的有力证据。2024/7/19117典型病例实验诊断分析典型病例实验诊断分析典型病例实验诊断分析典型病例实验诊断分析（一）简要病史（一）简要病史王王王王王王
92、XXXXXXXXXXXX，女孩，女孩，女孩，女孩，女孩，女孩2 2 2 2 2 2岁，发热岁，发热岁，发热岁，发热岁，发热岁，发热( ( ( ( ( (迅速高热，可达迅速高热，可达迅速高热，可达迅速高热，可达3939) ) 伴癫痫急诊就医。伴癫痫急诊就医。伴癫痫急诊就医。伴癫痫急诊就医。伴癫痫急诊就医。伴癫痫急诊就医。 （二）体格检查（二）体格检查 患者克氏征（患者克氏征（患者克氏征（患者克氏征（患者克氏征（患者克氏征（KernigKernigKernigKernigKernigKernig征）和布氏征（征）和布氏征（征）和布氏征（征）和布氏征（征）和布氏征（征）和布氏征（Brudzinski
93、BrudzinskiBrudzinskiBrudzinskiBrudzinskiBrudzinski征）征）征）征）征）征）阳性阳性阳性阳性阳性阳性, , , , , ,前囟膨隆。前囟膨隆。前囟膨隆。前囟膨隆。 2024/7/19118四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析（三）实验室检查（三）实验室检查 血液一般检查：血液一般检查：血液一般检查：血液一般检查：血液一般检查：血液一般检查：WBC 16.2WBC 16.2WBC 16.2WBC 16.2WBC 16.2WBC 16.21010101010109 9 9 99 9、中性粒细
94、胞、中性粒细胞、中性粒细胞、中性粒细胞、中性粒细胞、中性粒细胞75%75%75%75%75%75%、淋巴、淋巴、淋巴、淋巴、淋巴、淋巴细胞细胞细胞细胞细胞细胞15%15%15%15%15%15%、单核细胞、单核细胞、单核细胞、单核细胞、单核细胞、单核细胞10%10%10%10%10%10%。抗链球菌溶血素。抗链球菌溶血素。抗链球菌溶血素。抗链球菌溶血素。抗链球菌溶血素。抗链球菌溶血素O O O O O O与单核细胞增多与单核细胞增多与单核细胞增多与单核细胞增多与单核细胞增多与单核细胞增多症筛选试验阴性。症筛选试验阴性。症筛选试验阴性。症筛选试验阴性。症筛选试验阴性。症筛选试验阴性。 腰椎穿刺脑
95、脊液：呈云雾状，细胞计数：白细胞数为腰椎穿刺脑脊液：呈云雾状，细胞计数：白细胞数为腰椎穿刺脑脊液：呈云雾状，细胞计数：白细胞数为腰椎穿刺脑脊液：呈云雾状，细胞计数：白细胞数为腰椎穿刺脑脊液：呈云雾状，细胞计数：白细胞数为腰椎穿刺脑脊液：呈云雾状，细胞计数：白细胞数为460/ 460/ 460/ 460/ 460/ 460/ mL , mL , mL , mL , mL , mL , 其中主要为单个核细胞其中主要为单个核细胞其中主要为单个核细胞其中主要为单个核细胞其中主要为单个核细胞其中主要为单个核细胞12%12%12%12%12%12%，淋巴细胞，淋巴细胞，淋巴细胞，淋巴细胞，淋巴细胞，淋巴细
96、胞78%78%78%78%78%78%、中性粒细、中性粒细、中性粒细、中性粒细、中性粒细、中性粒细胞胞胞胞胞胞10%10%10%10%10%10%， 红细胞红细胞红细胞红细胞红细胞红细胞121212121212103/L103/L103/L103/L103/L103/L，脑脊液中葡萄糖，脑脊液中葡萄糖，脑脊液中葡萄糖，脑脊液中葡萄糖，脑脊液中葡萄糖，脑脊液中葡萄糖79 mg/dL , 79 mg/dL , 79 mg/dL , 79 mg/dL , 79 mg/dL , 79 mg/dL , 蛋蛋蛋蛋蛋蛋白质白质白质白质白质白质260 mg/dL260 mg/dL260 mg/dL260 mg
97、/dL260 mg/dL260 mg/dL。脑脊液新型隐球菌抗原检测阴性。脑脊液新型隐球菌抗原检测阴性。脑脊液新型隐球菌抗原检测阴性。脑脊液新型隐球菌抗原检测阴性。脑脊液新型隐球菌抗原检测阴性。脑脊液新型隐球菌抗原检测阴性。 2024/7/19119四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析 （四）思考题（四）思考题: :n nn1 1 1 1 1 1脑脊液呈云雾状有何临床意义？脑脊液呈云雾状有何临床意义？脑脊液呈云雾状有何临床意义？脑脊液呈云雾状有何临床意义？脑脊液呈云雾状有何临床意义？脑脊液呈云雾状有何临床意义？n nn2 2 2 2
98、2 2脑脊液中葡萄糖与蛋白质检测何种数值对细脑脊液中葡萄糖与蛋白质检测何种数值对细脑脊液中葡萄糖与蛋白质检测何种数值对细脑脊液中葡萄糖与蛋白质检测何种数值对细脑脊液中葡萄糖与蛋白质检测何种数值对细脑脊液中葡萄糖与蛋白质检测何种数值对细菌性脑膜炎诊断具有临床意义？为什么？菌性脑膜炎诊断具有临床意义？为什么？菌性脑膜炎诊断具有临床意义？为什么？菌性脑膜炎诊断具有临床意义？为什么？菌性脑膜炎诊断具有临床意义？为什么？菌性脑膜炎诊断具有临床意义？为什么？n nn3 3 3 3 3 3脑脊液革兰染色中检出大量白细胞，但未见脑脊液革兰染色中检出大量白细胞，但未见脑脊液革兰染色中检出大量白细胞，但未见脑脊液
99、革兰染色中检出大量白细胞，但未见脑脊液革兰染色中检出大量白细胞，但未见脑脊液革兰染色中检出大量白细胞，但未见细菌，对初诊患者，医生应需怀疑何种疾病？细菌，对初诊患者，医生应需怀疑何种疾病？细菌，对初诊患者，医生应需怀疑何种疾病？细菌，对初诊患者，医生应需怀疑何种疾病？细菌，对初诊患者，医生应需怀疑何种疾病？细菌，对初诊患者，医生应需怀疑何种疾病？ 2024/7/19120四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析 （四）思考题（四）思考题: :n nn4 4 4 4 4 45 5 5 5 5 5天后，进一步检测结果：脑脊液天后，进一步检测结
100、果：脑脊液天后，进一步检测结果：脑脊液天后，进一步检测结果：脑脊液天后，进一步检测结果：脑脊液天后，进一步检测结果：脑脊液72h72h72h72h72h72h、血液、血液、血液、血液、血液、血液5d 5d 5d 5d 5d 5d 培养培养培养培养培养培养阴性，未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒阴性，未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒阴性，未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒阴性，未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒阴性，未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒阴性，未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒PCRPCRPCRPCRPCRPCR检测、疱疹病毒检测、疱
101、疹病毒检测、疱疹病毒检测、疱疹病毒检测、疱疹病毒检测、疱疹病毒PCRPCRPCRPCRPCRPCR检测均为阴性。第检测均为阴性。第检测均为阴性。第检测均为阴性。第检测均为阴性。第检测均为阴性。第4 4 4 4 4 4周真菌培养仍周真菌培养仍周真菌培养仍周真菌培养仍周真菌培养仍周真菌培养仍阴性，参考实验室结核分枝杆菌液体培养显示有菌生长。阴性，参考实验室结核分枝杆菌液体培养显示有菌生长。阴性，参考实验室结核分枝杆菌液体培养显示有菌生长。阴性，参考实验室结核分枝杆菌液体培养显示有菌生长。阴性，参考实验室结核分枝杆菌液体培养显示有菌生长。阴性，参考实验室结核分枝杆菌液体培养显示有菌生长。为什么抗酸染
102、色与培养不符合？为什么抗酸染色与培养不符合？为什么抗酸染色与培养不符合？为什么抗酸染色与培养不符合？为什么抗酸染色与培养不符合？为什么抗酸染色与培养不符合？n nn5 5 5 5 5 5为了缩短检验时间，医生嘱用结核分枝杆菌探针直接为了缩短检验时间，医生嘱用结核分枝杆菌探针直接为了缩短检验时间，医生嘱用结核分枝杆菌探针直接为了缩短检验时间，医生嘱用结核分枝杆菌探针直接为了缩短检验时间，医生嘱用结核分枝杆菌探针直接为了缩短检验时间，医生嘱用结核分枝杆菌探针直接检测液体培养基的沉淀，结果阳性。因药敏试验需要检测液体培养基的沉淀，结果阳性。因药敏试验需要检测液体培养基的沉淀，结果阳性。因药敏试验需要
103、检测液体培养基的沉淀，结果阳性。因药敏试验需要检测液体培养基的沉淀，结果阳性。因药敏试验需要检测液体培养基的沉淀，结果阳性。因药敏试验需要3 3 3 3 3 3周，周，周，周，周，周，CDCCDCCDCCDCCDCCDC推荐用何种药物治疗？推荐用何种药物治疗？推荐用何种药物治疗？推荐用何种药物治疗？推荐用何种药物治疗？推荐用何种药物治疗？n nn6 6 6 6 6 6除了向医生与健康中心报告结核分枝杆菌培养阳性，除了向医生与健康中心报告结核分枝杆菌培养阳性，除了向医生与健康中心报告结核分枝杆菌培养阳性，除了向医生与健康中心报告结核分枝杆菌培养阳性，除了向医生与健康中心报告结核分枝杆菌培养阳性，
104、除了向医生与健康中心报告结核分枝杆菌培养阳性，实验室还需完成哪项工作？实验室还需完成哪项工作？实验室还需完成哪项工作？实验室还需完成哪项工作？实验室还需完成哪项工作？实验室还需完成哪项工作？ 2024/7/19121四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析n nn（五）实验诊断分析（五）实验诊断分析（五）实验诊断分析n nn腰椎穿刺云雾状脑脊液及细胞计数所示白细胞数增多（为腰椎穿刺云雾状脑脊液及细胞计数所示白细胞数增多（为腰椎穿刺云雾状脑脊液及细胞计数所示白细胞数增多（为腰椎穿刺云雾状脑脊液及细胞计数所示白细胞数增多（为腰椎穿刺云雾状脑脊
105、液及细胞计数所示白细胞数增多（为腰椎穿刺云雾状脑脊液及细胞计数所示白细胞数增多（为4.64.64.64.64.64.61010101010106 6 6 66 6/L/L/L/L/L/L）大多是中枢神经系统感染。不同病原体所致中枢神经系）大多是中枢神经系统感染。不同病原体所致中枢神经系）大多是中枢神经系统感染。不同病原体所致中枢神经系）大多是中枢神经系统感染。不同病原体所致中枢神经系）大多是中枢神经系统感染。不同病原体所致中枢神经系）大多是中枢神经系统感染。不同病原体所致中枢神经系统感染的早期脑脊液标本检查结果见下表统感染的早期脑脊液标本检查结果见下表统感染的早期脑脊液标本检查结果见下表统感染
106、的早期脑脊液标本检查结果见下表统感染的早期脑脊液标本检查结果见下表统感染的早期脑脊液标本检查结果见下表 2024/7/19122四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析（五）实验诊断分析（五）实验诊断分析 脑脊液革兰染色中检出大量白细胞且以单核细胞占优，但脑脊液革兰染色中检出大量白细胞且以单核细胞占优，但脑脊液革兰染色中检出大量白细胞且以单核细胞占优，但脑脊液革兰染色中检出大量白细胞且以单核细胞占优，但脑脊液革兰染色中检出大量白细胞且以单核细胞占优，但脑脊液革兰染色中检出大量白细胞且以单核细胞占优，但脑脊液细菌培养未见细菌，对初诊患者，结
107、合脑脊液蛋白脑脊液细菌培养未见细菌，对初诊患者，结合脑脊液蛋白脑脊液细菌培养未见细菌，对初诊患者，结合脑脊液蛋白脑脊液细菌培养未见细菌，对初诊患者，结合脑脊液蛋白脑脊液细菌培养未见细菌，对初诊患者，结合脑脊液蛋白脑脊液细菌培养未见细菌，对初诊患者，结合脑脊液蛋白质增多，医生应需怀疑为病毒性脑膜炎或结核性脑膜炎；质增多，医生应需怀疑为病毒性脑膜炎或结核性脑膜炎；质增多，医生应需怀疑为病毒性脑膜炎或结核性脑膜炎；质增多，医生应需怀疑为病毒性脑膜炎或结核性脑膜炎；质增多，医生应需怀疑为病毒性脑膜炎或结核性脑膜炎；质增多，医生应需怀疑为病毒性脑膜炎或结核性脑膜炎；病毒性脑膜炎脑脊液应透明，而该患者脑脊
108、呈云雾状液，病毒性脑膜炎脑脊液应透明，而该患者脑脊呈云雾状液，病毒性脑膜炎脑脊液应透明，而该患者脑脊呈云雾状液，病毒性脑膜炎脑脊液应透明，而该患者脑脊呈云雾状液，病毒性脑膜炎脑脊液应透明，而该患者脑脊呈云雾状液，病毒性脑膜炎脑脊液应透明，而该患者脑脊呈云雾状液，脑脊液中葡萄糖减少，可能是结核性脑膜炎。脑脊液中葡萄糖减少，可能是结核性脑膜炎。脑脊液中葡萄糖减少，可能是结核性脑膜炎。脑脊液中葡萄糖减少，可能是结核性脑膜炎。脑脊液中葡萄糖减少，可能是结核性脑膜炎。脑脊液中葡萄糖减少，可能是结核性脑膜炎。2024/7/19123四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四
109、、典型病例实验诊断分析（五）实验诊断分析（五）实验诊断分析 没入院后进一步检测结果：脑脊液没入院后进一步检测结果：脑脊液没入院后进一步检测结果：脑脊液没入院后进一步检测结果：脑脊液没入院后进一步检测结果：脑脊液没入院后进一步检测结果：脑脊液72h72h72h72h72h72h、血液、血液、血液、血液、血液、血液5d 5d 5d 5d 5d 5d 培养阴性，培养阴性，培养阴性，培养阴性，培养阴性，培养阴性，未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒未见抗酸染色阳性菌，真菌
110、培养阴性，肠道病毒未见抗酸染色阳性菌，真菌培养阴性，肠道病毒PCRPCRPCRPCRPCRPCR检测、检测、检测、检测、检测、检测、疱疹病毒疱疹病毒疱疹病毒疱疹病毒疱疹病毒疱疹病毒PCRPCRPCRPCRPCRPCR检测均为阴性。第检测均为阴性。第检测均为阴性。第检测均为阴性。第检测均为阴性。第检测均为阴性。第4 4 4 4 4 4周真菌培养仍阴性，参考周真菌培养仍阴性，参考周真菌培养仍阴性，参考周真菌培养仍阴性，参考周真菌培养仍阴性，参考周真菌培养仍阴性，参考实验室用结核分枝杆菌探针直接检测结核分枝杆菌液体培实验室用结核分枝杆菌探针直接检测结核分枝杆菌液体培实验室用结核分枝杆菌探针直接检测结
111、核分枝杆菌液体培实验室用结核分枝杆菌探针直接检测结核分枝杆菌液体培实验室用结核分枝杆菌探针直接检测结核分枝杆菌液体培实验室用结核分枝杆菌探针直接检测结核分枝杆菌液体培养基的沉淀，结果阳性，显示有结核分枝杆菌生长。养基的沉淀，结果阳性，显示有结核分枝杆菌生长。养基的沉淀，结果阳性，显示有结核分枝杆菌生长。养基的沉淀，结果阳性，显示有结核分枝杆菌生长。养基的沉淀，结果阳性，显示有结核分枝杆菌生长。养基的沉淀，结果阳性，显示有结核分枝杆菌生长。 2024/7/19124四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析四、典型病例实验诊断分析（六）（六）最后诊断最后诊断 结合临
112、床及实验检查结果分析，结合临床及实验检查结果分析，结合临床及实验检查结果分析，结合临床及实验检查结果分析，结合临床及实验检查结果分析，结合临床及实验检查结果分析，n nn 考虑本例的考虑本例的考虑本例的考虑本例的考虑本例的考虑本例的最后最后最后最后最后最后诊断是：诊断是：诊断是：诊断是：诊断是：诊断是：结核性脑膜炎。结核性脑膜炎。结核性脑膜炎。结核性脑膜炎。结核性脑膜炎。结核性脑膜炎。n nn 推荐用异烟肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺。推荐用异烟肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺。推荐用异烟肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺。推荐用异烟肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺。推荐用异烟肼、利福平、乙胺丁醇、吡
113、嗪酰胺。推荐用异烟肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺。若药敏试验为敏感株，乙胺丁醇、吡嗪酰胺服用若药敏试验为敏感株，乙胺丁醇、吡嗪酰胺服用若药敏试验为敏感株，乙胺丁醇、吡嗪酰胺服用若药敏试验为敏感株，乙胺丁醇、吡嗪酰胺服用若药敏试验为敏感株，乙胺丁醇、吡嗪酰胺服用若药敏试验为敏感株，乙胺丁醇、吡嗪酰胺服用2 2 2 2 2 2个个个个个个月后停用，异烟肼、利福平则继续服用月后停用，异烟肼、利福平则继续服用月后停用，异烟肼、利福平则继续服用月后停用，异烟肼、利福平则继续服用月后停用，异烟肼、利福平则继续服用月后停用，异烟肼、利福平则继续服用7-107-107-107-107-107-10个月。个月。
114、个月。个月。个月。个月。n nn 儿童结核源于其社区与家庭成员已感染成人的近儿童结核源于其社区与家庭成员已感染成人的近儿童结核源于其社区与家庭成员已感染成人的近儿童结核源于其社区与家庭成员已感染成人的近儿童结核源于其社区与家庭成员已感染成人的近儿童结核源于其社区与家庭成员已感染成人的近期传播，预防儿童结核发生首要是对已感染成人的期传播，预防儿童结核发生首要是对已感染成人的期传播，预防儿童结核发生首要是对已感染成人的期传播，预防儿童结核发生首要是对已感染成人的期传播，预防儿童结核发生首要是对已感染成人的期传播，预防儿童结核发生首要是对已感染成人的确诊与合适治疗。确诊与合适治疗。确诊与合适治疗。确诊与合适治疗。确诊与合适治疗。确诊与合适治疗。
