蛋白质结构与功能1课件

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1、蛋白质的结构与功能Structure and Function of Protein(四四)蛋白质结构与功能(1)课件第四节第四节 蛋白质的蛋白质的理化性质理化性质 一一 、蛋白质的理化性质、蛋白质的理化性质二、二、 蛋白质分离和纯化蛋白质分离和纯化三、三、 多肽链中氨基酸顺序分析多肽链中氨基酸顺序分析 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定（一）两性解离和等电点（一）两性解离和等电点及其及其分离纯化分离纯化蛋白质结构与功能(1)课件 Pr Pr是两性电解质。在溶液中的带电状况是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的主要取决于溶液的pHpH值。值。PrCOOHNH3+PrCOO-NH

2、3+PrCOO-NH2OH-H+OH-H+pH=pIpHpIpIpI定义：定义： 在某一在某一pHpH值溶液中，值溶液中，PrPr酸性基团和碱性基团的解离程酸性基团和碱性基团的解离程度相当度相当PrPr分子所带正负电荷相等，净电荷为零此时溶液的分子所带正负电荷相等，净电荷为零此时溶液的pHpH值值称为称为PrPr的的pIpI。蛋白质结构与功能(1)课件PrPr分子颗粒大小分子颗粒大小1-100nm1-100nm之间之间, ,属胶体颗粒范围，属胶体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体。在溶液中能形成稳定的胶体。原因：原因：（二）蛋白质的胶体性质（二）蛋白质的胶体性质表面形成水化层表面形成水化层表面

3、同种电荷的斥力表面同种电荷的斥力 除去这两个因素除去这两个因素,Pr,Pr就会发生沉淀。由于就会发生沉淀。由于胶体胶体溶液中的溶液中的PrPr不能通过半透膜，不能通过半透膜，因此可以应用因此可以应用透析透析法法将非蛋白的小分子杂质除去。将非蛋白的小分子杂质除去。蛋白质结构与功能(1)课件（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固吴吴宪宪教教授授19311931年年：“天天然然PrPr分分子子借借助助次次级级键键连连接接而而成成一一种种紧紧密密，有有规规则则的的空空间间结结构构，变性作用使次级键破坏从而使结构松散变性作用使次级键破坏从而使结构松散”。1. 1. 蛋白质的变性蛋白

4、质的变性(denaturation)(denaturation)定义定义：在某些理化因素的作用下，：在某些理化因素的作用下，PrPr严格的严格的空间结构被破坏空间结构被破坏 （不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性质和生（不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性质和生 物学性质改变的现象。物学性质改变的现象。蛋白质结构与功能(1)课件 变性后的蛋白质称变性蛋白变性蛋白,能使Pr变性的物质叫PrPr变性剂变性剂。变性因素变性因素物理因素物理因素高温、高压高温、高压紫外线、紫外线、X射线、射线、电离辐射和超声波等电离辐射和超声波等化学因素化学因素强酸、强碱强酸、强碱有机溶剂、重金属盐有机溶剂、重金属

5、盐高浓度尿素、盐酸胍等高浓度尿素、盐酸胍等变性实质：变性实质：破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、MWMW不变）。不变）。蛋白质结构与功能(1)课件变性蛋白质的特点变性蛋白质的特点旋光性、光吸收改变等；旋光性、光吸收改变等；生物学活性丧失生物学活性丧失理化性质改变理化性质改变易被蛋白酶水解易被蛋白酶水解溶解度溶解度，沉降率，沉降率，粘度粘度，扩散速度扩散速度，酶水解。酶水解。变性与复性变性与复性变性变性可逆变性可逆变性：Pr变性后如将变性剂除去，该变性后如将变性剂除去，该Pr分子的天然构象和生物学分子的天然构象和生物学 活性还能恢复。活性还能

6、恢复。不可逆变性不可逆变性：若变性条件强烈，作用时间长，构像变化大，理化性：若变性条件强烈，作用时间长，构像变化大，理化性 质难以恢复。质难以恢复。举例：医疗；生物制品保存；生活等。举例：医疗；生物制品保存；生活等。蛋白质结构与功能(1)课件RNaseRNase的变性与复性的变性与复性蛋白质结构与功能(1)课件 变变变变性性性性后后后后的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质由由由由于于于于疏疏疏疏水水水水基基基基团团团团的的的的暴暴暴暴露露露露而而而而易易易易于于于于沉沉沉沉淀淀淀淀，但但但但沉沉沉沉淀淀淀淀的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质不不不不一一一一定定定定都都都都是是是是变变变变性性性性后后

7、后后的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质。加加加加热热热热使使使使蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质变变变变性性性性并并并并凝凝凝凝聚聚聚聚成成成成块块块块状状状状称称称称为为为为凝凝凝凝固固固固。因因因因此此此此，凡凡凡凡凝凝凝凝固固固固的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质一定发生变性。质一定发生变性。质一定发生变性。质一定发生变性。 总结：总结：PrPr变性、沉淀与凝固之间的关系变性、沉淀与凝固之间的关系 变性变性PrPr不一定沉淀不一定沉淀 沉淀沉淀PrPr不一定变性不一定变性 变性变性PrPr不一定凝固不一定凝固 凝固的凝固的PrPr一定变性一定变性2. 沉淀与凝固沉淀与凝固定义：定义：蛋白质分子相互聚集而从

8、溶液中析出蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为的现象称为沉淀沉淀。蛋白质结构与功能(1)课件+-+-蛋白质胶体颗粒的沉淀蛋白质胶体颗粒的沉淀蛋白质胶体颗粒的沉淀蛋白质胶体颗粒的沉淀 带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质酸酸酸酸碱碱碱碱脱水脱水脱水脱水脱水脱水不稳定的蛋白质颗粒 （沉淀）带正电荷的蛋白质 （疏水胶体）带负电荷的蛋白质 （疏水胶体）碱碱酸酸（亲水胶体）（亲水胶体）（亲水胶体）蛋白质结构与功能(1)课件 大部分蛋白质均含有带共轭双键的Tyr和Trp。这两种AA在280nm 附近有特征性吸收峰。在此波长范围，Pr的OD280280与其浓度成正比。利用这个性质，可以对蛋

9、白质进行定量测定。（四）蛋白质的紫外吸收（四）蛋白质的紫外吸收 蛋白质浓度蛋白质浓度mg/mlmg/ml1.45A1.45A280280280280-0.74A-0.74A260260260260蛋白质结构与功能(1)课件 反应反应反应反应 试剂试剂试剂试剂 颜色颜色颜色颜色 反应基团反应基团反应基团反应基团 有此反应的有此反应的有此反应的有此反应的PrPr及及及及AAAA双缩脲反应双缩脲反应双缩脲反应双缩脲反应 NaOH,NaOH,稀稀稀稀CuSOCuSO4 4 紫或粉紫或粉紫或粉紫或粉 2 2个以上肽键个以上肽键个以上肽键个以上肽键 所有蛋白质所有蛋白质所有蛋白质所有蛋白质MillonMi

10、llon反应反应反应反应 Millon,Millon,硝酸，亚硝酸硝酸，亚硝酸硝酸，亚硝酸硝酸，亚硝酸 红色红色红色红色 酚基酚基酚基酚基 Tyr Tyr黄色反应黄色反应黄色反应黄色反应 HNOHNO3 3及及及及NHNH3 3 黄、橘黄黄、橘黄黄、橘黄黄、橘黄 苯基苯基苯基苯基 Phe,Tyr Phe,Tyr乙醛酸反应乙醛酸反应乙醛酸反应乙醛酸反应 乙醛酸乙醛酸乙醛酸乙醛酸HH2 2SOSO4 4 紫红紫红紫红紫红 吲哚吲哚吲哚吲哚 Trp Trp坂口反应坂口反应坂口反应坂口反应 次氯酸钠次氯酸钠次氯酸钠次氯酸钠, ,萘酚萘酚萘酚萘酚 红色红色红色红色 胍基胍基胍基胍基 Arg ArgFol

11、inFolin酚试剂反应酚试剂反应酚试剂反应酚试剂反应 CuSOCuSO4 4磷钨酸磷钨酸磷钨酸磷钨酸- -钼酸钼酸钼酸钼酸 兰色兰色兰色兰色 酚基酚基酚基酚基 Tyr Tyr茚三酮反应茚三酮反应茚三酮反应茚三酮反应 茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮 紫兰色紫兰色紫兰色紫兰色 游离氨、羧基游离氨、羧基游离氨、羧基游离氨、羧基 Pro Pro和羟和羟和羟和羟ProPro呈黄色呈黄色呈黄色呈黄色（五）、蛋白质的呈色反应蛋白质结构与功能(1)课件二、蛋白质分离和纯化二、蛋白质分离和纯化 研究研究PrPr的结构、性质和功能，首的结构、性质和功能，首先需要得到纯的蛋白质样品。先需要得到纯的蛋白质样品。1. Pr

12、1. Pr来源：微生物、动物或植物细胞；来源：微生物、动物或植物细胞；2.2.随时测定随时测定PrPr活性并检测活性并检测PrPr含量含量; ;3.3.分离和纯化过程须在温和的条件下进行。分离和纯化过程须在温和的条件下进行。蛋白质结构与功能(1)课件分离方法分离方法沉淀法沉淀法盐析法盐析法有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法层析法层析法离子交换层析离子交换层析吸附层析吸附层析凝胶过滤（分子筛）凝胶过滤（分子筛）亲和层析亲和层析。电学法电学法电泳法电泳法等电聚焦等电聚焦超速离心法超速离心法纯度、纯度、Mw和和pI测定测定层析法：层析法：凝胶过滤凝胶过滤凝胶过滤凝胶过滤; ;高效液相色谱法高效液相色谱法高

13、效液相色谱法高效液相色谱法电泳法：电泳法：PAGEPAGE、梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等免疫化学法：专一的沉淀线免疫化学法：专一的沉淀线SDS PAGE电泳法：测定亚基数电泳法：测定亚基数超速离心：成分均一超速离心：成分均一其它：如其它：如, 结晶法结晶法蛋白质结构与功能(1)课件定义定义：加入大量中性盐以破坏加入大量中性盐以破坏PrPr的稳定因素并的稳定因素并 使从溶液中沉淀析出的现象。使从溶液中沉淀析出的现象。 原理原理: :破坏破坏PrPr两个稳定因素：水化膜和电荷层两个稳定因素：水化膜和电荷层中性盐中性

14、盐：(NH(NH4 4 4 4) )2 2 2 2SOSO4 4 4 4；NaNa2 2 2 2SOSO4 4 4 4；NaClNaCl等。等。 半饱和硫酸铵沉淀半饱和硫酸铵沉淀球球PrPr 饱和硫酸铵沉淀饱和硫酸铵沉淀清清PrPr优点：优点：PrPr不变性，常用。不变性，常用。（一）盐析法（Salting out)叫分段盐析法叫分段盐析法蛋白质结构与功能(1)课件（二）电泳（二）电泳（electrophoresis)electrophoresis) 定义定义：带电粒子在电场中移动的现象称为：带电粒子在电场中移动的现象称为电泳电泳。 PrPr分分子子在在溶溶液液中中可可带带净净的的负负电电荷荷

15、或或带带净净的的正正电电荷荷，故故可可在在电电场场中中发发生生移移动动。不不同同的的PrPr分分子子所所带带电电荷荷量量不不同同，且且分分子子大大小小也也不不同同，故故在在电电场场中中的泳动速度也不同，由此可彼此分离。的泳动速度也不同，由此可彼此分离。（见实验理论（见实验理论 ）蛋白质结构与功能(1)课件电泳n n带电粒子在带电粒子在带电粒子在带电粒子在电场力作用电场力作用电场力作用电场力作用下向着所带下向着所带下向着所带下向着所带电荷相反的电荷相反的电荷相反的电荷相反的方向泳动的方向泳动的方向泳动的方向泳动的现象叫电泳。现象叫电泳。现象叫电泳。现象叫电泳。利用这一原利用这一原利用这一原利用这

16、一原理，可以将理，可以将理，可以将理，可以将蛋白质进行蛋白质进行蛋白质进行蛋白质进行分离纯化。分离纯化。分离纯化。分离纯化。蛋白质结构与功能(1)课件板状电泳板状电泳蛋白质结构与功能(1)课件 等电聚胶电泳等电聚胶电泳 (isoelectric focusing gel IEF) 蛋白质结构与功能(1)课件SDS-PAGE separates proteins by MW蛋白质结构与功能(1)课件试剂试剂试剂试剂：丙酮、乙醇、甲醇等亲水溶剂：丙酮、乙醇、甲醇等亲水溶剂：丙酮、乙醇、甲醇等亲水溶剂：丙酮、乙醇、甲醇等亲水溶剂 能与水以任意比例混合，有脱水作用。能与水以任意比例混合，有脱水作用。能

17、与水以任意比例混合，有脱水作用。能与水以任意比例混合，有脱水作用。原理原理原理原理： 脱水作用；脱水作用；脱水作用；脱水作用； 水的介电常数和蛋水的介电常数和蛋水的介电常数和蛋水的介电常数和蛋 白质溶解度。白质溶解度。白质溶解度。白质溶解度。优点优点优点优点：分辨率优于盐析法，能使某一：分辨率优于盐析法，能使某一：分辨率优于盐析法，能使某一：分辨率优于盐析法，能使某一PrPrPrPr在狭小在狭小在狭小在狭小 有机溶剂浓度范围内沉淀。有机溶剂浓度范围内沉淀。有机溶剂浓度范围内沉淀。有机溶剂浓度范围内沉淀。缺点缺点缺点缺点：易使：易使：易使：易使PrPrPrPr变性变性变性变性应用应用应用应用：p

18、IpIpIpI沉淀沉淀沉淀沉淀PrPrPrPr。调节溶液。调节溶液。调节溶液。调节溶液pHpHpHpH到某到某到某到某PrPrPrPr的的的的pIpIpIpI，加上丙酮破，加上丙酮破，加上丙酮破，加上丙酮破 坏水化膜，坏水化膜，坏水化膜，坏水化膜，PrPrPrPr沉淀。沉淀。沉淀。沉淀。注意注意：防止防止防止防止PrPrPrPr在分离过程中发生变性：在分离过程中发生变性：在分离过程中发生变性：在分离过程中发生变性：00004444下下下下进行；进行；进行；进行；有机溶剂浓度不能太高，有机溶剂浓度不能太高，有机溶剂浓度不能太高，有机溶剂浓度不能太高，PrPrPrPr沉淀后立即分离沉淀后立即分离沉

19、淀后立即分离沉淀后立即分离2. 2. 有机溶剂沉淀法：有机溶剂沉淀法：蛋白质结构与功能(1)课件（三）层析（三）层析（chromatography)chromatography)定定义义：利利用用混混合合物物中中各各组组分分理理化化性性质质的的差差异异，在在相相互互接接触触的的两两相相（固固定定相相与与流流动动相相）之之间间的的分分布不同而进行分离分析的技术方法。布不同而进行分离分析的技术方法。方方法法：离离子子交交换换层层析析；凝凝胶胶层层析析；吸吸附附层层析析及及亲亲和层析等。和层析等。 蛋白质结构与功能(1)课件离子交换层析法离子交换层析法定义定义定义定义: : : : 利用离子交换树脂

20、作为支持物，将带有不同利用离子交换树脂作为支持物，将带有不同利用离子交换树脂作为支持物，将带有不同利用离子交换树脂作为支持物，将带有不同 电荷的电荷的电荷的电荷的PrPrPrPr进行分离的方法。进行分离的方法。进行分离的方法。进行分离的方法。分类分类分类分类: : : :阳离子交换树脂阳离子交换树脂阳离子交换树脂阳离子交换树脂, , , ,如羧甲基纤维素等，如羧甲基纤维素等，如羧甲基纤维素等，如羧甲基纤维素等， 阴离子交换树脂阴离子交换树脂阴离子交换树脂阴离子交换树脂, , , ,如二乙基氨基乙基纤维素等如二乙基氨基乙基纤维素等如二乙基氨基乙基纤维素等如二乙基氨基乙基纤维素等原理原理原理原理:

21、 : : :带正电荷多的带正电荷多的带正电荷多的带正电荷多的PrPrPrPr与树脂结合较强，而带正电荷与树脂结合较强，而带正电荷与树脂结合较强，而带正电荷与树脂结合较强，而带正电荷 少的少的少的少的PrPrPrPr与树脂结合则较弱。用不同浓度的阳离子与树脂结合则较弱。用不同浓度的阳离子与树脂结合则较弱。用不同浓度的阳离子与树脂结合则较弱。用不同浓度的阳离子洗脱液，如洗脱液，如洗脱液，如洗脱液，如NaClNaClNaClNaCl溶液进行梯度洗脱，通过溶液进行梯度洗脱，通过溶液进行梯度洗脱，通过溶液进行梯度洗脱，通过NaNaNaNa+ + + +的离的离的离的离子交换作用，可以将带有不同正电荷的子

22、交换作用，可以将带有不同正电荷的子交换作用，可以将带有不同正电荷的子交换作用，可以将带有不同正电荷的PrPrPrPr进行分进行分进行分进行分离。离。离。离。蛋白质结构与功能(1)课件带带正正电荷多蛋电荷多蛋白紧密结合白紧密结合带带负负电荷多蛋电荷多蛋白流过层析柱白流过层析柱阳阳离离子子交交换换树树脂脂工工作作示示意意图图蛋白质结构与功能(1)课件Cation-exchangecolumn蛋白质结构与功能(1)课件ColumnChromatography蛋白质结构与功能(1)课件凝胶过滤法凝胶过滤法蛋白质结构与功能(1)课件亲和层析法亲和层析法琼脂琼脂 糖糖凝胶凝胶连接臂连接臂蛋白质结构与功能(

23、1)课件Affinitychromatography蛋白质结构与功能(1)课件（四）透析法（四）透析法（DialysisDialysis）定义：定义：利用半透膜把大小分子分开利用半透膜把大小分子分开 的方法。的方法。 Pr Pr溶液置半透膜袋中，置流动溶剂（如蒸馏水）溶液置半透膜袋中，置流动溶剂（如蒸馏水）中，使小分子杂质（如无机盐、单糖、双糖、中，使小分子杂质（如无机盐、单糖、双糖、AAAA、小肽等透出）蛋白质留于袋中而得到分离。小肽等透出）蛋白质留于袋中而得到分离。材料：材料：特制的半透膜，截止分子量一般为一万。特制的半透膜，截止分子量一般为一万。应用：应用：1.1.腹膜透析和人工肾腹膜透

24、析和人工肾 ； 2. 2.反透析反透析 ； 3. 超滤超滤利用压力或离心力强行使水和小分子杂利用压力或离心力强行使水和小分子杂 质通过超滤膜除去，质通过超滤膜除去，PrPr留在膜上而称之。留在膜上而称之。操作操作: :蛋白质结构与功能(1)课件 透析工作图透析工作图半透膜原理半透膜原理蛋白质结构与功能(1)课件（五）超速离心利利用用物物质质密密度度的的不不同同，PrPr经经超超速速离离心心后后，分分布布于于不不同同的的液液层层而分离。而分离。超超速速离离心心也也可可用用来来测测定定PrPr的的分分子子量量，PrPr的的分分子子量量与与其其沉沉降降系系数数S S成正比。成正比。 蛋白质结构与功能

25、(1)课件 超速离心超速离心蛋白质结构与功能(1)课件密度梯度离心密度梯度离心 步骤：步骤： A.形成密度梯度形成密度梯度 B. 加样加样 C.离心离心 D.收集样品收集样品蛋白质结构与功能(1)课件（六）Pr含量测定法 微量凯氏定氮法：微量凯氏定氮法：双缩脲法：双缩脲法：样品量样品量0.2-1.7mg/L0.2-1.7mg/L改良改良LowryLowry法：法： 在碱性条件下磷钼酸、磷钨酸混在碱性条件下磷钼酸、磷钨酸混合试剂与酪氨酸上的酚发生反应，生成蓝合试剂与酪氨酸上的酚发生反应，生成蓝色化合物，将其与双缩脲法结合起来，形色化合物，将其与双缩脲法结合起来，形成两种颜色的混合物，在成两种颜色

26、的混合物，在650nm650nm具有特定的具有特定的吸收。灵敏度较高吸收。灵敏度较高2525 g-250g-250 g/ml.g/ml.蛋白质结构与功能(1)课件 考马斯亮蓝考马斯亮蓝G250G250是一种带有负电荷的染料，在是一种带有负电荷的染料，在酸性条件下可与酸性条件下可与PrPr上的正电荷结合，形成蓝色化物，上的正电荷结合，形成蓝色化物，在在595nm595nm具有特定吸收。具有特定吸收。紫外吸收法紫外吸收法 由于核酸在由于核酸在260nm260nm具有光吸收，对测定干扰较具有光吸收，对测定干扰较大，可采用大，可采用280nm280nm、260nm260nm同测法。同测法。 蛋白质浓度

27、蛋白质浓度mg/mlmg/ml1.45A1.45A280280280280-0.74A-0.74A260260260260考马斯亮蓝法（考马斯亮蓝法（BradfordBradford法）法）蛋白质结构与功能(1)课件三、多肽链中氨基酸顺序分析蛋白质一级结构的测定基本要求基本要求: : 1. 1.样品要纯（样品要纯（97%97%以上）；以上）； 2. 2.测定测定PrPr的分子量的分子量 3. 3.知道知道PrPr亚基数目；亚基数目； 4. 4.测定测定PrPr分子的分子的AAAA组成；计算每种组成；计算每种AA AA 的的 个数。个数。 5. 5.测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。测定水解液

28、中的氨量，计算酰胺的含量。蛋白质结构与功能(1)课件方法方法倒推法倒推法顺序测定法顺序测定法倒推法：倒推法：组织组织Pr、DNAmRNAcDNA测定并识读测定并识读cDNA序列序列分析分析AA组成，推知组成，推知Pr一级结构一级结构逆转录酶逆转录酶蛋白质结构与功能(1)课件蛋白质（蛋白质（纯纯） 测定分子量，估计测定分子量，估计AA残基数（除残基数（除120）氨基酸自动分析仪氨基酸自动分析仪测定测定AA数量、种类和比例数量、种类和比例肽链拆开肽链拆开次级键：用次级键：用8mol/L脲脲 或或6mol/L 盐酸胍盐酸胍二硫键：过甲酸；巯基乙醇；二硫键：过甲酸；巯基乙醇；1，4二硫代苏糖醇二硫代苏

29、糖醇肽链末端分析肽链末端分析N端：端：二硝基氟苯；二硝基氟苯；丹磺酰氯法丹磺酰氯法C端：端：肼解法肼解法；羧肽酶法；羧肽酶法肽链选择性裂解肽链选择性裂解化学法：化学法：溴化氰裂解溴化氰裂解；羟胺法；羟胺法酶解法：胃蛋白酶、酶解法：胃蛋白酶、胰蛋白酶胰蛋白酶、糜蛋、糜蛋 白酶、木瓜蛋白酶等白酶、木瓜蛋白酶等肽段分离肽段分离凝胶过滤凝胶过滤离子交换层析离子交换层析氨基酸顺序分析：氨基酸顺序分析：Edman法法（异硫氰酸苯降解法异硫氰酸苯降解法）；酶解法）；酶解法多多肽肽链链中中氨氨基基酸酸序序列列分分析析的的主主要要步步骤骤蛋白质结构与功能(1)课件纯度、纯度、Mw和和pI测定测定层析法：层析法：

30、凝胶过滤凝胶过滤凝胶过滤凝胶过滤; ;高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法电泳法：电泳法：PAGE、梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等免疫化学法：专一的沉淀线免疫化学法：专一的沉淀线SDS PAGE电泳法：测定亚基数电泳法：测定亚基数超速离心：成分均一超速离心：成分均一其它：如其它：如, 结晶法结晶法蛋白质结构与功能(1)课件一、名词解释一、名词解释氨基酸残基氨基酸残基 亚基亚基 变构效应变构效应 协同效应协同效应 PrPr的两性电离的两性电离 Pr Pr的的pI pI 盐析盐析 蛋白质变性蛋白质

31、变性 超二级结构超二级结构 结构域结构域分子伴侣分子伴侣复习思考题复习思考题蛋白质结构与功能(1)课件1.1.为什么说：为什么说：“蛋白质是生命的物质基础蛋白质是生命的物质基础”？2.2.简述蛋白质简述蛋白质 螺旋和螺旋和 折叠的结构特点。折叠的结构特点。3.3.什么是什么是PrPr的一、二、三和四级结构，分别指出的一、二、三和四级结构，分别指出 维持它们结构的化学键。维持它们结构的化学键。4.4.举例说明举例说明PrPr结构与功能的关系。结构与功能的关系。5.5.简述简述PrPr变性、沉淀和凝固的定义及彼此之间的关系。变性、沉淀和凝固的定义及彼此之间的关系。6.Pr6.Pr定量测定的方法主要

32、有哪些？定量测定的方法主要有哪些？二、问答题二、问答题蛋白质结构与功能(1)课件1 1 天然蛋白质中不存在的氨基酸是天然蛋白质中不存在的氨基酸是 A A蛋氨酸蛋氨酸B B胱氨酸胱氨酸C C羟脯氨酸羟脯氨酸D D同型半胱氨酸同型半胱氨酸E E精氨酸精氨酸2 2下列哪种氨基酸在肽链中形成拐角下列哪种氨基酸在肽链中形成拐角A A缬氨酸缬氨酸B B酪氨酸酪氨酸C C脯氨酸脯氨酸D D苏氨酸苏氨酸E E色氨酸色氨酸三、选择题三、选择题蛋白质结构与功能(1)课件4. 4. 有关血红蛋白有关血红蛋白(Hb)(Hb)和肌红蛋白和肌红蛋白(Mb)(Mb)的叙述不正确的是的叙述不正确的是 A. A.都可以和氧结合

33、都可以和氧结合 B.Hb B.Hb和和MbMb都含铁都含铁 C. C.都是含辅基的结合蛋白都是含辅基的结合蛋白 D. D.都具有四级结构形式都具有四级结构形式 E. E.都属于色蛋白类都属于色蛋白类5 有一血清清蛋白有一血清清蛋白(pI685)的混合物，在哪种条件下电泳分的混合物，在哪种条件下电泳分 离效果最好离效果最好? A.pH4.9 B.pH5.9 C.pH6.5 D.pH8.6 E.pH3.5 3 3 下列有关蛋白质下列有关蛋白质片层结构的叙述正确的是片层结构的叙述正确的是 A. A.主链骨架呈锯齿状主链骨架呈锯齿状 B. B.两个相邻的肽平面呈折纸状两个相邻的肽平面呈折纸状 C. C

34、.片层结构是一种较伸展的肽链结构片层结构是一种较伸展的肽链结构 D. D.若干矩齿状肽链骨架平行或反平行排列，链间靠氢键维系若干矩齿状肽链骨架平行或反平行排列，链间靠氢键维系 E. E.以上都正确以上都正确蛋白质结构与功能(1)课件7.7.蛋白质分子引起蛋白质分子引起280nm280nm光吸收的最主要成分是光吸收的最主要成分是 A. A.肽键肽键 B. B.半胱氨酸的半胱氨酸的-SH-SH基基 C. C.苯丙氨酸的苯环苯丙氨酸的苯环 D. D.色氨酸的吲哚环色氨酸的吲哚环 E. E.组氨酸的咪唑环组氨酸的咪唑环6. 经凯氏定氮法测定，一血清标本的含氮量为经凯氏定氮法测定，一血清标本的含氮量为1

35、0g/L ，那么，蛋白，那么，蛋白质的浓度是多少？质的浓度是多少？ A. 52.5g/L B. 57.5g/L C. 62.5g/L D. 67.5g/L E. 72.5g/L蛋白质结构与功能(1)课件8.下列蛋白质通过凝胶过滤层析时最先被洗脱的是下列蛋白质通过凝胶过滤层析时最先被洗脱的是 A.马肝过氧化氢酶马肝过氧化氢酶(相对分子质量相对分子质量247500) B.肌红蛋白肌红蛋白(相对分子质量相对分子质量16900) C.人血清清蛋白人血清清蛋白(相对分子质量相对分子质量68500) D.牛牛乳球蛋白乳球蛋白(相对分子质量相对分子质量35000) E.牛胰岛素牛胰岛素(相对分子质量相对分子质量5733)蛋白质结构与功能(1)课件 谢谢 谢！谢！蛋白质结构与功能(1)课件