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1、Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 20091微生物控制检测微生物控制检测Mrs Robyn IsaacsonManufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 20092微生物检测微生物检测目的目的回回顾环境控制和境控制和质量控制量控制的微生物的微生物检测微生物微生物环境境监测容器容器完整性完整性测试灭菌
2、菌前微生物前微生物负载测试培养基灌装促生培养基灌装促生长试验无菌无菌测试其他其他微生物微生物实验室事室事项Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 20093环境境监测表表3 这些数据是平均值 单个沉降碟在空气中暴露小于4小时 这些数据是指导性的，并不是代表标准 必须建立微生物污染的水平（限度），这样就可以起到警戒、纠偏的目的，并监控整个工厂的空气质量趋势。微生物限度值Manufacture of sterile medicines Advance
3、d workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 20094环境境监测方法方法表面表面监测应当当对产品接触表面、地面、品接触表面、地面、墙以及以及设备进行定期行定期监测接触接触碟碟 用于平整表面用于平整表面取取样面面积25cm2培养基要凸起，高于碟子边缘培养基要凸起，高于碟子边缘培养基中含有中和剂培养基中含有中和剂表面擦试法表面擦试法-用于非规则表面用于非规则表面擦拭面积大约为擦拭面积大约为25cm2定性或定量定性或定量表面取样必须遵循无菌取样操作表面取样必须遵循无菌取样操作（使污染生产过程的关键表面的风险最小化）（使污染生产过程的关
4、键表面的风险最小化）擦拭法和接触碟法都可以使用擦拭法和接触碟法都可以使用Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 20095环境境监测方法方法浮游菌监测浮游菌监测撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪必须取一定体积的空气（取样体积必须有代表性）必须取一定体积的空气（取样体积必须有代表性）仪器必须经过校验仪器必须经过校验沉降菌监测沉降菌监测沉降碟在空气中的暴露时间为沉降碟在空气中的暴露时间为30-60 分钟（时间过长
5、可能导致琼脂干分钟（时间过长可能导致琼脂干掉），在灌装过程中需要更换。掉），在灌装过程中需要更换。只能给出定性和半定量的数据只能给出定性和半定量的数据数据必须结合空气浮游菌的取样结果进行评价数据必须结合空气浮游菌的取样结果进行评价Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 20096环境境监测取样地点取样地点必须基于微生物污染的风险必须基于微生物污染的风险取样取样点点必须在产品或组件暴露的区域周围取样，比如：必须在产品或组件暴露的区域周围取样，比如：
6、在灌装针头处在灌装针头处冻干机产品装载处冻干机产品装载处胶塞锅胶塞锅部件无菌连接操作部位部件无菌连接操作部位操作人员活动频繁处（但不会影响生产进程）操作人员活动频繁处（但不会影响生产进程）低级别的区域以较低频率进行监测并监控趋势低级别的区域以较低频率进行监测并监控趋势Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 20097环境境监测人员人员每次进入，手套都必须取样每次进入，手套都必须取样（但不能在消毒过后马上取（但不能在消毒过后马上取样）样）定期的对着
7、装的其他部位进定期的对着装的其他部位进行取样行取样洁净室的操作人员必须定期洁净室的操作人员必须定期的验证来表明自己在更的验证来表明自己在更衣衣时时衣服未受污染（更衣资质确衣服未受污染（更衣资质确认）。认）。Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 20098环境境监测污染水平与趋势污染水平与趋势GMP法规上的限度值仅供参考。法规上的限度值仅供参考。企业必须根据不同的区域制定警戒和纠偏限度值。企业必须根据不同的区域制定警戒和纠偏限度值。必须考虑单个结
8、果值必须考虑单个结果值 - 平均值可能掩盖了不可接受的情况平均值可能掩盖了不可接受的情况必须要有书面的操作规程规定数据回顾必须要有书面的操作规程规定数据回顾和和超过限度所采取的行动超过限度所采取的行动趋势分析报告趋势分析报告对于人员和环境的短期和长期结果分析报告对于人员和环境的短期和长期结果分析报告环境监测结果必须归档在批生产记录里环境监测结果必须归档在批生产记录里微生物菌群的明显改变必须引起重视。微生物菌群的明显改变必须引起重视。Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanji
9、ng, November 20099环境境监测消毒剂消毒剂消毒剂的适用性、有效性、局限性以及消毒规程程都必须评估消毒剂的适用性、有效性、局限性以及消毒规程程都必须评估必须制定最少接触时间必须制定最少接触时间对于对于A/B级区的消毒剂必须是无菌级别的，包装在无菌容器内，并在级区的消毒剂必须是无菌级别的，包装在无菌容器内，并在明确的效期内使用明确的效期内使用必须证明对工厂内的常规菌群有效必须证明对工厂内的常规菌群有效必须使用杀孢子剂（如果在环境中发现孢子），可以必须使用杀孢子剂（如果在环境中发现孢子），可以“喷雾喷雾”的形式的形式消毒部件和设备消毒部件和设备消毒的操作规程必须足够的详尽，以确保重现
10、性消毒的操作规程必须足够的详尽，以确保重现性配制，工作顺序，接触时间配制，工作顺序，接触时间从不良趋势中检出的微生物必须检测它们对于日常使用消毒剂的耐受从不良趋势中检出的微生物必须检测它们对于日常使用消毒剂的耐受性。性。Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200910环境境监测制药用水制药用水制药用水的微生物水平是非常重要制药用水的微生物水平是非常重要必须要有一个广泛且全面的水系统监测方案必须要有一个广泛且全面的水系统监测方案工厂源水，预处理
11、水，反渗透水，去离子水，纯化水工厂源水，预处理水，反渗透水，去离子水，纯化水/超纯水和注射用水都必须被超纯水和注射用水都必须被监测监测企业必须设定警戒和纠偏限度。企业必须设定警戒和纠偏限度。WHO推荐（下一页）推荐（下一页）对于纯化对于纯化/水超纯水和注射用水，药典的限度如下：水超纯水和注射用水，药典的限度如下：纯化水纯化水100CFU/mL超纯水和超纯水和注射用水注射用水10CFU/100mL（但通常高温循环）（但通常高温循环）Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjin
12、g, November 200911环境境监测制药用水微生物限度参考值制药用水微生物限度参考值 （CFU/mL）Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200912环境境监测制药用水制药用水如果条件允许，需检测大肠菌群及或假单胞菌群（该菌群可能会导致生如果条件允许，需检测大肠菌群及或假单胞菌群（该菌群可能会导致生物膜的产生）。物膜的产生）。非肠道用药制剂用水必须检测热原。非肠道用药制剂用水必须检测热原。限度必须小于限度必须小于0.25 EU/mL
13、水的微生物检测用水的微生物检测用R2A 琼脂（此种培养基对于水中的微生物的复活提供琼脂（此种培养基对于水中的微生物的复活提供低养分）在低养分）在30-35C 至少培养至少培养5天。天。取样程序必须遵循生产过程中的操作规程。取样程序必须遵循生产过程中的操作规程。压缩空气压缩空气/氮气氮气/CO2必须监测非活性粒子和微生物。必须监测非活性粒子和微生物。取样时使用减压口以提供稳定的气流，验证时必须考虑这些要求取样时使用减压口以提供稳定的气流，验证时必须考虑这些要求Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspe
14、ctors - Nanjing, November 200913容器完整性测试容器完整性测试密闭系统的完整性密闭系统的完整性初始验证用无菌培养基注入容器中，然后将容器浸入初始验证用无菌培养基注入容器中，然后将容器浸入106 CFU/mL的的高浓度菌悬液中。高浓度菌悬液中。对真空下进行密封的容器必须定期进行真空度检测，以证明在整个对真空下进行密封的容器必须定期进行真空度检测，以证明在整个有效期内仍能维持真空度。有效期内仍能维持真空度。建立规程，在制造过程剔除密闭性不好的产品。建立规程，在制造过程剔除密闭性不好的产品。进行灯检的操作人员必须经常休息，并且定期进行视力检查。进行灯检的操作人员必须经常
15、休息，并且定期进行视力检查。Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200914微生物负载微生物负载/过程控制过程控制IPC检测检测对于灭菌前的生物负载测试，过程控制和原材料的测对于灭菌前的生物负载测试，过程控制和原材料的测试都必须建立相应的书面规程试都必须建立相应的书面规程必须对测试方法进行验证，来证明少量微生物也能够必须对测试方法进行验证，来证明少量微生物也能够复活。复活。如果环境中有厌氧菌存在，就要考虑使用厌氧培养基。如果环境中有厌氧菌存在
16、，就要考虑使用厌氧培养基。必须有文件来规定微生物限度的目标值，警戒和纠偏必须有文件来规定微生物限度的目标值，警戒和纠偏值，并且文件中应规定超过纠偏值时，所必须采取的值，并且文件中应规定超过纠偏值时，所必须采取的措施。措施。Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200915微生物促生长试验微生物促生长试验用于微生物检测的培养基必须先对其进行营养试验来用于微生物检测的培养基必须先对其进行营养试验来证明它是可以支持微生物的生长证明它是可以支持微生物的
17、生长培养基灌装验证用的培养基必须能够支持大多数微生物的生长（细培养基灌装验证用的培养基必须能够支持大多数微生物的生长（细菌和真菌）。菌和真菌）。通常通常选用大豆酪蛋白用大豆酪蛋白酶消化培养基。有消化培养基。有时如果如果环境中存在境中存在厌氧菌，氧菌，需要考需要考虑使用使用厌氧性培养基。氧性培养基。在培养基灌装结束以后，必须用实验证明培养基能够支持环境环境在培养基灌装结束以后，必须用实验证明培养基能够支持环境环境分离菌的生长。分离菌的生长。进行营养试验时，需要接种进行营养试验时，需要接种10-100CFU的菌液。菌株包括枯草芽的菌液。菌株包括枯草芽孢杆菌杆菌、葡萄球菌、葡萄球菌、白色念珠白色念珠
18、菌、黑曲霉等，以及菌、黑曲霉等，以及环境分离菌。境分离菌。Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200916微生物促生长试验微生物促生长试验培养基培养基接种的培养基必须在接种的培养基必须在3天内有微生物的生长。天内有微生物的生长。用于环境监测的培养基也必须对其促生长特性进行测试。必须进行用于环境监测的培养基也必须对其促生长特性进行测试。必须进行验证证明培养基对验证证明培养基对残留消毒残留消毒剂的中和能力，能的中和能力，能够持在持在测试条件下的条
19、件下的微生物的复活（培养基中必微生物的复活（培养基中必须有中和有中和剂） 。外部购买的培养基也必须进行测试。外部购买的培养基也必须进行测试。用于培养基灌装和环境监测的培养基必须经过预培养来证明其无菌用于培养基灌装和环境监测的培养基必须经过预培养来证明其无菌性。性。培养基必须有经过验证的保存期限。培养基必须有经过验证的保存期限。Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200917无菌检测无菌检测无菌检测是无菌产品释放时进行的一项质量控制检测无菌检测
20、是无菌产品释放时进行的一项质量控制检测该方法有该方法有有有显著著统计学局限性学局限性 只能检测大范围的污染只能检测大范围的污染取样取样药典中规定了检测样品的数量及体积。药典中规定了检测样品的数量及体积。在无菌工艺生产的产品，必须对灌装过程的前、中、后以及生产过在无菌工艺生产的产品，必须对灌装过程的前、中、后以及生产过程有干扰和中断后生产的产品进行取样。程有干扰和中断后生产的产品进行取样。对于最终灭菌的产品，必须在先前识别的冷点处进行取样。对于最终灭菌的产品，必须在先前识别的冷点处进行取样。取样数量必须能够满足复检。取样数量必须能够满足复检。Manufacture of sterile medi
21、cines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200918无菌检测无菌检测设施设施无菌检测必须在和无菌工艺生产过程相同的条件下进行。无菌检测必须在和无菌工艺生产过程相同的条件下进行。B级区背景的级区背景的A级区层流（也可以在隔离器中进行）级区层流（也可以在隔离器中进行）空气经过高效过滤器空气经过高效过滤器HEPA过滤，必须监控压差，并有超限报警过滤，必须监控压差，并有超限报警进入该区域必须经过气闸室进入该区域必须经过气闸室操作人员必须进行正确的无菌更衣操作人员必须进行正确的无菌更衣操作人员必须经过适当的培
22、训并对其进行人员资质确认操作人员必须经过适当的培训并对其进行人员资质确认必须制定相应的清洁，消毒，杀菌规程必须制定相应的清洁，消毒，杀菌规程应对其环境进行监测应对其环境进行监测Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200919无菌检测无菌检测药典中已规定了方法药典中已规定了方法如果产品可以过滤，推荐使用膜过滤方法如果产品可以过滤，推荐使用膜过滤方法直接接种法可作为备选直接接种法可作为备选培养基类型培养基类型通常使用大豆酪蛋白通常使用大豆酪蛋白酶
23、消化培养基消化培养基 (SCD)和和 液体硫乙醇酸盐培养基液体硫乙醇酸盐培养基 (用于检测需氧和厌氧微生物用于检测需氧和厌氧微生物)必须验证该培养基能够支持产品中曾经出现过的一系列微生物的生必须验证该培养基能够支持产品中曾经出现过的一系列微生物的生长，通常这些微生物数量（浓度）较少，可能需要中和抑菌剂。长，通常这些微生物数量（浓度）较少，可能需要中和抑菌剂。细菌细菌3天内能够生长，霉菌天内能够生长，霉菌5天内能够生长天内能够生长购买的或自制的培养基必须灭菌，灭菌程需经过验证。购买的或自制的培养基必须灭菌，灭菌程需经过验证。Manufacture of sterile medicines Adv
24、anced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200920无菌检测无菌检测培养基培养基使用前必须通过营养试验（低数量的微生物）使用前必须通过营养试验（低数量的微生物）必须有批号和有效期必须有批号和有效期培养周期培养周期至少至少14天的培养天的培养培养基培养基SCD/TSB中中20-25C培养培养, FTM培养基中培养基中30-35C 培养培养培养物进行定期检查培养物进行定期检查对温度进行监控，温度监控设备必须经过校验对温度进行监控，温度监控设备必须经过校验如果产品产生浑浊、絮凝或沉淀，如果产品产生浑浊、絮凝或沉淀，14天后
25、应将适当比例的培养物天后应将适当比例的培养物（2-5%）接种到新鲜的培养基中继续培养）接种到新鲜的培养基中继续培养7天天Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200921无菌检测无菌检测阴性对照阴性对照对于同一批培养基，应部分或全部预先培养对于同一批培养基，应部分或全部预先培养14天后才能使用天后才能使用 (也可也可以以同无菌试验一起进行同无菌试验一起进行)阴性产品对照阴性产品对照 应使用相似形式和包装的实际应使用相似形式和包装的实际产品品进行
26、行对照照检测使使检测结果容易果容易评价价应计算和算和记录阴性阴性对照的照的污染染率率阳性试验对阳性试验对照照抑细菌抑细菌/抑真菌抑真菌试验应证明培养明培养基能支持基能支持产品中曾经出现过的一系列微生物的生长，通常这产品中曾经出现过的一系列微生物的生长，通常这些微生物数量（浓度）较少，可能需要中和抑菌剂些微生物数量（浓度）较少，可能需要中和抑菌剂细菌菌3天，霉菌天，霉菌5天内天内应有有明明显生生长Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200922
27、无菌检测无菌检测阳性阳性对照对照应在新在新产品和任品和任变更更时进行行验证应每每年年进行再行再验证含含抗生素或防腐抗生素或防腐剂或会或会缓慢慢释放以上成分的放以上成分的产品推荐使用品推荐使用直接接种直接接种法法证明即使在培养明即使在培养终点，培点，培养养基没有受到基没有受到产品影响，依然能品影响，依然能支持生支持生长结果结果任何培养出的微生物都任何培养出的微生物都应被被鉴定定（遗传学就）学就）自自动/半自半自动鉴定系定系统都都应用用标准菌准菌种种进行定期确行定期确认Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP i
28、nspectors - Nanjing, November 200923无菌检测无菌检测解解释和复和复试不不应检出出污染菌染菌除非能除非能够证明明实验失失败是由是由于与于与产品无关的原品无关的原因引起的，方因引起的，方能能进行复行复测欧洲欧洲药典典标准准(a) 无菌无菌检查时环境境监控控结果不符合要求果不符合要求(b) 回回顾无菌无菌试验过程程，发现使用了可疑的方法，使用了可疑的方法，导致致结果不符果不符合要求合要求(c) 阴性阴性对照照有微生物生有微生物生长(d)供供试品中生品中生长的微生物的微生物经鉴定后确定后确证是因无菌是因无菌试验中所使用中所使用的物品或无菌操作技的物品或无菌操作技术不
29、当引起的。不当引起的。Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200924无菌检测无菌检测解解释和复和复试当当出出现情况情况(a), (b) 或或 (c)时应中止中止试验如果如果试验结束束进行的抑制行的抑制试验未出未出现挑挑战菌的生菌的生长，也，也认为试验无效无效出出现情况情况(d)时必必须用用细菌菌鉴定的方法定的方法证明无菌明无菌试验分离的微生分离的微生物物经鉴定来定来自自试验物料物料（例如培养基）和（例如培养基）和/或或环境境必须使用遗传学（
30、基因）鉴定方法必须使用遗传学（基因）鉴定方法取相同取相同样品数品数进行复行复试复复试中有任何微生物生中有任何微生物生长，判判产品不符合品不符合规定定Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200925微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项标准菌种的保藏标准菌种的保藏标准菌种主要用于如下：标准菌种主要用于如下：培养基质量控制培养基质量控制检测方法验证检测方法验证检测试剂的质控检测试剂的质控必必须保持其保持其遗传稳定性，以定性，以维持它持它们的特性
31、的特性有些微生物培养物很容易有些微生物培养物很容易发生生变异异/遗传学学变化，化，这可能会影响它可能会影响它的培养特性，此的培养特性，此类菌种不能菌种不能继续使用使用菌种菌种发生生变异异/遗传变化的概率是随着化的概率是随着传代次数的增加而增加的代次数的增加而增加的-工作菌种自原始菌种工作菌种自原始菌种传代后不代后不应超超过5代代Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200926微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项标准菌种准菌种(2)实验室必
32、室必须建立一套保藏和建立一套保藏和维持持标准菌种原始特征的体系。准菌种原始特征的体系。实验室必室必须:保存合适的保存合适的标准菌种用于培养基，准菌种用于培养基，检测试剂的的质量控制、以及量控制、以及方法方法验证；验证；确保确保标准菌种可追溯到公准菌种可追溯到公认的菌种保藏的菌种保藏库（比如（比如ATCC，NCTC）确保确保标准菌种在准菌种在实验室内的室内的鉴定定结果唯一性，可溯源果唯一性，可溯源Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200927
33、微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项标准菌种准菌种 (3)实验室必室必须建立建立书面面规程程:必必须对书面面记录标准菌种的准菌种的传代控制代控制 (如原始菌种如原始菌种 转接保存菌株和工接保存菌株和工作菌株作菌株);对于于标准菌种的准菌种的购买、保藏、保藏、维护、鉴定和定和传代次数都要代次数都要书面面记录防止将工作菌种用作已衰退的次代菌种或原始菌种株防止将工作菌种用作已衰退的次代菌种或原始菌种株对各个各个标准菌株都有准菌株都有记录:鉴定、来源、定、来源、历史和接受日期史和接受日期对于原始菌株、于原始菌株、传代菌株和工作菌株都有复活、保藏、保存和存放代菌株和工作菌株都有复活、保藏、保存和存放
34、条件的条件的记录;对原始菌株和原始菌株和/或或传代菌株代菌株记录纯化和化和鉴定的定的结果果; 传代菌株和工作菌株的配制日期。代菌株和工作菌株的配制日期。Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200928微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项培养基质量控制培养基质量控制用于无菌试验和培养基灌装以外的培养基也必须进行质量控制用于无菌试验和培养基灌装以外的培养基也必须进行质量控制促生长促生长/营养试验是可用定量或半定量的方法营养试验是可用定量或半定
35、量的方法对于选择性培养基和对于选择性培养基和/或特殊菌种的培养基，进行阴性阳性对照或特殊菌种的培养基，进行阴性阳性对照不同程度的质量控制要求取决于培养基是否：不同程度的质量控制要求取决于培养基是否：自己配制（每批都要检测）自己配制（每批都要检测）购买预浇制的培养基购买预浇制的培养基 (供应商检测培养基，实验室定期核对供应商检测培养基，实验室定期核对)Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200929微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项培养基
36、质量控制培养基质量控制(2)实验室必室必须:培养基的配制、培养基的配制、质控、控、释放和保存都要有放和保存都要有书面面规程程;在常在常规存放条件下存放条件下,培养基必培养基必须确立确立经过验证的有效期的有效期;对每批培养基的配制和每批培养基的配制和质量控制量控制进行行记录; 确保每批培养基的配制确保每批培养基的配制记录都能追溯到都能追溯到该批培养基的微生物批培养基的微生物质控控记录;根据接受根据接受标准来准来评估微生物估微生物质量控制量控制检测结果果Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspector
37、s - Nanjing, November 200930微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项培养基的灭菌程序培养基的灭菌程序培养基灭菌过程应同产品灭菌一样培养基灭菌过程应同产品灭菌一样,都需对灭菌过程进行验证和监都需对灭菌过程进行验证和监控控设备校验和检查设备校验和检查实验室设备实验室设备(比如移液枪、天平、培养箱、冰箱、温度计、灭菌釜、比如移液枪、天平、培养箱、冰箱、温度计、灭菌釜、层流台等层流台等)都必须经过校验、定期复校和常规检查（如果条件允许）都必须经过校验、定期复校和常规检查（如果条件允许）人员人员必须经过适当的培训和授权必须经过适当的培训和授权Manufacture of st
38、erile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200931微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项生物指示剂的测试生物指示剂的测试如果进行内控测试，应包有热处理步骤（确保指示剂中只如果进行内控测试，应包有热处理步骤（确保指示剂中只i存在孢存在孢子而并非营养型微生物）子而并非营养型微生物）必须抽查生物指示剂，确认供应商提供的孢子浓度是否正确必须抽查生物指示剂，确认供应商提供的孢子浓度是否正确内毒素检测内毒素检测非肠道用药不得检出内毒素非肠道用药不得检出内毒素内毒素是存在于革兰氏阴性杆菌细
39、胞壁中的脂多糖物质，其在人内毒素是存在于革兰氏阴性杆菌细胞壁中的脂多糖物质，其在人体内会引起发烧体内会引起发烧对原材料、注射用水和其他一些成品必须进行内毒素检测对原材料、注射用水和其他一些成品必须进行内毒素检测Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200932微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项内毒素检测内毒素检测 (2)LAL (美洲鲎试剂美洲鲎试剂) 测试用于检测内毒素测试用于检测内毒素 (以前是兔温试验以前是兔温试验)试验基于内毒素和
40、鲎血液反应会产生凝结试验基于内毒素和鲎血液反应会产生凝结LAL测试的类型测试的类型凝胶法凝胶法浊度法浊度法比色法比色法内毒素检测的设备必须无热原内毒素检测的设备必须无热原必须针对每个产品进行检测方法的准确性和可靠性验证必须针对每个产品进行检测方法的准确性和可靠性验证Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200933微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项凝胶法凝胶法常规方法常规方法官方认可的方法官方认可的方法样本转入已知灵敏度的样本转入已知灵敏
41、度的LAL试剂试剂中恒温培养中恒温培养. 凝胶如果凝结表示凝胶如果凝结表示内毒素检测成阳性。内毒素检测成阳性。内毒素检测 (3)Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200934微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项浊度法浊度法动力学方法动力学方法样品先转入样品先转入LAL试剂中，用分试剂中，用分光光度计来测定增加混浊的光光度计来测定增加混浊的速率或最终凝结所需的时间，速率或最终凝结所需的时间，然后再和标准曲线进行比对然后再和标准曲线进行比对
42、来判断来判断内毒素检测 (4)Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200935微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项比色法比色法内毒素会催化内毒素会催化LAL中一种酶的活中一种酶的活性，该种酶会分解一种无色物质性，该种酶会分解一种无色物质成有色物质，而它的颜色通过分成有色物质，而它的颜色通过分光光度计来测定，然后和标准曲光光度计来测定，然后和标准曲线来比对线来比对可以是动力学或终点法可以是动力学或终点法内毒素检测(5)Manufacture
43、 of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200936微生物实验室其他事项微生物实验室其他事项* (灵敏度根据试剂厂商、设备和测试条件的不同而不同)灵敏度低至to .001 EU/ml *灵敏度低至0.005 EU/ml灵敏度低至0.1 EU/ml灵敏度最低至0.03 EU/ml可以自动化，能保存电子数据可以自动化，能保存电子数据可以自动化，能保存电子数据人工读数和记录需要酶标板或试管读数仪需要酶标板或试管读数仪需要分光光度计或酶标板读数仪简单、费用低,需37度水浴或干阱定量定量定量半定量浊度法浊度法比色法比色法动力学动力学比色法比色法反应终点反应终点凝胶法凝胶法内毒素检测 (6)Manufacture of sterile medicines Advanced workshop for SFDA GMP inspectors - Nanjing, November 200937问题问题?
