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1、白血病免疫分型正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。由于白血病细胞具有肿瘤细胞的特征，其抗原表达又不完全同于正常血细胞，常可出现某些抗原缺乏、过度表达、系列交叉表达某一系列或阶段不应有的抗原，这又增加了白血病免疫分型的复杂性。白血病/淋巴瘤的免疫分型已成为诊断血
2、液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。 早年曾用过的荧光显微镜或早年曾用过的荧光显微镜或APAAPAPAAP方法基本被废弃。国际方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（上公认的通用的方法是流式细胞术（FCMFCM）。流式细胞术）。流式细胞术（FCMFCM）白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体）白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAbMcAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。因为属细胞系列及其分
3、化程度。因为FCMFCM能快速，多参数，客能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜，浆，核的抗原表达。观的定性又定量测定细胞膜，浆，核的抗原表达。另一个重要理由是至今尚未发现白血病另一个重要理由是至今尚未发现白血病/ /淋巴瘤的特异抗淋巴瘤的特异抗原。所以能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白原。所以能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说即白血病细胞基因异常，分化受血病形成的分化阻断学说即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。抗原表达与其相应系列抗原表达与其相应系列/ /
4、阶段的血细胞无明显差异。与形阶段的血细胞无明显差异。与形态学检查相似仅能根据数量的差异来判断病变细胞的属性。态学检查相似仅能根据数量的差异来判断病变细胞的属性。单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。因此，近年单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。因此，近年来主张用设门（来主张用设门（gatinggating）方法。即用）方法。即用CD45CD45与侧向角与侧向角（sidesidescatter,SSCscatter,SSC），对数取样后可将骨髓细胞清晰），对数取样后可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红地分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红细胞群，其
5、理论依据是细胞群，其理论依据是CD45CD45是所有白细胞的抗原。其表达是所有白细胞的抗原。其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（胞（blastsblasts）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达红细胞）不表达CD45CD45。SSCSSC反映细胞的颗粒性，成熟粒细反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞胞SSCSSC最高，依次为单核细胞，淋巴细胞，最高，依次为单核细胞，淋巴细胞，blastsblasts，红细，红细胞。以胞。以CD45/SSCCD45/SSC双参数，对数取样时即
6、可把各细胞群区分双参数，对数取样时即可把各细胞群区分出来。若同时加上一个，二个甚或三个荧光标记的单抗，出来。若同时加上一个，二个甚或三个荧光标记的单抗，则很容易识别非正常细胞群所表达的抗原。这样可以排除则很容易识别非正常细胞群所表达的抗原。这样可以排除正常细胞的干扰。在幼稚细胞低的情况下或检测残存白正常细胞的干扰。在幼稚细胞低的情况下或检测残存白血病时尤为必要血病时尤为必要FCMFCM分析白血病免疫表型时，测量细胞数量一般在分析白血病免疫表型时，测量细胞数量一般在10000100005000050000细胞之间，而且快速、特异、准确，重复性好，能细胞之间，而且快速、特异、准确，重复性好，能区分
7、细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重要价值。要价值。 一白细胞分化抗原白细胞分化抗原（白细胞分化抗原（leukocytedifferentiationantigenleukocytedifferentiationantigen，LDALDA）指血细胞在分化成熟为不同谱系（指血细胞在分化成熟为不同谱系（lineagelineage） 、分化、分化的不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标的不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞
8、表面标记。记。它们大都为跨膜分子，由胞外区、跨膜区和胞浆区组成；它们大都为跨膜分子，由胞外区、跨膜区和胞浆区组成；有些以有些以糖基磷脂酰肌醇糖基磷脂酰肌醇（GPIGPI）“ “锚锚” ”在细胞膜上；在细胞膜上；它们大都是蛋白或糖蛋白，少数为碳水化合物它们大都是蛋白或糖蛋白，少数为碳水化合物 二 CD的概念、CD分子的分 类、功能及应用CDCD：用以单克隆抗体鉴定为主的聚类分析法，将来自不同：用以单克隆抗体鉴定为主的聚类分析法，将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原归为一个分化实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原归为一个分化群（群（ClusterofdifferentiationCl
9、usterofdifferentiation，CDCD）。）。并以此代替分化抗并以此代替分化抗原以往的命名原以往的命名。在许多情况下，单克隆抗体及其识别的相应抗原都用同一在许多情况下，单克隆抗体及其识别的相应抗原都用同一个个CDCD序号。序号。迄今为止，人迄今为止，人CDCD分子的序号已从分子的序号已从CD1CD1命名至命名至CD371CD371，可大，可大致划分为致划分为1414个组。个组。CDCD分子的功能分子的功能：（1 1）免疫应答过程中参与免疫细胞的相互识别；免疫细胞）免疫应答过程中参与免疫细胞的相互识别；免疫细胞识别抗原、活化、增殖和分化；免疫效应功能的发挥；识别抗原、活化、增殖和
10、分化；免疫效应功能的发挥；（2 2）参与造血细胞的分化和造血过程的调控；）参与造血细胞的分化和造血过程的调控；（3 3）参与炎症的发生；）参与炎症的发生；（4 4）参与细胞的迁移如肿瘤细胞的转移等。）参与细胞的迁移如肿瘤细胞的转移等。CDCD分子的临床应用分子的临床应用CDCD单克隆抗体可用于单克隆抗体可用于（1 1）阐明某些疾病的发病机制；）阐明某些疾病的发病机制；（2 2）广泛应用于多种疾病的免疫诊断；）广泛应用于多种疾病的免疫诊断；（3 3）治疗移植排斥反应和肿瘤等疾病；）治疗移植排斥反应和肿瘤等疾病；CD20分子结构与分布结构与分布：单链跨膜蛋白，仅表达于：单链跨膜蛋白，仅表达于B B
11、细胞，细胞， 早期即表早期即表达，分化为浆细胞后消失达，分化为浆细胞后消失功能功能： （1 1）参与和调节）参与和调节B B细胞信号转导、生长和分化。细胞信号转导、生长和分化。 （2 2）直接参与调节跨膜）直接参与调节跨膜CaCa2+2+的流动。的流动。三免疫分型常用的免疫标志及其意义白血病系列分化抗原白血病系列分化抗原T T淋巴细胞白血病：淋巴细胞白血病：CD3CD3、CD5CD5、CD7CD7。 B B淋巴细胞白血病：淋巴细胞白血病：CD10CD10、CD19CD19、CD22CD22。NKNK淋巴细胞白血病：淋巴细胞白血病：CD16CD16、CD56CD56、CD57CD57。 髓系白血
12、病：髓系白血病：CD13CD13、CD14CD14、CD33CD33、MPOMPO（髓过氧化物酶）（髓过氧化物酶）。红白血病：红白血病：GlyAGlyA（血型糖蛋白（血型糖蛋白A A）。）。 巨核细胞白血病：巨核细胞白血病：CD41CD41、CD42CD42、CD61CD61。 白血病系列非特异性抗原白血病系列非特异性抗原CD34CD34、HLAHLADRDR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38CD38联合运用于免疫分型。一般而言，干联合运用于免疫分型。一般而言，干/ /祖细胞祖细胞CD34CD34、HLAHLADRDR、CD38CD38，原始细胞，原始
13、细胞CD34CD34、HLAHLADRDR、CD38CD38，而幼稚细胞（如早幼粒细胞），而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34CD34、HLAHLADRDR、CD38CD38。白血病分化阶段抗原白血病分化阶段抗原T T细胞抗原：细胞抗原：CD4CD4、CD8CD8。 B B细胞抗原：细胞抗原：CD10CD10、CyCy（胞浆（胞浆 链）、链）、SmIgSmIg（表面膜免（表面膜免疫球蛋白）、疫球蛋白）、CD38CD38和和CyIgCyIg（胞浆免疫球蛋白）、（胞浆免疫球蛋白）、CD11CCD11C。白细胞共同抗原白细胞共同抗原CD45CD45为白细胞共同抗原，但原幼细胞表达量比成熟淋巴为白细胞共
14、同抗原，但原幼细胞表达量比成熟淋巴细胞低，幼红细胞不表达。用细胞低，幼红细胞不表达。用SSC/CD45PerCPSSC/CD45PerCP双参数分双参数分析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞。用两析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞。用两个系列或阶段特异性个系列或阶段特异性McAbMcAb加加CD45CD45进行三色免疫荧光染色，进行三色免疫荧光染色，经经FSCFSC、SSCSSC、McAbl-FITCMcAbl-FITC、McAb2-PEMcAb2-PE、CD45PerCPCD45PerCP五参五参数分析，可特异地分析原幼白血病细胞的免疫表型而不受数分析，可特异地分析原幼白血
15、病细胞的免疫表型而不受成熟细胞的干扰。成熟细胞的干扰。四白血病免疫分型急性髓系细胞白血病MOMoblastsMOMoblasts有低的有低的SSCSSC和和FSCFSC。在。在CD45CD45SSCSSC图上出现在淋巴细胞位置上，至少表达一个特异图上出现在淋巴细胞位置上，至少表达一个特异性标志如性标志如CD13CD13或或CD116CD116，但，但MPOMPO比比CD13CD13与与CD33CD33更灵敏。一般淋系标志阴性，但也可表达更灵敏。一般淋系标志阴性，但也可表达CD7CD7或或CD4CD4。MoblastsMoblasts一般一般HLAHLADRDR、CD34CD34阳性，有些研究表
16、阳性，有些研究表明明CD7CD7与与CD34CD34共表达在共表达在AMLAML且预后差。且预后差。M1M1流式上流式上M1M1与与M0M0相似不易区分，相似不易区分，M1M1一般一般CD13CD13、CD33CD33、HLAHLADRDR，但，但CD34CD34表达少表达少于于M0M0，可能表达部分，可能表达部分CD15CD15。 M2M2M2M2与与M1M1要区别是成熟度增加，要区别是成熟度增加，blastsblasts减少，减少，CD15CD15较较M1M1较显著，较显著，CD34CD34弱于弱于M1M1，CD13CD13有时表有时表达强于达强于CD33CD33，多数病例，多数病例HLA
17、HLADRDR（- -）。）。CD45CD45SSCSSC图显示从髓系图显示从髓系blastblast区至成熟骨髓细胞区的连区至成熟骨髓细胞区的连续细胞带，续细胞带，CD45CD45SSCSSC图有助于确定图有助于确定blastsblasts比例。比例。M3M3高颗粒性，具较高的高颗粒性，具较高的SSCSSC，但，但CD45CD45较成熟细较成熟细胞少，多数情况胞少，多数情况HLAHLADRDR（- -）或表达减少，）或表达减少，CD34CD34少于少于M2M2、一般、一般CD13CD13弱（），可有弱（），可有CD2CD2表表达。达。M4M4与与M5M5两型表型相似，但两型表型相似，但M4M
18、4较较M5M5表达更多的表达更多的CD34CD34（），较之（），较之M0M0、M1M1，M4M4与与M5M5有更大的有更大的FSSFSS和和SSCSSC，CD45CD45SSCSSC图上，成熟图上，成熟C C出现在单核出现在单核区，重要的表型为区，重要的表型为CD13CD13、CD33CD33、HLAHLADRDR、CD14CD14和和CD15CD15，CD33CD33可表达强于可表达强于CD13CD13，CD33CD33（）、（）、CD13CD13（）、（）、CD34CD34（）很可能为（）很可能为M5M5，但只出现在少数病人中，部分，但只出现在少数病人中，部分M5M5可见可见CD56CD
19、56（）。（）。M6M6M6M6较少见且特征不明显，一般较少见且特征不明显，一般HLAHLADRDR，CD34CD34、CD13CD13、CD33CD33阳性，阳性，CD45CD45SSCSSC图显示主图显示主要为红系成份。要为红系成份。M7M7巨核细胞白血病，在巨核细胞白血病，在AMLAML中少于中少于1 1。一般。一般CD61CD61（GpGpa a）和）和/ /或或CD41CD41（GpGpb-b-a a）阳性，）阳性，而注意由于血小板粘附在而注意由于血小板粘附在blastsblasts上造成的假阳性，上造成的假阳性，可以用流式双色分析在可以用流式双色分析在EDTAEDTA存在下，测存在
20、下，测p pb/b/a a与与CD34CD34以减少激活血小板的粘附。以减少激活血小板的粘附。急性淋巴细胞白血病ALLALL是儿童中最常见的恶性肿瘤，约占全部肿瘤的是儿童中最常见的恶性肿瘤，约占全部肿瘤的2525，在成人，在成人，ALLALL约占急性白血病的约占急性白血病的2525，我们将，我们将ALLALL分为分为B B祖祖细胞型，细胞型，CD10CD10或或CD10CD10，前，前B B细胞型，细胞型，B B细胞型，细胞型，T T细细胞型胞型B B祖细胞型祖细胞型ALLALL：在幼儿约占：在幼儿约占ALLALL的的65657070，青少年为青少年为55556060，人为，人为5050。在儿
21、童，约。在儿童，约9090病例病例CD10CD10，在幼儿只有少于，在幼儿只有少于5050病例病例CD10CD10，blastsblasts一般一般FSCFSC、SSCSSC很少，是很少，是FABFAB标准的标准的L1L1或或L2L2，一般，一般TdT(+)HLA-DR(+)TdT(+)HLA-DR(+)，CD19(+)CD19(+)，此型又分，此型又分为为2 2个亚型，个亚型，CD10CD10和和CD10CD10，前者预后好，多，前者预后好，多数病例数病例CD24CD24，CD34CD34，CD20CD20表达随成熟度增表达随成熟度增加而增加，加而增加，B B祖细胞被定义为祖细胞被定义为sI
22、g-sIg-。前前B B细胞型细胞型ALLALL：此亚型约占儿童：此亚型约占儿童ALLALL的的2525，细，细胞一般为胞一般为CD19CD19，CD24CD24，HLAHLADRDR，胞浆，胞浆CD22CD22，CD10CD10，TdTTdT随随CD20CD20变化，变化，CD34CD34多为多为阴性，前阴性，前B B亚型被认为比亚型被认为比B B祖型预后更差，这与祖型预后更差，这与t(1t(1；19)19)出现相关并由此产生出现相关并由此产生E2AE2APBX1PBX1融合蛋白，融合蛋白，它的表型为它的表型为CD19CD19、CD10CD10、CD9CD9，不同程度，不同程度CD20CD2
23、0表达，表达，CD34CD34，确认此表型有助于诊断基，确认此表型有助于诊断基因上不确定的病例。因上不确定的病例。B B细胞型细胞型ALLALL：成熟：成熟B B细胞型细胞型ALLALL约占约占ALL2ALL25 5，B B细胞型细胞型ALLALL较之较之B B祖细胞型祖细胞型ALLALL有更大的有更大的FSCFSC和和SSCSSC，在，在CD45CD45SSCSSC图上出现在淋巴和单核细胞图上出现在淋巴和单核细胞区域，即区域，即FABFAB标准的标准的L3L3，表型为，表型为CD19CD19、CD20CD20、CD22CD22、CD24CD24且且sIgsIg（多数为（多数为IGMIGM）多
24、数病例）多数病例CD10CD10。但成熟抗原及。但成熟抗原及sIgsIg使之区别于更早的使之区别于更早的B B系系ALLALL，极少数成熟极少数成熟B B细胞细胞ALLALL无无FABFABL3L3形态。形态。T-ALLT-ALL：多数病例有大的：多数病例有大的FSCFSC、SSCSSC，在，在CD45CD45SSCSSC图上可能出现在淋系未成熟细胞和髓系未成图上可能出现在淋系未成熟细胞和髓系未成熟细胞或单核细胞区，多数表现为胸腺亚型，最熟细胞或单核细胞区，多数表现为胸腺亚型，最常见亚型为皮质晚期表达，常见亚型为皮质晚期表达，CD1CD1、CD2CD2、CD5CD5、CD7CD7、CD4/CD
25、8CD4/CD8双阳与极少膜表面双阳与极少膜表面CD3CD3、TdTTdT多为多为阳性。另一常见亚型为皮质早期表达阳性。另一常见亚型为皮质早期表达CD2CD2、CD5CD5、CD7CD7、TdTTdT强表达。髓质期亚型表达强表达。髓质期亚型表达CD2CD2、CD5CD5、CD7CD7、与、与CD3CD3CD4CD4/CD3+CD8+,/CD3+CD8+,很少见很少见TdTTdT表表达。前达。前T T细胞亚型，表达细胞亚型，表达CD7CD7胞浆胞浆CD3CD3且无其它且无其它T T细胞抗原，细胞抗原，T T细胞肿瘤的特征是丧失细胞肿瘤的特征是丧失T T细胞抗原细胞抗原而表现出其它异常抗原组合。而
26、表现出其它异常抗原组合。杂合型白血病：随着流式技术的广泛应用，我们杂合型白血病：随着流式技术的广泛应用，我们发现许多病例并不能严格划分为淋系或髓系，真发现许多病例并不能严格划分为淋系或髓系，真正的双表型病人多为正的双表型病人多为t(9t(9；22)22)或（或（11q2311q23），现在），现在杂合型的误诊率很高。最常导致误诊的原因是在杂合型的误诊率很高。最常导致误诊的原因是在分析中未能排除非白细胞，过度强调弱的非特异分析中未能排除非白细胞，过度强调弱的非特异性结合，忽略了某些抗体缺乏系特异性，最重要性结合，忽略了某些抗体缺乏系特异性，最重要的系特异性抗原在的系特异性抗原在B B系、系、T
27、T系、髓系分别为系、髓系分别为CD22CD22、CD3CD3和和MPOMPO。慢性粒细胞白血病由于慢性期显著的细胞分化，在由于慢性期显著的细胞分化，在CD45CD45SSCSSC图上除了髓系图上除了髓系细胞占主导外，只显示一个正常骨髓像，细胞占主导外，只显示一个正常骨髓像，CMLCML可确诊，可确诊，CMLCML起病与发展相对缓慢，慢性期的持续起病与发展相对缓慢，慢性期的持续1 1年左右最终发年左右最终发展为加速期和急变期。流式细胞技术对急变期亚型的诊断展为加速期和急变期。流式细胞技术对急变期亚型的诊断具有极高价值。直接影响到治疗效果。具有极高价值。直接影响到治疗效果。急变期急变期CMLCML
28、主要表现为髓系，偶为淋系，髓性急变可表现主要表现为髓系，偶为淋系，髓性急变可表现出多种形态包括未分化细胞。淋性急变具典型形态特征，出多种形态包括未分化细胞。淋性急变具典型形态特征，为为CD10CD10B B祖细胞祖细胞ALLALL极少有极少有T T细胞型细胞型ALLALL。慢性淋巴细胞白血病 CLLCLL细胞主要为较正常淋巴细胞稍大的小淋巴细胞。细胞主要为较正常淋巴细胞稍大的小淋巴细胞。免疫分型主要为：免疫分型主要为：SIgMSIgM、SIgDSIgD弱表达，部分患者弱表达，部分患者FMC7FMC7弱弱表达，表达，B B系抗原为系抗原为CD19CD19、CD20CD20、CD43CD43、CD
29、79aCD79a与与CD5CD5共共表达，表达，CD23CD23表达使得表达使得CLLCLL区别于套细胞淋巴瘤，即（区别于套细胞淋巴瘤，即（CLLCLL：CD23CD23，MCLMCL：CD23CD23），），CD10CD10、CD11cCD11c和和CD25CD25、CD20CD20常弱表达，尽管常弱表达，尽管CLLCLL起病慢，但起病慢，但CLLCLL病人的生存率变病人的生存率变化很大，有染色体异常的病人预后不良，最常见的三联体化很大，有染色体异常的病人预后不良，最常见的三联体trisony12trisony12、14q14q、13q13q、11q11q，免疫表型上没有特异的变化。，免疫表型上没有特异的变化。CD38+CD38+预后不好。预后不好。对于免疫表型不典型，特别是积分对于免疫表型不典型，特别是积分4,4,需要进行需要进行CCND-1CCND-1的的免疫组化染色和或利用免疫组化染色和或利用FISHFISH检测检测t(11,14)t(11,14)从而与从而与MCLMCL鉴别。鉴别。谢谢！
