2022年生物化学思考题答案

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1、生物化学思考题答案【篇一：生物化学课后答案】s=txt 第三章氨基酸提要氨基酸是两性电解质。当ph 接近 1 时，氨基酸的可解离基团全部质子化，当 ph 在 13 左右时，则全部去质子化。在这中间的某一ph因不同氨基酸而异，氨基酸以等电的兼性离子h3n+chrcoo-状态存在。某一氨基酸处于净电荷为零的兼性离子状态时的介质ph称为该氨基酸的等电点，用pi 表示。参与蛋白质组成的氨基酸中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸在紫外区有光吸收，这是紫外吸收法定量蛋白质的依据。核磁共振nmr 波谱技术在氨基酸和蛋白质的化学表征方面起重要作用。氨基酸分析别离方法主要是基于氨基酸的酸碱性质和极性大小。常用方法有离子交

2、换柱层析、高效液相层析hplc 等。习题以下氨基酸的单字母和三字母的缩写符号：精氨酸、天冬氨酸、谷氨酰氨、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。见表 3-1表 3-1 氨基酸的简写符号名称 三字母符号 单字母符号名称丙氨酸 (alanine) ala a 亮氨酸 (leucine) 三字母符号单字母符号 leu l m 精氨酸 (arginine) arg r 赖氨酸 (lysine) lys k 天冬酰氨(asparagines) asn n 甲硫氨酸 (蛋氨酸 )(methionine) met精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页

3、，共 20 页天冬氨酸 (aspartic acid) asp d asn 和/或 asp asx b半胱氨酸 (cysteine) cys c谷氨酰氨 (glutamine) gln q谷氨酸 (glutamic acid) glu e gln 和/或 glu gls z甘氨酸 (glycine) gly g 苯丙氨酸 (phenylalanine)pro p 丝氨酸(serine) ser s 苏氨酸 (threonine) thr t phe f 脯氨酸 (praline) 色氨酸(tryptophan)trp w组氨酸 (histidine) his h 酪氨酸 (tyrosine)

4、tyr y异亮氨酸 (isoleucine) ile i 缬氨酸 (valine) val v解： ph = pka + lg20% pka = 10.53 (见表 3-3，p133) 4、计算以下物质0.3mol/l溶液的 ph ：(a)亮氨酸盐酸盐； (b)亮氨酸钠盐； (c)等电亮氨酸。 (a) 约 1.46,(b) 约 11.5, (c) 约 6.05 5、根据表 3-3 中氨基酸的pka 值，计算以下氨基酸的pi 值：丙氨酸、半胱氨酸、谷氨酸和精氨酸。pi:6.02;5.02;3.22;10.76解：pi = 1/2 pka1+ pka2 pi(ala) = 1/2 pi(cys)

5、= 1/2 pi(glu) = 1/2精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页，共 20 页 pi(ala) = 1/2 6、向 1l1mol/l的处于等电点的甘氨酸溶液加入0.3molhcl，问所得溶液的 ph 是多少？如果加入0.3mol naoh以代替 hcl 时， ph 将是多少？ ph ：2.71 ；9.23 7、将丙氨酸溶液400ml 调节到 ph8.0 ，然后向该溶液中加入过量的甲醛，当所得溶液用碱反滴定至ph8.0 时，消耗 0.2mol/l naoh溶液 250ml 。问起始溶液中丙氨酸的含量为多少克？4.45g 9

6、、说明用含一个结晶水的固体组氨酸盐酸盐和1mol/l koh配制 1lph6.5 的 0.2mol/l组氨酸盐缓冲液的方法取组氨酸盐酸盐41.92g(0.2mol)，加入 352ml 1mol/l koh，用水稀释至1l 10、为什么氨基酸的茚三酮反映液能用测压法定量氨基酸？ 11、l-亮氨酸溶液在20cm 旋光管中测得的旋光度为+1.81o 。计算 l-亮氨酸在 6mol/l hcl中的比旋 a 。a=+15.1o 12、标出异亮氨酸的4 个光学异构体的r，s构型名称。 参考图3-15 13、甘氨酸在溶剂a 中的溶解度为在溶剂b 中的 4 倍，苯丙氨酸在溶剂 a 中的溶解度为溶剂b 中的两倍

7、。利用在溶剂a 和 b 之间的逆流分溶方法将甘氨酸和苯丙氨酸分开。在起始溶液中甘氨酸含量为100mg ，苯丙氨酸为81mg ，试答复以下问题：(1)利用由 4 个分溶管组成的逆流分溶系统时，甘氨酸和苯丙氨酸各在哪一号分溶管中含量最高？ 2在这样的管中每种氨基酸各为多少毫克？1第4 管和第 3 管； 251.2mg gly+24mg phe和 38.4mggly+36mg phe解：根据逆流分溶原理，可得：对于 gly ：kd = ca/cb = 4 = q(动相)/p静相 p+q = 1 = (1/5 + 4/5)精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - -

8、- - -第 3 页，共 20 页 4 个分溶管分溶3 次： 1/5 + 4/5 3=1/125+2/125+48/125+64/125对于 phe ：kd = ca/cb = 2 = q(动相)/p静相 p+q = 1 = (1/3 + 2/3) 4 个分溶管分溶3 次： 1/3 + 2/3 3=1/27+6/27+12/27+8/27故利用 4 个分溶管组成的分溶系统中，甘氨酸和苯丙氨酸各在4 管和第 3 管中含量最高，其中： 14、指出在正丁醇：醋酸：水的系统中进行纸层析时，以下混合物中氨基酸的相对迁移率：(1)ile, lys; (2)phe, ser (3)ala, val, leu

9、; (4)pro, val (5)glu, asp; (6)tyr, ala, ser, his. ile lys ；phe, ser ；leu val ala,；val pro ；gluasp ；tyr alaser his解：根据 p151 图 3-25 可得结果。 15将含有天冬氨酸(pi=2.98) 、甘氨酸 (pi=5.97) 、亮氨酸 (pi=6.53)和赖氨酸 (pi=5.98) 的柠檬酸缓冲液，加到预先同样缓冲液平衡过的强阳离交换树脂中，随后用爱缓冲液析脱此柱，并分别收集洗出液，这 5 种氨基酸将按什么次序洗脱下来？asp, thr, gly, leu, lys解：在 ph3

10、左右，氨基酸与阳离子交换树脂之间的静电吸引的大小次序是减刑氨基酸 (a2+) 中性氨基酸 (a+)酸性氨基酸 (a0)。因此氨基酸的洗出顺序大体上是酸性氨基酸、中性氨基酸，最后是碱性氨基酸，由于氨基酸和树脂之间还存在疏水相互作用，所以其洗脱顺序为：asp, thr, gly, leu, lys。第四章蛋白质的共价结构提要精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页，共 20 页蛋白质分子是由一条或多条肽链构成的生物大分子。多肽链是由氨基酸通过肽键共价连接而成的，各种多肽链都有自己特定的氨基酸序列。蛋白质的相对分子质量介于6000 到 10

11、00000 或更高。蛋白质分为两大类：单纯蛋白质和缀合蛋白质。根据分子形状可分为纤维状蛋白质、球状蛋白质和膜蛋白质。此外还可按蛋白质的生物学功能分类。为了表示蛋白质结构的不同组织层次，经常使用一级结构、二级结构、三级结构和四级结构这样一些专门术语。一级结构就是共价主链的氨基酸序列，有时也称化学结构。二、三和四级结构又称空间结构即三维结构或高级结构。蛋白质的生物功能决定于它的高级结构，高级结构是由一级结构即氨基酸序列决定的，二氨基酸序列是由遗传物质dna 的核苷酸序列规定的。肽键 co nh 是连接多肽链主链中氨基酸残缺的共价键，二硫键是使多肽链之间交联或使多肽链成环的共价键。多肽链或蛋白质当发

12、生部分水解时，可形成长短不一的肽段。除部分水解可以产生小肽之外，生物界还存在许多游离的小肽，如谷胱甘肽等。小肽晶体的熔点都很高，这说明短肽的晶体是离子晶格、在水溶液中也是以偶极离子存在的。测定蛋白质一级结构的策略是：1测定蛋白质分子中多肽链数目；2拆分蛋白质分子的多肽链；3断开多肽链内的二硫桥；4分析每一多肽链的氨基酸组成；5鉴定多肽链的n-末端和 c-末端残基； 6断裂多肽链成较小的肽段，并将它们别离开来；7测定各肽段的氨基酸序列；8利用重叠肽重建完整多肽链的一级结构； 9确定半胱氨酸残基形成的s-s 交联桥的位置。序列分析中的重要方法和技术有：测定n-末端基的苯异硫氰酸酯pitc 法，分析

13、c-末端基的羧肽酶法，用于多肽链局部断裂的酶裂解和 cnbr 化学裂解，断裂二硫桥的巯基乙醇处理，测定肽段氨基酸精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 20 页序列的 edman 化学降解和电喷射串联质谱技术，重建多肽链一级序列的重叠肽拼凑法以及用于二硫桥定位的对角线电泳等。在不同生物体中行使相同或相似功能的蛋白质称同源蛋白质。同源蛋白质具有明显的序列相似性(称序列同源 ),两个物种的同源蛋白质，其序列间的氨基酸差异数目与这些物种间的系统发生差异是成比例的。并根据同源蛋白质的氨基酸序列资料建立起进化树。同源蛋白质具有共同的进化起

14、源。在生物体内有些蛋白质常以前体形试合成，只有按一定方式裂解除去部分肽链之后才出现生物活性，这一现象称蛋白质的激活。血液凝固是涉及氨基酸序列断裂的一系列酶原被激活的结果，酶促激活的级联放大，使血凝块迅速形成成为可能。凝血酶原和血清蛋白原是两个最重要的血凝因子。血纤蛋白蛋白原在凝血酶的作用下转变为血清蛋白凝块血块的主要成分。我国在 20 世纪 60 年代首次在世界上人工合成了蛋白质结晶牛胰岛素。近二、三十年发展起来的固相肽合成是控制合成技术上的一个巨大进步，它对分子生物学和基因工程也就具有重要影响和意义。至今利用merrifield固相肽合成仪已成功地合成了许多肽和蛋白质。 习题 1.如果一个相

15、对分子质量为12000 的蛋白质，含10 种氨基酸，并假设每种氨基酸在该蛋白质分子中的数目相等，问这种蛋白质有多少种可能的排列顺序？10100解：1012000/120=10100 2、有一个 a 肽，经酸解分析得知为lys 、his 、asp 、glu2 、ala 以及 val 、tyr 突然两个 nh3 分子组成。当a 肽与 fdnb 试剂反应后得dnp-asp ；当用羧肽酶处理后得游离缬氨酸。如果我们在实验中将a肽用胰蛋白酶降解时，得到两种肽，其中一种lys 、asp 、glu 、ala 、tyr 在 ph6.4 时，净电荷为零，另一种his 、glu 以及 val 可给除 dnp-hi

16、s ，在 ph6.4 时，带正电荷。此外，a 肽用糜蛋白酶降精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页，共 20 页解时，也得到两种肽，其中一种asp 、ala 、tyr 在 ph6.4 时全中性，另一种 lys 、his 、glu2 以及 val 在 ph6.4 时带正电荷。问a肽的氨基酸序列如何？asn-ala-tyr-glu-lys-his-gln-val解：1、n-末端分析： fdnb 法得： asp- ； 2、c-末端分析：羧肽酶法得：-val ； 3、胰蛋白酶只断裂赖氨酸或精氨酸残基的羧基形成的肽键，得到的是以 arg 和

17、lys 为 c-末端残基的肽断。酸水解使asnasp+ nh4+，由已知条件 lys 、asp 、glu 、ala、tyr 可得： asn-( )-( )-( )-lys-( )-( )-val ； 4、fdnb 法分析 n-末端得 dnp-his ，酸水解使gln glu+nh4+ 由已知条件 his 、glu 、val 可得： asn-( )-( )-( )-lys-his-gln-val； 5、糜蛋白酶断裂phe 、trp 和 tyr 等疏水氨基酸残基的羧基端肽键。由题，得到的一条肽asp 、ala 、tyr 结合 3、 4可得该肽的氨基酸序列为： asn-ala-tyr-glu-lys

18、-his-gln-val它们的氨基酸组成分别是arg 、pro 和 phe 、tyr 、lys 、ser 、ala 。试问此七肽的一级结构怎样？它是一个环肽，序列为：-phe-ser-ala-tyr-lys-pro-arg-2糜蛋白酶断裂phe 、trp 和 tyr 等疏水氨基酸残基的羧基端肽键，由已知两肽段氨基酸组成ala 、tyr 、ser 和 pro 、phe 、lys 、arg 可得： -( )-( )-tyr- 和-( )-( )-( )-phe-；3由 2得的两肽段分别与fdnb 反应，分别产生dnp-ser和dnp-lys可知该两肽段的n-末端分别为 -ser- 和-lys- ，

19、结合 2可得：-ser-ala-tyr-和-lys-( )-( )-phe-；4胰蛋白酶专一断裂arg 或 lys 残基的羧基参与形成的肽键，由题生成的两肽段氨基酸组成arg 、pro 和 phe 、tyr 、lys 、ser 、ala 可得： -pro-arg- 和-( )-( )-( )-( )-lys； 综合 2、 3、 4可得此肽一级结构为：-lys-pro-arg-phe-ser-ala-tyr-精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页，共 20 页 6、一个多肽可复原为两个肽段，它们的序列如下：链1 为 ala-cys-p

20、he-pro-lys-arg-trp-cys-arg- arg- val-cys ；链 2 为 cys-tyr-cys-phe-cys。当用嗜热菌蛋白酶消化原多肽具有完整的二硫键时可用以下各肽：1ala、cys2 、val ； 2 arg 、lys 、phe 、pro ； 3(arg2 、cys2 、trp 、tyr) ；4(cys2 、phe) 。试指出在该天然多肽中二硫键的位置。结构如以下图 s-s ala-cys-phe-pro-lys-arg-trp-cys-arg-arg-val_cys s s cys-tyr-cys-phe-cys解：嗜热菌蛋白酶作用专一性较差，根据题中已知条件：

21、1消化原多肽得到ala 、cys2 、val ，说明链 1 在 2 位 cys 后及 11 位 val 前发生断裂， 2 位 cys 与 12 位 cys 之间有二硫键；2由链 1 序列可得该肽段序列为：-phe-pro-lys-arg-；3由 12可知该肽段 (arg2 、cys2 、trp 、tyr) 中必有一cys 来自链 2，另一 cys 为链 1 中 8 位 cys ，即链 1 中 8 位 cys 与链 2 中的一个 cys 有二硫键；4嗜热菌蛋白酶能水解tyr 、phe 等疏水氨基酸残基，故此肽cys2 、phe 来自链 2，结合 3中含 tyr ，可知 3中形成的二硫键为链 1

22、8 位 cys 与链 2 中 3 位 cys 与链 2 中 3 位 cys 之间；4中 cys2 、phe 说明链 2 中 1 位 cys 与 5 位 cys 中有二硫键。 综合 1、 2、 3、 4可得结果。 7、一个十肽的氨基酸分析说明其水解液中存在以下产物： nh4+ asp glu tyr arg met pro lys ser phe精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页，共 20 页并观察以下事实：1用羧肽酶 a 和 b 处理该十肽无效；2胰蛋白酶处理产生两各四肽和游离的lys ； 3梭菌蛋白酶处理产生一个四肽和一个六肽

23、；4溴化氢处理产生一个八肽和一个二肽，用单字母符号表示其序列位np ； 5胰凝乳蛋白酶处理产生两个三肽和一【篇二：生化课后习题答案】学研究的对象和内容是什么？解答：生物化学主要研究:1生物机体的化学组成、生物分子的结构、性质及功能；2生物分子分解与合成及反应过程中的能量变化； 3生物遗传信息的储存、传递和表达；4生物体新陈代谢的调节与控制。 2你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。提示：生物化学是生命科学的基础学科，注意从不同的角度，去理解并运用生物化学的知识。 3说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。解答：生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、磷、硫等 6 种

24、是 解答 蛋白质、核酸、糖和脂的主要组成元素。碳原子具有特殊的成键性质，即碳原子最外层的 4 个电子可使碳与自身形成共价单键、共价双键和共价三键，碳还可与氮、氧和氢原子形成共价键。碳与被键合原子形成 4 个共价键的性质 ,使得碳骨架可形成线性、分支以及环状的多、氧、硫、磷元素构成了生物分子碳骨架上的氨基nh2 、羟基 oh 、羰基 c 、羧基 cooh 、巯基 sh 、磷酸基 po4 等功能基团。这些功能基团因氮、硫和磷有着可变的氧化数及氮和氧有着较强的电负性而与生命物质的许多关键作用密切相关。生物大分子在结构上也有着共同的规律精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 -

25、 - - - - - -第 9 页，共 20 页性。 生物大分子均由相同类型的构件通过一定的共价键聚合成链状，其主链骨架呈现周期性重复。构成蛋白质的构件是 20 种基本氨基酸。氨基酸之间通过肽键相连。肽链具有方向性n 端c 端 ,蛋白质主链骨架呈 肽单 位 重复；核酸的构件是核苷酸,核苷酸通过3, 5 -磷酸二酯键相连，核酸链也具有方向性 (5、3 ), 核酸的主链骨架呈磷酸-核糖或脱氧核糖 重复；构成脂质的构件是甘油、脂肪酸和胆碱，其非极性烃长链也是一种重复结构；构成多糖的构件是单糖，单糖间通过糖苷键相连，淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架均呈葡萄糖基的重复。二 蛋白质化学 1用于测定蛋白质多肽链

26、 n 端、c 端的常用方法有哪些？基本原理是什么？解答： 1 n-末端测定法：常采用2, 4 二硝基氟苯法、 edman 降解法、丹磺酰氯法。 2, 4 二硝基氟苯 (dnfb 或 fdnb) 法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与2, 4 二硝基氟苯2, 4 dnfb 反应 sanger 反应 生成 dnp多肽或 dnp 蛋白质。 ， 由于 dnfb 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此dnp 多肽经酸水解后，只有n 末端氨基 酸为黄色 dnp 氨基酸衍生物，其余的都是游离氨基酸。 丹磺酰氯 (dns)法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯dnscl 反应 生成 dns 多肽或 dns 蛋

27、白质。 由于 dns 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此 dns 多肽经酸水解后，只有n 末端氨基酸为强烈的荧光物质dns 氨基酸，其余的都是游离氨基酸。 苯异硫氰酸脂 pitc 或 edman 降解法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰 酸苯酯 pitc 反应 edman 反应 ，生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中加热时， n 末端的 ptc 氨基酸发生环化，生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来，除去n 末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。 氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶，能从多肽链的 n 端逐个地向里切。精选学习资料 - - - - - - - - - 名

28、师归纳总结 - - - - - - -第 10 页，共 20 页根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量，按反应时间和残基释放量作动力学曲线，就能知道该蛋白质的 n 端残基序列。2c末端测定法：常采用肼解法、复原法、羧肽酶法。肼解法：蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反应中除 c 端氨基酸以游离形式存 在外，其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。 复原法： 肽链 c 端氨基酸可用硼氢 2测得一种血红蛋白含铁 0.426% ，计算其最低相对分子质量。一种纯酶按质量计算含亮氨酸 1.65% 和异亮氨酸 2.48% ，问其最低相对分子质量是多少？因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等，所

29、以亮氨酸和异亮氨酸的残基数之比为： 1.65%:2.48%=2:3，因此，该酶分子中至少含有 2 个亮氨酸， 3 个异亮氨酸。 2 4何谓蛋白质的变性与沉淀？二者在本质上有何区别？解答：蛋白质变性的概念：天然蛋白质受物理或化学因素的影响后，使其失去原有的 生物活性，并伴随着物理化学性质的改变，这种作用称为蛋白质的变性。变性的本质：分子中各种次级键断裂，使其空间构象从紧密有序的状态变成松散无序的状态，一级结构不破坏。蛋白质变性后的表现： 生物学活性消失；理化性质改变：溶解度下降，黏度增加，紫外吸收增加，侧链反应增强，对酶的作用敏感，易被水解。蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体

30、。如果在蛋白质溶液中加入适当的试剂，破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。沉淀机理：破坏蛋白质【篇三：大学生物化学思考题答案】化学研究的对象和内容是什么？精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页，共 20 页解答：生物化学主要研究:1生物机体的化学组成、生物分子的结构、性质及功能；2生物分子分解与合成及反应过程中的能量变化；3生物遗传信息的储存、传递和表达；4生物体新陈代谢的调节与控制。 2你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。提示：生物化学是生命科学的基础学科，注意从不同的角度，去理解

31、并运用生物化学的知识。 3说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。解答：生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、磷、硫等 6 种是蛋白质、核酸、糖和脂的主要组成元素。碳原子具有特殊的成键性质，即碳原子最外层的4 个电子可使碳与自身形成共价单键、共价双键和共价三键，碳还可与氮、氧和氢原子形成共价键。碳与被键合原子形成4 个共价键的性质 ,使得碳骨架可形成线性、分支以及环状的多种多性的化合物。特殊的成键性质适应了生物大分子多样性的需要。氮、氧、硫、磷元素构成了生物分子碳骨架上的氨基nh2 、羟基 oh 、羰基 c、羧基cooh 、巯基 sh 、磷酸基 po4 等功能基团。这

32、些功能基团因氮、硫和磷有着可变的氧化数及氮和氧有着较强的电负性而与生命物质的许多关键作用密切相关。生物大分子在结构上也有着共同的规律性。生物大分子均由相同类型的构件通过一定的共价键聚合成链状，其主链骨架呈现周期性重复。构成蛋白质的构件是20 种基本氨基酸。氨基酸之间通过肽键相连。肽链具有方向性n 端c端,蛋白质主链骨架呈“ 肽单位 ” 重复；核酸的构件是核苷酸,核苷酸通过 3, 5 -磷酸二酯键相连，核酸链也具有方向性 (5、3 ),核酸的主链骨架呈“ 磷酸 -核糖或脱氧核糖”精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 12 页，共 20 页重

33、复；构成脂质的构件是甘油、脂肪酸和胆碱，其非极性烃长链也是一种重复结构；构成多糖的构件是单糖，单糖间通过糖苷键相连，淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架均呈葡萄糖基的重复。 2 蛋白质化学 1用于测定蛋白质多肽链n 端、c 端的常用方法有哪些？基本原理是什么？解答： 1 n-末端测定法：常采用2,4 二硝基氟苯法、 edman降解法、丹磺酰氯法。2,4 二硝基氟苯 (dnfb 或 fdnb) 法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与2,4 二硝基氟苯 2,4 dnfb 反应sanger反应，生成dnp 多肽或 dnp 蛋白质。由于dnfb 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此dnp 多肽经酸水解后，只有

34、n 末端氨基酸为黄色dnp 氨基酸衍生物，其余的都是游离氨基酸。 丹磺酰氯 (dns) 法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯dnscl 反应生成 dns 多肽或 dns 蛋白质。由于dns 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此dns 多肽经酸水解后，只有 n 末端氨基酸为强烈的荧光物质dns 氨基酸，其余的都是游离氨基酸。 苯异硫氰酸脂 pitc 或 edman 降解法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯pitc 反应 edman 反应，生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中加热时，n 末端的ptc 氨基酸发生环化，生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来，除去 n 末

35、端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。 氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶，能从多肽链的n 端逐个地向里切。根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量，按反应时间和残基释放量作动力学曲线，就能知道该蛋白质的 n 端残基序列。2c末端测定法：常采用肼解法、复原法、羧肽酶法。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 13 页，共 20 页肼解法：蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反应中除c 端氨基酸以游离形式存在外，其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。 羧肽酶法：是一类肽链外切酶，专一的从肽链的c末端开始逐个降解，释放出游离的氨基

36、酸。被释放的氨基酸数目与种类随反应时间的而变化。根据释放的氨基酸量摩尔数与反应时间的关系，便可以知道该肽链的c末端氨基酸序列。 2测得一种血红蛋白含铁0.426% ，计算其最低相对分子质量。一种纯酶按质量计算含亮氨酸1.65% 和异亮氨酸2.48% ，问其最低相对分子质量是多少？解答：1血红蛋白：2酶：因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等，所以亮氨酸和异亮氨酸的残基数之比为： 1.65%:2.48%=2:3，因此，该酶分子中至少含有2 个亮氨酸， 3 个异亮氨酸。 3指出下面 ph 条件下，各蛋白质在电场中向哪个方向移动，即正极，负极，还是保持原点？1胃蛋白酶，在ph 5.0 ；2血清清蛋白

37、，在ph 6.0 ；解答： 1胃蛋白酶 pi 1.0 环境 ph 5.0 ，带负电荷，向正极移动；2血清清蛋白pi 4.9 环境 ph 6.0 ，带负电荷，向正极移动；精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 14 页，共 20 页 4何谓蛋白质的变性与沉淀？二者在本质上有何区别？解答：蛋白质变性的概念：天然蛋白质受物理或化学因素的影响后，使其失去原有的生物活性，并伴随着物理化学性质的改变，这种作用称为蛋白质的变性。变性的本质：分子中各种次级键断裂，使其空间构象从紧密有序的状态变成松散无序的状态，一级结构不破坏。蛋白质变性后的表现：?生物学活

38、性消失；?理化性质改变：溶解度下降，黏度增加，紫外吸收增加，侧链反应增强，对酶的作用敏感，易被水解。蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体。如果在蛋白质溶液中加入适当的试剂，破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。沉淀机理：破坏蛋白质的水化膜，中和外表的净电荷。蛋白质的沉淀可以分为两类：1可逆的沉淀：蛋白质的结构未发生显著的变化，除去引起沉淀的因素，蛋白质仍能溶于原来的溶剂中，并保持天然性质。如盐析或低温下的乙醇或丙酮短时间作用蛋白质。2不可逆沉淀：蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质变性而沉淀，不再能溶于原溶剂。如加热引起蛋白质沉淀，

39、与重金属或某些酸类的反应都属于此类。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在，并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已经变性。1测定小肽的氨基酸序列。2鉴定肽的氨基末端残基。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 15 页，共 20 页3不含二硫键的蛋白质的可逆变性。假设有二硫键存在时还需加什么试剂？4在芳香族氨基酸残基羧基侧水解肽键。5在甲硫氨酸残基羧基侧水解肽键。6在赖氨酸和精氨酸残基侧水解肽键。解答： 1异硫氰酸苯酯；2丹黄酰氯； 3脲； ?-巯基乙醇复原二硫键； 4胰凝乳蛋白酶；5cnbr ；6

40、胰蛋白酶。 6由以下信息求八肽的序列。1酸水解得 ala，arg ，leu ，met ，phe ，thr ，2val 。2sanger试剂处理得 dnp-ala 。3胰蛋白酶处理得ala ，arg ，thr 和 leu ，met ，phe ，2val 。当以 sanger试剂处理时分别得到dnp-ala和 dnp-val 。4溴化氰处理得ala ，arg ，高丝氨酸内酯，thr ，2val ，和leu ，phe ，当用 sanger 试剂处理时，分别得dnp-ala和 dnp-leu 。解答：由 2推出 n 末端为 ala；由 3推出 val 位于 n 端第四，arg 为第三，而thr 为第二

41、；溴化氰裂解，得出n 端第六位是met ，由于第七位是leu ，所以 phe 为第八；由 4，第五为val 。所以八肽为： ala-thr-arg-val-val-met-leu-phe。 8当一种四肽与fdnb 反应后，用 5.7mol/lhcl水解得到 dnp-val及其他 3 种氨基酸；当这四肽用胰蛋白酶水解时发现两种碎片段；其中一片用 libh4 下标复原后再进行酸水解，水解液内有氨基乙醇和一种在浓硫酸条件下能与乙醛酸反应产生紫红色产物的氨基酸。试问这四肽的一级结构是由哪几种氨基酸组成的？解答： 1四肽与 fdnb 反应后，用5.7mol/lhcl水解得到 dnp-val ，证明 n

42、端为 val 。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 16 页，共 20 页2libh4 复原后再水解，水解液中有氨基乙醇，证明肽的c 端为gly 。3水解液中有在浓h2so4 条件下能与乙醛酸反应产生紫红色产物的氨基酸，说明此氨基酸为trp 。说明 c 端为 gly trp 4根据胰蛋白酶的专一性，得知n 端片段为val arg lys ，以 1、 2、 3结果可知道四肽的顺序：nval arg lys trp gly c。 9概述测定蛋白质一级结构的基本步骤。解答： 1测定蛋白质中氨基酸组成。2蛋白质的 n 端和 c 端的测定。3应用

43、两种或两种以上不同的水解方法将所要测定的蛋白质肽链断裂，各自得到一系列大小不同的肽段。4别离提纯所产生的肽，并测定出它们的序列。5从有重叠结构的各个肽的序列中推断出蛋白质中全部氨基酸排列顺序。如果蛋白质含有一条以上的肽链，则需先拆开成单个肽链再按上述原则确定其一级结构。如是含二硫键的蛋白质，也必须在测定其氨基酸排列顺序前，拆开二硫键，使肽链分开，并确定二硫键的位置。拆开二硫键可用过甲酸氧化，使胱氨酸部分氧化成两个半胱氨磺酸。3 核酸 1 电泳别离四种核苷酸时，通常将缓冲液调到什么ph ？此时它们是向哪极移动？移动的快慢顺序如何? 将四种核苷酸吸附于阴离子交换柱上时，应将溶液调到什么ph ？ 如

44、果用逐渐降低ph 的洗脱液对阴离子交换树脂上的四种核苷酸进行洗脱别离，其洗脱顺序如何？为什么？精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 17 页，共 20 页解答： 电泳别离 4 种核苷酸时应取ph3.5 的缓冲液，在该ph 时，这 4 种单核苷酸之间所带负电荷差异较大，它们都向正极移动，但移动的速度不同，依次为：umpgmpampcmp； 应取 ph8.0 ，这样可使核苷酸带较多负电荷，利于吸附于阴离子交换树脂柱。虽然ph 11.4 时核苷酸带有更多的负电荷，但ph 过高对别离不利。 当不考虑树脂的非极性吸附时，根据核苷酸负电荷的多少来决定

45、洗脱速度，则洗脱顺序为cmpamp gmp ump，但实际上核苷酸和聚苯乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附，嘌呤碱基的非极性吸附是嘧啶碱基的3 倍。静电吸附与非极性吸附共同作用的结果使洗脱顺序为： cmp amp ump gmp。 2为什么 dna 不易被碱水解，而rna 容易被碱水解 ?解答：因为 rna 的核糖上有 2?-oh 基，在碱作用下形成2?,3?- 环磷酸酯，继续水解产生2?-核苷酸和 3?-核苷酸。 dna 的脱氧核糖上无2?-oh 基，不能形成碱水解的中间产物，故对碱有一定抗性。 3一个双螺旋dna 分子中有一条链的成分a = 0.30 ，g = 0.24 ， 请推测这一

46、条链上的t 和c 的情况。 互补链的 a ，g ，t 和c 的情况。解答： t + c = 1 0.30 0.24 = 0.46 ； t = 0.30 ，c = 0.24 ，a + g = 0.46。 4对双链 dna 而言， 假设一条链中 (a + g)/(t + c)= 0.7，则互补链中和整个 dna 分子中 (a+g)/(t+c) 分别等于多少？ 假设一条链中(a + t)/(g + c)= 0.7，则互补链中和整个dna 分子中 (a + t)/(g + c) 分别等于多少？ 8概述超螺旋dna 的生物学意义。解答： 超螺旋 dna 比松弛型 dna 更紧密，使dna 分子的体积更小

47、，得以包装在细胞内； 超螺旋会影响双螺旋分子的解旋能力,从而影响到 dna 与其他分子之间的相互作用； 超螺旋有利于dna 的转录、复制及表达调控。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 18 页，共 20 页 9为什么自然界的超螺旋dna 多为负超螺旋？解答：环状dna 自身双螺旋的过度旋转或旋转不足都会导致超螺旋，这是因为超螺旋将使分子能够释放由于自身旋转带来的应力。双螺旋过度旋转导致正超螺旋，而旋转不足将导致负超螺旋。虽然两种超螺旋都能释放应力，但是负超螺旋时，如果发生dna 解链即氢链断开，部分双螺旋分开就能进一步释放应力，而dna

48、 转录和复制需要解链。因此自然界环状dna 采取负超螺旋，这可以通过拓扑异构酶的操作实现。 10真核生物基因组和原核生物基因组各有哪些特点?解答： 不同点 : 真核生物 dna 含量高，碱基对总数可达10 11 ，且与组蛋白稳定结合形成染色体，具有多个复制起点。原核生物dna 含量低，不含组蛋白，称为类核体，只有一个复制起点。 真核生物有多个呈线形的染色体；原核生物只有一条环形染色体。真核生物 dna 中含有大量重复序列，原核生物细胞中无重复序列。 真核生物中为蛋白质编码的大多数基因都含有内含子(有断裂基因 )；原核生物中不含内含子。 真核生物的 rna 是细胞核内合成的，它必须运输穿过核膜到

49、细胞质才能翻译，这样严格的空间间隔在原核生物内是不存在的。 原核生物功能上密切相关的基因相互靠近，形成一个转录单位，称操纵子，真核生物不存在操纵子。 病毒基因组中普遍存在重叠基因，但近年发现这种情况在真核生物也不少见。相同点 :都是由相同种类的核苷酸构成的的双螺旋结构，均是遗传信息的载体，均含有多个基因。 11如何看待 rna 功能的多样性 ?它的核心作用是什么?解答： rna 的功能主要有 : 控制蛋白质合成； 作用于 rna 转录后加工与修饰； 参与细胞功能的调节； 生物催化与其他细胞持家功能； 遗传信息的加工； 可能是生物进化时比蛋白质和dna更早出现的生物大分子。其核心作用是既可以作为

50、信息分子又可以作为功能分子发挥作用。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 19 页，共 20 页 12什么是 dna 变性？ dna 变性后理化性质有何变化？解答： dna 双链转化成单链的过程称变性。引起dna 变性的因素很多，如高温、超声波、强酸、强碱、有机溶剂和某些化学试剂如尿素，酰胺 )等都能引起变性。 dna 变性后的理化性质变化主要有： 天然 dna 分子的双螺旋结构解链变成单链的无规则线团，生物学活性丧失； 天然的线型 dna 分子直径与长度之比可达110，其水溶液具有很大的黏度。变性后，发生了螺旋-线团转变，黏度显著降低； 在氯化铯溶液中进行密度梯度离心，变性后的dna 浮力密度大大增加，故沉降系数s 增加； dna 变性后，碱基的有序堆积被破坏，碱基被暴露出来，因此，紫外吸收值明显增加，产生所谓增色效应。 dna 分子具旋光性，旋光方向为右旋。由于dna 分子的高度不对称性，因此旋光性很强，其a = 150 。当 dna 分子变性时，比旋光值就大大下降。 13哪些因素影响tm 值的大小？解答：影响 tm 的因素主要有： g-c 对含量。 g-c 对含 3 个氢键，a-t 对含 2 个氢键，故精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 20 页，共 20 页