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1、微生物学及实验实验指导书第一部分 实验目的微生物学及实验实验课是我院环境科学专业学生必修的一门重要的基础实验课，是学生进入我院实验室的第一门实验课。微生物学及实验实验的目的是使学生掌握微生物学的基本实验方法和技术，正确的使用实验的仪器设备，在学生头脑中建立无菌概念和掌握无菌操作技能是最重要的内容，是学生进行后续课实验和研究的基础。在目前的实验室条件和有限学时的情况下，得到微生物实验技术的基本操作和技能训练，培养学生动手操作能力和创新能力。通过微生物学实验课教学，加深理解和巩固课堂所学的知识，熟悉微生物学实验的基本操作技术，了解微生物实验的基础知识。通过微生物学实验培养学生观察、思考、分析问题、
2、解决问题的能力，养成实事求是、严肃认真的科学态度、创新精神、创新思维和创新能力。本实验指导书主要内容包括：微生物个体和菌落形态观察、染色方法、培养基制备和灭菌、无菌操作、微生物检测和分离、生理生化反应、影响微生物生长的因素和污染物微生物降解实验，水中微生物分布调查等内容。同时也注意和环境微生物学的联系与区别。整个实验课中贯穿了显微镜使用灭菌方法无菌操作微生物菌种分离筛选鉴定、选育微生物代谢作用这一主线。微生物学需掌握的基本操作在实验中得到训练，同时加深了学生对所学微生物学基本概念的理解。实验设计贴近生活，可以大大提高同学们学习微生物学的兴趣。实验内容与目录如下：帜序 奶 号吊实验创名称犯学时专
3、实验输类型音实验晴一冤光学蹦显微绳镜的博使用健及活种性污个泥中盏生物菜相的鸽观察尼3旁基础塘验证妻实验偷实验巷二迷微生潜物的痕染色诊及观洽察糕3市实验驰三格培养妇基的住制备喷和灭印菌垒3止实验优四绪纯种糠微生袜物的铅分离迁、转字种和途培养质3勒实验鲜五您有机您污染乱物质够的生练物降槐解实斑验*妹4忧综合捉性实绝验蹲实验猴六振双歧忠杆菌救口服摔液的残发酵贱制备淹*冲4*注：实验六为选做实验。蝴第二陕部分洲稿微生备物学绕实验起室规贵则盘微生佩物学肥实验侮的对摆象大穷多为席环境戚微生从物，困其中势某些且微生桂物对绘人体名具有忠危害页性，杂因此煎要求怖进入茎实验翁室后埋必须类严格压遵守湾以下理实验段室
4、规巴则：遇1.挪进入杰实验励室应燥先穿尊白大脂衣，鞠离开袄实验士室时愤要脱协下白登大衣恋，反群折放阵回原成处，留不必糖要的肿物品幕不得咐带入誓实验庆室，拒必须锤带入毯的书蠢籍和府文具母等应详放在完指定威的非屋操作溜区，虑以免璃受到叨污染禾。无惯菌操敲作时宅必须筛戴口有罩，枝并不款得开艳电风袭扇。话2荡进入苦实验辆室进坐行实萄验前铲应先撤洗手标，避搜免手扁上的取分秘故物、抗食物乒油、险护肤排用品遥和沾斜染的凝微生肠物等归对实耕验造曾成污叨染。姨3宜实验娇室内搂禁止绝饮食砌、抽割烟，器不得腾高声磨说笑和或乱波走乱捏串。泉4念各种炮实验逮物品舱应按怀指定派地点队存放只，用流过的仪器材辜必须堵经消耻毒
5、处后理，淹禁止充随意抓放置碰。品5病须送搁恒温惯生化染培养差箱培独养的竿物品甲，应溜做好具标记糠（标贺明姓腹名、屠编号抹、日挨期、雅培养嘉时间旺）后捞送到戚指定悦地点尼。给6间实验识过程途中如浸发生乓意外鲜事故枣时，赠禁止作隐瞒礼或自察作主富张不隐按规愤定处蔬理，愚应立遵即报陈告老恰师进太行正厘确的叼处理胃。如船有传址染性农、腐涌蚀性这的材秩料污泻染桌惨面、延地面菜等，推应立粥即用誓0.口2%月-0歉.5杀% 鹊“月84兰”解消毒驼液浸鞭泡污扔染部税位，抢作用井5构10惭mi缓n后万方可旷抹去权。如戒手被皱活菌眯污染乎也应处使用妇上述云消毒罗液浸三泡5侨1港0m蛮in烛或肥合皂清韵洗后妨，再火
6、以自服来水瓦反复跃冲洗走干净掏，必畅要时酸去医沙院就逮医。疾7屿爱护畜室内抢仪器瑞设备锻，严川格按箱操作有规则叶使用狼。节脆约使尊用实校验材女料，宗不慎患损坏惹了器跨材等丢，应漆主动泪报告鼻老师籍进行著处理玩。局8独实验昏完毕吴，应菌物归杆原处玉、将锯台面堆整理么清洁牵，将什实验妨室打缓扫干银净。滚最后喂以肥衣皂洗册手后柔方可冈离开脖实验滴室。迎第三茅部分香 实挽验内姜容贡实验豆一 积 光均学显富微镜妹的使蠢用及堤活性董污泥尚中生省物相厘的观准察鞋实验被项目长性质拌：基葱础验纠证实掀验姑所属吵课程障名称醋：螺微生硬物学化及实拦验粥实验啊计划燃学时勉：3孤学时吹一、彻实验迷目的变悬厅1.标 学倾
7、习并谢掌握仍显微利镜的门原理桶和使低用方飘法。征茂2.亏 复盐习普疤通台睛式显闹微镜咬的结娘构、轿各部聪分的贫功能然和使洲用方防法。帝刮3.骡 观蠢察几古种真旗核微慰生物葛的个侦体形闹态，碑掌握视生物著图的昏绘制亿方法励。壶二、咸显微葛镜的挑基本纷结构慎及油少镜的穿工作罩原理贷鸽现代挤普通陷光学性显微榜镜利纱用目写镜和活物镜责两组巨透镜假系统某来放眨大成旺像，饰故又纱常被末称为影复式双显微委镜，土它们笑由机豆械装恰置和却光学死系统欣两大等部分菜组成传。在福显微防镜的净光学兼系统辜中，谦物镜平的性票能最丸为关嗽键，培它直贱接影植响着食显微利镜的突分辨组率。绩而在杰普通沃光学筋显微种镜通掌常配股置
8、的释几种叙物镜宋中，渗油镜出的放貌大倍杆数最敞大，乡对微犯生物浓学研邀究最鞭为重誉要。边与其猛他物毙镜相置比，甚油镜摇的使隆用比猾较特扣殊，前需在沃载玻枪片与巧镜头铅之间贼滴加崇镜油告，这赵主要冲有如昏下二陡方面韵的原捡因：剥悄1.速 增轿加照糟明亮争度 摊油镜陡的放朵大倍计数可搞达1享00暖床，放朱大倍爱数这它样大悟的镜氏头，冻焦距哥很短海，直到径很事小，装但所烈需要量的光踏照强瓦度却呼最大候。从暮承载让标本菜的玻发片透盼过来集的光爆线，药因介株质密乌度不苍同（职从玻饰片进竭入空浪气，饭再进骂入镜魂头）律，有右些光奉线会储因折毒射或集全反甜射，母不能仁进入于镜头词，致蹲使在缝使用葱油镜蓄时会
9、某因射雅入的匀光线屿较少婶，物与像显压现不齐清。薪所以碗为了梨不使法通过垂的光轻线有舍所损就失，腥在使裂用油酬镜时筐须在抗油镜甘与玻啦片之休间加窜入与歇玻璃贵的折蕉射率名（n限=1茶.5款5）恋相仿户的油蓬镜（责通常咬用香行柏油肠，其第折射规率 证n=斧1.姜52较）。耳2.晒 增瓶加显抖微镜丈的分遍辨率泳倾显微驱镜的维分辨幸率或互分辨发力是父指显歇微镜田能辨撇别两达点之么间的位最小班距离论的能套力。体从物伟理学饰角度艘看，吓光学趣显微歪镜的斗分辨晨率受式光的番干涉惊现象贫及所务用物咱镜性兴能的耗限制巴，分圈辨力集D可滋表示担为：字D=遥遇/2染NA揉，式离中冈仅= 烈光波善波长捷； 培NA韵
10、= 削物镜铲的数萍值孔慎径值若。 披光学先显微牢镜的迫光源叹不可啄能超野出可狮见光也的波盐长范乌围（眉0.喷4-曲0.航7县），以而数少值孔贷径值港则取鱼决于童物镜刘的镜辩口角枕和玻冒片与巾镜头馒间介迟质的最折射赢率，美可表机示为谦：宏NA厚=n舟碌si游n尾密式中蚂勇为光讯线最舌大入险射角蒙的半市数。欠它取阿决于章物镜剥的直企径和傲焦距骄，一扶般来慰说在舌实际巡应用赴中最踪大只市能达系到1胶20川0，协而n限为介全质折钱射率披。由其于香带柏油嘉的折式射率求（1商.5慌2）阅比空院气及暮水的缘折射即率（运分别凑为1斑.0尸 和莲1.耻33戚）要化高，筹因此抹以香蚕柏油谅作为协镜头繁于玻赤片之店
11、间介密质的距油镜背所能崭达到闸的数但值孔内径值皇（N掠A 情一般享在1何.2吼-1搬.4尝）要搁高于民低倍丘镜、仗高倍香镜等五干镜绵（N愉A 韵都低蜂于1山.0根）。贩若以飘可见桌光的碰平均脂波长壤0.仗55俘来计扎算，掘数值箱孔径股通常层在0把.6暂5左葛右的衫高倍哄镜只恐能分氏辨出盼距离捷不小疮于0返.4籍的物值体，找而油炭镜的钉分辨减率却传可达陵到0确.2绑左右伶。赞利用暖显微妨镜的叙放大况原理木观察梨视野坚中的蕉各种衫生物冰，根爱据观陪察到净的生蛇物形沿态、刺运动必方式标、生存物（上细胞挪）结刚构初洒步判经断所怠观察穗到的对生物蛋的种么类。顷三、喇实验石器材源出1.换 菌严种：窑枯草因
12、芽孢肆杆菌低（杜Ba倒ci鸽ll府us绪 s悦ub以ti讨li是s亩）染报色玻膜片标应本、箭青霉券（亮Pe幻ni杯ci际ll膀iu贯m 逮sp谣.荒）的婶水封察片等絮（教哭师可诸根据售具体诸情况历选用期菌种治）、舟活性仙污泥掀混合撕液。键2.丸 溶种液或光试剂面：香坟柏油匹、乙塌醇：淘乙醚板混合庄液 兴3.宪 仪柔器或串其他胀用具赌：显疏微镜有、擦纤镜纸职等。行报四、脸操作帜步骤衣恶1.竹 观旧察前旬的准差备 直（1砍） 拣显微蛮镜的瑞安置到：置姻显微括镜于旷平整喝的实惑验台喷上，停镜座蜘距实塌验台抄边缘剩约3厉-4爪cm便 。初镜检众时姿骗势要细端正天。 般取放榜显微嚷镜时邪应一细手握案住镜
13、字臂，话一手净托住报底座氏，使线显微述镜保打持直牢立、梯平稳黑。切耳忌用斧单手伟拎提辫；且捕不论女使用辨单筒制显微奇镜或与双筒机显微犬镜均膀应双柔眼同急时睁情开观后察，榴以减凉少眼吧睛疲男劳，侍也便闯于边翠观察棉边绘快图或察记录湿。比（2邻） 汁光源灵调节勤：安立装在具镜座竭内的没光源含灯可双通过羡调节葛电压禽以获鉴得适螺当的煤照明猛亮度穴，而催使用绿反光滋镜采肺集自加然光尽或灯揉光作顽为照挡明光检源时江，应楚根据炕光源躬的强桑度及局所用尽物镜抄的放总大倍翻数选男用凹好面或胖凸面踏反光浇镜并鸽调节摩其角熊度，主使视激野内芹的光境线均枣匀，滴亮度铅适宜洒。 沉（3苗）根标据使朵用者吧的个赶人情滚
14、况，静调节铸双筒台显微勺镜的煎目镜榜，双耐筒显禾微镜续的目煌镜间殊距可刺以适赏当调源节，虹而左势目镜芬上一胶般还你配有尘曲光纽度调混节环扛，可团以适乘应眼揪距不合同或洗两眼恼视力洒有差彩异的思不同染观察藏者。鼓钞（4渔） 生聚光曲器数宵值孔及径值律的调纷节：衰调节晃聚光碌器虹械彩光吉圈值某与物套镜的冰数值唐孔径珍值相拿符或讽略低指。有穗些显燃微镜坟的聚中光器但只标嫁有最毫大数庙值孔窗径值也，而令没有滴具体论的光膊圈数盼刻度殖。使极用这命种显恢微镜姑时可烫在样畏品聚贱焦后足取下樱一目平镜，别从镜沈筒中舅一边扮看着车视野叉，一商边缩幼放光定圈，抓调整跪光圈爬的边币缘与屋物镜豪边缘潜黑圈出相切叹或略
15、发小于瓶其边尽缘。辅因为锣各物刊镜的蓝数值轻孔径拳值不膀同，绞所以炉每转奸换一册次物怜镜都张应进相行这扇种调败节。醉在聚汇光器远的数桥值孔朋径值脏确定尚后，填若需仔改变缎光照米强度易，可坟通过错升降掏聚光奔器或购改变的光源唱的亮霉度来吧实现肌，原而则上芳不应者再通叙过虹分彩光捎圈调猎节。尝当然腹，有廊关虹忧彩光守圈、覆聚光煮器高柱度及及照明埋光源沸强度渡的使青用原匹则也晕不是盟固定吼不变甘的，草只要插能获就得良签好的访观察论效果暴，有娃时也撕可根照据不谁同的顿具体镇情况化灵活宅运用合，不托一定巷拘泥巴不变缺。 亡2.锹 显践微观算察 致在目票镜保娃持不摆变的口情况感下，映使用院不同笼放大鸟倍数
16、肝的物处镜所吊能达句到的遍分辨葛率及妖放大头率都午是不掠同的皂。一刷般情虚况下享，特庭别是皇初学两者，有进行像显微党观察数时应芳遵守兄从低寿倍镜宜到高芽倍镜呆再到可油镜品的观置察程租序，套因为慧低倍截数物求镜视扰野相钥对大律，易支发现榴目标答及确奇定检怒查的怎位置依。 坡低倍泄镜观爷察：嫁金黄总色葡晋萄球漠菌染选色标奏本玻第片置难于载您物台在上，益用标杨本夹营夹住巡，移蠢动推匹进器适使观慈察对求象处菊在物茄镜的涝正下乖方。询下降司 1系0玩四物镜付，使脏其接元近标说本，把用粗迅调节微器慢艰慢升沫起镜件筒，童使标聪本在悼视野仗中初润步聚唱焦，应再使令用细蛮调节下器调窜节至请图像重清晰季。通悄过玻枝片夹键推进遇器慢蝴慢移霞动玻队片，拐认真念观察殃
