生物学生物染色剂

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1、生物染色剂斐林试剂:检测可溶性还原糖(葡萄糖、果糖、麦芽糖),沸水浴加热,出现砖红色沉淀。苏丹和苏丹:检测脂肪,苏丹遇到脂肪出现橘黄色,苏丹遇到脂肪出现红色。双缩脲试剂:检测蛋白质,出现紫色甲基绿:检测DNA在细胞中分布,遇到DNA出现绿色。吡罗红:检测RNA在细胞中分布,遇到RNA出现红色。二苯胺:检测DNA的存在,DNA遇到二苯胺,水浴加热出现蓝色。健那绿:检测细胞中的线粒体,线粒体遇到健那绿呈现蓝绿色。碘液:检测淀粉,淀粉遇到碘液出现蓝色。澄清石灰水:检测CO2,二氧化碳可以使澄清的石灰水变浑浊。溴麝香草酚蓝水溶液:检测二氧化碳,二氧化碳可以使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝色变成绿色再变成黄色。

2、重铬酸钾溶液:检测酒精,可以在酸性条件下与酒精发生反应出现灰绿色。龙胆紫或者醋酸洋红:检测细胞核中的染色质,可以将染色质染成深色。高中生物学重要的酶(部分)限制性核酸内切酶:将DNA分子的双链骨架切割,一种限制性核酸内切酶识别一种序列,而且从特定的位点切割。限制性核酸内切酶破坏DNA分子的骨架上的磷酸二酯键。DNA连接酶:将被限制酶切割的双链DNA片断连接起来。DNA连接酶连接DNA分子的骨架上的磷酸二酯键。DNA聚合酶:在DNA复制的时候需要,将单个脱氧核苷酸一个一个的连接起来,DNA聚合酶连接DNA骨架上的磷酸二酯键。解旋酶:将DNA的双螺旋解开,解旋酶破坏的是氢键。(也可以用高温解旋)R

3、NA聚合酶:催化DNA转录为mRNA分子。胰蛋白酶:将动物细胞间隙的蛋白质水解,使组织分散成游离细胞。逆转录酶:催化RNA逆转录形成DNA分子。生物染色剂染色剂名称化学性质作用典型实验备注碘碘化钾遇淀粉变蓝色对细胞内淀粉的检验细胞内后含物质的测定苏丹红棕色粉末,溶于氯仿、冰乙酸,稍溶于乙醚、醇、丙酮、石油醚、不挥发油、热甘油和挥发油、不溶于水对细胞内脂肪及类似物质的检验细胞内后含物质的测定密封保存4铁矾色譜分析试剂胞间连丝观察0.5苏木精氧化苏木精棕红色结晶、有黄绿色金属光泽、易溶于稀NaOH,呈鲜红色,微溶于醇和醚、不溶于苯和氯仿、与金属生成盐类细胞核染色、指示劑改良品红能使粘朊、弹性组织及

4、嗜品红的颗粒染色、中枢神经的核染色、细菌学中用于鉴别结核杆菌细胞有丝分裂的观察最强的核染料碱性品红绿色金属光泽结晶,溶于乙醇、戊醇,微溶于水、溶液红色,不溶于醚品红的盐酸盐1醋酸洋红蝗虫精巢的压片法观察动物精母细胞减数分裂染色体密封避光保存洋红(胭脂红)鲜红色片状,能溶于硼砂液,其碱性溶液为深红色,部分溶于热水,不溶于冷水或稀酸0.1结晶紫绿色有金属光泽结晶或深绿色结晶性粉末,易溶于醇。能溶于氯仿,尚溶于水,不溶于醚密封保存地衣红(苔红素)淡棕红色结晶粉末,溶于醇,丙酮和乙酸中呈红色在弱碱性的溶液中淡蓝色,几乎不溶于水,醚,氯仿,苯,CS2鞭毛媒染剂检验痰液中的弹性组织密封保存医药紫药水番红染

5、液染色导管0.2%考马斯亮蓝R250紫色粉末,微溶于热水和醇,不溶于冷水蛋白质染色凝胶电泳植物细胞骨架的观察密封保存0.2%考马斯亮蓝G250溶于醇和热水,微溶于冷水甲基绿哌洛宁染液核染色剂细菌染色细胞核分离与鉴定密封保存不可久置0.2%(或1%)詹纳斯绿B染液(janus green)棕色、深棕色结晶粉末、溶于水呈蓝色、微溶于醇专一性的染色线粒体超活染色实验存放于冰箱内碱性染料1%中性红溶液深绿色、棕色或灰黑色粉末;溶解度:水4%、无水乙醇1.8%,几乎不溶于二甲苯其水溶液或醇溶液呈红色对液泡的染色有专一性,细胞核、细胞质完全不着色酵母菌活体染色与健那绿共用于血液体外活体染色神经细胞的尼氏小

6、粒染色密封保存弱碱性染料荧光染料酸性品红检定游离氯结缔组织染色二丙酸酯生活性强的细胞紫外线下发出黄绿色荧光分解酶活性吖啶橙橙红色粉末,易溶于水、乙醇、丙酮及热苯,能溶于稀酸使细胞核DNA在荧光显微镜下发出绿色荧光密封干燥保存溴化乙锭深红色结晶或粉末,无气味,有持久的苦味,室温下稳定溶于水、乙醇、甲醇琼脂糖凝胶电泳分离鉴定核酸结构密封避光保存,强致癌物高中几种染色剂的使用原理、使用方法归纳 1。甲基绿和吡罗红:实验原理:甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.利用甲基绿,吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布

7、.试剂及配制方法(1)试剂质量分数为0.9%的NaCl溶液,质量分数为8%的盐酸,乙酸钠,乙酸,蒸馏水,吡罗红甲基绿混装粉。如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉,可以分别购买甲基绿和吡罗红G,然后按A液的第二种方法配制(见下文)。(2)染色剂的配制染色剂A液的两种配制方法第一种方法:取吡罗红甲基绿粉1 g,加入到100 mL蒸馏水中溶解,然后用滤纸过滤,将滤液放入棕色瓶中备用。第二种方法:取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中,取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中,即为A液,放入棕色瓶中备用。(注意:用于核酸染色的是吡罗红G

8、,请不要错买吡罗红B。)染色剂B液的配制方法 B液是一种缓冲液,由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4 g,用蒸馏水溶解至1 000 mL备用;再取乙酸12 mL,用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL,加蒸馏水50 mL,配成pH为4.8的B液(缓冲液)。染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。取A液20 mL和B液80 mL混合,就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。2。龙胆紫和醋酸洋红:染色质(体)容易被碱性染料染成深色。作为染色剂必须具备两个条件:一是具有颜色;二是要与被染组织间有亲和力。染料的颜色

9、和它与组织间的亲和力是由染料本身的分子结构决定的,产生颜色的发色基团和与组织间产生亲和力的助色基团共同决定了染色剂的染色性质。作为染料物质,除了有发色基团外,还需要有一种使化合物发生电离作用的助色基团。染色剂的酸、碱性界定并非由染料溶液的pH值决定,而是根据染料物质中助色基团电离后所带的电荷来决定。一般来说,助色基团带正电荷的染色剂为碱性染色剂,反之则为酸性染色剂。醋酸洋红常被用作核、染色体的固定和染色剂。在煮沸的45醋酸中加洋红使之饱和,再加入微量的铁离子,便使醋酸洋红材料在为醋酸固定的同时,洋红将核或染色体染成红色。用龙胆紫可将染色体染成蓝紫色。3。伊红美蓝:伊红和美蓝是两种苯胺类染料,可

10、以抑制革兰氏阳性菌的生长。同时,这些染料可以区分那些发酵乳糖的微生物。大肠菌群因其强烈发酵乳糖而产生大量的混合酸,使菌体表面带上正电荷,可染上伊红染料,伊红与美蓝结合,菌体被着上深紫色,在含有两种染料呈紫色的培养基上,形成带核心、具金属光泽的菌落。因此可以用伊红和美蓝鉴别革兰氏阴性菌(大肠杆菌)的存在。4。二苯胺:二苯胺是一种非极性芳香族有机分子,有毒,熔点比水低,微溶解于水,易溶解于酒精、冰乙酸等有机溶剂。化学性质活泼,遇光易变色。因此要放置于暗处保存。二苯胺试剂鉴定DNA的原理:DNA分子中的脱氧核糖在酸性环境下生成-羟基-酮基戊醛,再与二苯胺试剂结合显蓝色,颜色的深浅与溶液中的DNA含量

11、成正比。二苯胺试剂的配制:A液:1.5克二苯胺溶解于100ml冰乙酸中,在加入1.5ml浓硫酸(此处浓硫酸的作用可能是作为强氧化剂来维持试剂的稳定),配制好的A液保存在棕色瓶中。B液:体积分数为0.2%的乙醛。由于乙醛是一种还原性试剂,所以实验前不能将A液和B液混合在一起。同时因为二苯胺试剂性质不稳定,极易变色,因此建议现配现用。5。双缩脲:鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的铜离子与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲(H2NOCNHCONH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜

12、色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。6。斐林试剂:由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液,还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖)、果糖和麦芽糖)在加热的条件下,能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此,斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。7.班氏试剂:班氏试剂常用于尿糖的鉴定,其配方与斐林试剂不一样,其配方为:400ml水中加85g柠檬钠和50g无水碳酸钠;50ml加热的水中加入8.5g无水硫酸铜。制成溶液;把溶液倒入柠檬酸钠溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。(2)其反应原理与斐林试剂略有差别。利用斐林试剂鉴定时,

13、斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应生成和可溶性还原糖反应产生砖红色沉淀。而班氏试剂中的产生却是这样的:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生,与柠檬酸钠溶液和溶液混合时,结合,生成与葡萄糖中的醛基反应生成砖红色沉淀。(3)两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈产生,很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠为一对缓冲物质,产生的数量有限,与溶液混合后产生的浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。8、苏丹 配制:取0.1g苏丹,溶解在20ml95%酒精中 作用:鉴定脂肪,脂肪可以被苏丹染成橘黄色(或被苏丹染成红色)。染色剂1、细菌染色

14、剂配方一 齐氏(Ziehl)石炭酸品红染液甲液 取石炭酸5克,溶解在95毫升蒸馏水中。乙液 取0.3克碱性品红,放入研钵中研磨,逐渐加入10毫升95%酒精,继续淹没,使它溶解。将甲液和乙液混合后,摇匀,过滤,装瓶,备用。配方二 罗氏(Loefflers)美蓝染液甲液 取5克美蓝,溶于100毫升95%酒精中,制成美蓝-酒精饱和液。乙液 取氢氧化钾0.01克(或1%氢氧化钾溶液1毫升),溶液也可用于放线菌染色,0.1%浓度可用于酵母菌染色。配方三 革兰氏(Grams)染液用此液染色因先用甲液染色,再加乙液固定,用丙液处理,最后用丁液复染。四种液体的配方如下:甲液(结晶紫液)(1)结晶紫 2克 95%酒精 20毫升(2)草酸铵 0.8克 蒸馏水 80毫升使用钱江(1)、(2)液相混,静置48小时后使用。乙液(碘液)碘 1克 碘化钾 2克 蒸馏水 300毫升将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘,待碘全部溶解后,加水稀释至300毫升。丙液 95%酒精溶液丁液(番红花红液)2.5%番红花红酒精溶液 10毫升 蒸馏水 100毫升2、细菌特殊染色剂配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后,用乙液复染。甲液 取5克孔雀绿,加入少量蒸馏水,使它溶解后,用蒸馏水稀释到100毫升,即成孔雀绿染液。乙液 取番红花

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