蛇床子检测方法

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1、蛇床子含量测定方法（蛇床子素）蛇床子为伞形科植物蛇床Chidium monnieri（L.）Cuss.的干燥成熟果实。2005版中国药典一部采用高效液相色谱法测定其蛇床子素的含量。英文：osthole别名：甲氧基欧芩酚，欧芹酚甲醚提取来源：伞形科植物欧前胡Peucedanum osthruthium（L.）Koch的根，蛇床 Cnidium monnieri（L.） Cusson的果实挥发油等。性质：属香豆素类化合物。 棱柱状结晶（乙醞）、针状结晶（稀乙醇）。熔点8384C。沸点145150C。 溶于碱溶液、甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、醋酸乙酯和沸石油醚等，不溶于水和石 油醚。CAS: 484-1

2、2-8 分子式：C15H16O3 分子量：244.29 药理作用：蛇床子素具有解痉、降血压、抗心律失常、增强免疫功能及广谱抗菌 作用。一、高效液相色谱法2005版中国药典蛇床子含量测定项下：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈- 水（65： 35）为流动相；检测波长为322nm。理论板数按蛇床子素峰计算应不得 低于2500。供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.1g，精密称定，置具塞 锥形瓶中，精密加入无水乙醇25ml，密塞，称定重量，放置2小时，超声处理 （功率300W，频率50kHz） 30分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失 的重量。精密量取上清

3、液5ml,置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀， 即得。HPLC法测定蛇床子及其制剂中蛇床子素的含量，制备样品时一般以50%乙 醇、碳酸氢钠饱和溶液、甲醇等为提取溶剂，按流动相系统分类介绍：A：甲醇-水此系统应用最多，常用的比例为： Ag订enT 1100高效液相色谱仪（美国）；色谱柱为YWG-C18（10m,4.6mmX250mm）；流动相为甲醇-水（80： 20）；检测波长322nm；柱温25C。 Waters高效液相色谱仪；C18色谱柱（Xterra column, pH112, 5p m, 3.9mmX190mm）；流动相为甲醇-水（75： 75）；检测波长322nm；柱温28

4、C。 WATERS 515高效液相色谱仪；色谱柱为Kromasil C18柱（4.6mmX250mm, 5|J m）；流动相为甲醇-水（73 : 27）；检测波长322nm；柱温35C。 日本岛津LC-10A高效液相色谱仪；Polaris C18色谱柱（150mmX4.6mm,5p m）；流动相为甲醇-水（62.5： 37.5）；检测波长为 323nm； 柱 温为30C。 日本岛津LC-10A高效液相色谱仪；流动相为甲醇-水（75： 25）；检测波 长为325nm；柱温为室温。 Waters 2460/2996高效液相色谱仪；流动相：甲醇-水（70： 30）；检测波 长310nm；柱温30C。

5、供试品溶液的制备:取本品5ml,加硅胶（60200目，下同）3g 拌匀，70C烘干，移置硅胶柱（1115cm,lg，干法装柱）上,用石油醚（6090C）- 醋酸乙酯（65： 35）混合溶液100 ml洗脱，洗脱液低温挥干,残渣加甲醇溶解并定 容至5ml,摇匀，即得。（黄志海等，“HPLC法测定复方苦参洗剂中蛇床子素的含 量”中药材,2005, 28 （5）B乙腈-水 Waters 510高效液相色谱仪；色谱柱为Hypersil C18柱（5p m,4.6mmX250mm）；流动相为乙腈-水（54： 46）；检测波长321nm；柱温 为室温。 Waters 510/484/745B 色谱系统；H

6、ypersil C18 分析柱（150mmX4.6mm, 5p m）；流动相：乙腈-水（54： 46）；测定波长321nm；柱温室温。供试品溶液的 制备：精密吸取本品5mL,置分液漏斗中，用乙醚振摇提取3次，每次20mL,合并乙 醚提取液，用5%氨溶液10mL洗涤，静置分层，弃去氨溶液，倾取乙醚上清液。剩余 少量乳化层用乙醚洗涤2次，每次5mL。合并乙醚液,挥干，残渣加乙醇溶解并转 移至25mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过。（朱山寅等，“HPLC法测定 肤阴净洗液中蛇床子素的含量”，中草药，2004，35（5） Waters系列高效液相色谱仪；Kromasil-C18色谱柱（5p m,

7、4.6mmX150mm,北京潮声公司）；流动相为乙腈-水（52： 48）；柱温为室温； 检测波长322nm。C：甲醇-水-磷酸 Waters 600高效液相色谱仪；流动相为甲醇-水-磷酸（375： 125： 1）；检 测波长322nm；柱温室温。 Agilent-1100高效液相色谱系统；色谱柱为Nova-parkC18（250X4.6mm, 4p m ）（大连依利特科学仪器有线公司装填）；流动相：甲醇-1%磷酸溶液（65： 35）；柱温室温；检测波长320nm。供试品溶液的制备：精密量取本品25ml,加 水25ml,用乙醚振摇提取5次，每次20ml,合并乙醚液，蒸干，残渣加石油醚（60 90

8、C）-醋酸乙酯（2： 8）少量溶解，加于中性氧化铝柱（内径2cm,100200目，15g）上，用石油醚（6090C）-醋酸乙酯（2： 8）洗脱，收集洗脱液80ml，于水 溶上蒸干，残渣加甲醇溶解,转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。（游勇基等，“高效液相色谱法测定祛风胜湿酒中蛇床子素的含量”，海峡药学 2002, 14 （5）D：甲醇-水-四氢咲喃LC-10A高效液相色谱仪；色谱柱:Shimpack CLC - ODS （150mmX4.6mm,5p m），保护柱：自填国产 YWGC18H37（20mmX4.6mm,10p m）；流 动相：甲醇-水-四氢咲喃（70： 40： 5

9、）；检测波长317nm；柱温35C。其它条件，如：孙海峰等HPLC测定祛腐二香栓中蛇床子素含量时，采用日 立 638250 型 HPLC 仪。色谱柱为 Elite Hypersil ODS 柱（5m，4.6mmX150mm）； 流动相:甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液（62： 38）；检测波长322nm；柱温25C。叶晓平等用RP-HPLC法同时测定蛇床子中蛇床子素、欧芹属素乙和异茴芹素 的含量。采用Agilent 1100高效液相色谱仪；色谱柱为Vercopark Inertsil N-5 ODS （4.6mmX250mm,5p m）；流动相为1%醋酸-甲醇（梯度为030minl%醋酸

10、 95%5%）；检测波长254nm；柱温30C。李遇伯等立测定骨疏丹中淫羊藿苷和蛇床子素含量，采用P200 II型高效液 相色谱仪；色谱柱为Hypersil ODS2 （250mmX4.6mm,5p m,大连依利特科学仪器 有限公司）；流动相为甲醇-0.4%醋酸水溶液（65： 35）；检测波长为322nm；柱温 为室温。二、薄层扫描法薄层扫描法测定蛇床子素的含量时，常用的展开剂为正己烷-醋酸乙酯和苯- 乙酸乙酯。曹智勇测定冻疮涂膜剂中蛇床子素的含量，薄层色谱条件为：硅胶G薄层板; 以正己烷-醋酸乙酯（6： 1）为展开剂。薄层扫描条件为：入s=320nm,入R=260nm, 线性参数SX=3 ,

11、狭缝1.2mmX1.2mm，双波长反射锯齿形扫描。供试品溶液的制备 方法：精密吸取本品5mL，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液20mL，边加边搅拌，静置 1小时，滤过，残留物再加氢氧化钠溶液15mL提取2次,水浴加热提取5分钟，滤 过,合并氢氧化钠溶液，以盐酸调节pH34,以乙醚提取3次（40、30、30mL）,合 并乙醚液，回收乙醚,残留物以甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，作为供试品溶液。冯盛等测定还春补力片中蛇床子素的含量，薄层色谱及薄层扫描条件：吸附 剂：Merk硅胶G60薄层板；展开剂：苯-乙酸乙酯（30： 1）；显色：于紫外光灯 365nm下检视。采用双波长反射扫描法，入s=325n

12、m,入R=271nm。三、薄层荧光扫描法刘杰采用薄层荧光扫描法测定气血葆口服液中蛇床子素的含量，采用硅胶G 薄层板， 以苯- 醋酸乙酯（30：1）为展开剂，采用荧光线性扫描， 光源为汞灯， K400 滤光片，入 Ex=313nm,狭缝 0.5mmX5mm，扫描速度 5.0mm/s。赵韶华等采用荧光扫描法测定八子补肾胶囊中蛇床子素的含量，采用荧光透 射法线性扫描，激发波长为320nm,滤光片为1号。庞志功等文以p -环糊精（0 -Cyclodextrin,简写为p -CD）包含荧光法对 原药蛇床子中所含蛇床子素进行含量测定， RF540 型荧光分光光度计（日本岛 津），展开剂为苯-乙酸乙酯（9：

13、 1），刮取的蛇床子素斑点用95%乙醇分次洗脱。 激发波长（入ex ）发射波长（入em ）分别为320nm和420nm。四、气相色谱法宁江松采用气相色谱法测定净阴灵中蛇床子素的含量。日本岛津公司生产的 GC- 14B型气相色谱仪；色谱柱为3mmX200cm玻璃柱，担体为80100目的 Chromosorb W（AWDMCS）；固定相为 5%的 SE-30；柱温 250C ；检测器 FID；载气 为氮气；流速为30ml/min；氢气90kPa；空气50 kPa。供试品溶液制备：精密 量取净阴灵50ml,置分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次50m l,合并氯仿提取液， 用无水硫酸钠适量脱水，滤出氯仿液，滤楂用少量氯仿洗涤，合并滤液和洗液， 用 旋转蒸发器低温蒸干，残渣加氯仿使溶解。