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1、名词解释：1 cassette mutagenesis：盒式突变，又称片段取代法（DNA fragment replacement)，利用目标基因序列中适当限制酶切位点，插入各种合适的突变DNA片段，用以取代目标基因中特定DNA片段。2 DNA shuffling：DNA改组，将DNA拆散后重排, 一种模仿自然进化的体外DNA重组的新技术. 这种方法不仅可以对一种基因人为进化,而且可以将具有结构同源性的几种基因进行重组, 共同进化出一种新的蛋白质. 在实验室中把DNA改组与有效的筛选方法结合起来可为多领域的应用快速进化基因.3 inclusion bodies：包涵体：蛋白质在细胞内聚集成没有
2、生物活性的直径约0.1 3.0m的固体颗粒。4 Refolding；重新折叠，复性，自发的从变性的热力学不稳定状态向热力学稳定状态转变，形成具有生物活性的天然结构。5 interferon干扰素是由多种细胞产生的具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的可溶性糖蛋白。6 interleukin白细胞介素:是由多种细胞分泌的一类具有免疫调节活性的细胞因子。这类物质主要是由白细胞合成，且主要介导白细胞间的相互作用。7 cytokines机体各种细胞均能合成和分泌小分子的糖蛋白或多肽类因子，它们能调节机体的生理功能，参与各种细胞的增殖、分化、凋亡和行使功能，这类物质统称为细胞因子8 lymphotox
3、in 淋巴毒素：具有分泌型和结合型两种，均由活化的淋巴细胞产生，是一种具有杀伤肿瘤细胞活性的细胞因子。9 antisense technology反义技术是采用反义核酸分子(人工合成或生物合成的DNA或RNA，它们能与DNA、RNA互补)抑制、封闭或破坏与疾病发生相关的靶基因表达的一种手段。10 siRNAdsRNA (外源或内生)首先被降解为具3端有23nt突出、长2123bp的小分子双链RNA，这种RNA称为小干扰RNA ，dsRNA (外源或内生)首先被降解为具3端有23nt突出、长2123bp 的小分子双链RNA，这种RNA称为小干扰RNA(siRNA)。siRNA通过碱基互补配对识别
4、具同源序列的mRNA，并介导其降解。11 RNAi一些小的双链RNA可以高效、特异地阻断体内特定基因表达,促使RNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰12 subunit vaccine亚单位疫苗：只含有病原体的一种或几种抗原,而不含有病原体的其他遗传信息。13virus like particles病毒样颗粒疫苗，用于免疫的抗原物质模拟了其天然结构，诱导的体液和细胞免疫反应具有更强的针对性，保护效果更好。14live recombinant vaccine：用基因工程的方法对细菌和病毒进行改造,使之成为重组活疫苗(live recombinant vaccine)。这种重
5、组活疫苗可以是非致病性微生物通过基因工程的方法使之携带并表达某种特定病原体的抗原决定簇基因,产生免疫原性;也可以是致病性微生物通过基因工程的方法修饰或去掉毒性基因以后,仍保持免疫原性。15ScFv单链抗体，是将抗体重链、轻链V区通过一段连接肽连接而成的抗体V 区单链片段。其连接肽一般为15 个氨基酸,序列为( Gly4Ser) 3 。16PNAS肽核酸（peptide nucleic acids，PNAs）：是一种以肽为骨架的DNA类似物，它是在将反义寡核苷酸的磷酸糖骨架以肽键取代后得到的一类新型化合物17expression cassette表达盒，是酵母基因表达载体最重要的构件，主要由转录
6、启动子和终止子组成。如果需要外源基因的表达产物分泌，在表达盒的启动子下游还应该包括分泌信号序列。18signal sequence信号序列(signal sequence)，是前体蛋白N端一段1730个氨基酸残基的分泌信号肽的编码区。19chimeric particles嵌合抗体：小鼠McAb V 区与人抗体C区拼接形成“人鼠嵌合抗体”。20staphylokinase葡激酶(Staphylokinase, SAK)是由金黄色葡萄球菌(Staphylocous aureus)溶原性噬菌体所分泌的一种蛋白质。21GMP（for drugs）药品生产质量管理规范，即:good manufactu
7、ring practices for drugs, 简称GMP。问答1生物技术制药设计的基本策略包括哪些？仿真、类似、结构简化、激活、拮抗、拼合、前药转换、软药代谢、 老药新用、化害为利等。2简述基因工程药物研发的基本程序？构建目的基因DNA重组体将DNA重组体转入宿主菌构建工程菌工程菌的发酵外源基因表达产物的分离纯化产品的检验3表达载体需要具备哪些条件？ 能够独立复制.复制能力强,多用松弛型; 具有灵活、便于操作的多克隆位点; 具有方便的筛选标记; 具有强启动子,能为大肠杆菌的RNA聚合酶识别; 具有强终止子; 所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号,即起始密码AUG和SD序列; 一般具有阻
8、遏子,使启动子受到控制。4什么是反义技术？反义药物包括哪些？反义技术(antisense technology)是采用反义核酸分子(人工合成或生物合成的DNA或RNA，它们能与DNA、RNA互补)抑制、封闭或破坏与疾病发生相关的靶基因表达的一种手段。反义药物反义RNA（antisense RNA）、反义寡核苷酸（antisenseoligodeoxynucleotides，ODNs）、肽核酸（peptide nucleic acids，PNAS）、核酶（ribozyme）和DNAzyme 、Aptamer、小干涉RNA(siRNA)。5什么是肽核酸？有何特点和结构特征？肽核酸（peptide
9、nucleic acids，PNAs）：是一种以肽为骨架的DNA类似物，它是在将反义寡核苷酸的磷酸糖骨架以肽键取代后得到的一类新型化合物。结构特征：肽核酸(PNA) 的主链骨架是由N(2-氨基乙基)-甘氨酸与核酸碱基通过亚甲基羰基连接而成的。特点：1. 与核酸的杂交能力强于核酸间的杂交能力；2. 热稳定性高于核酸间的杂交体；3. 抗酶解能了极强。由于其非肽和非核酸的结构特点，蛋白酶和核酸酶均不能降解PNA。PNA可以特异性地与DNA或RNA杂交，形成稳定的复合体。PNA由于其自身的特点可以对DNA复制、基因转录、翻译等进行有针对的调控，同时作为杂交探针大大提高了遗传学检测和医疗诊断的效率和灵敏
10、度。6何谓基因治疗？有哪几类？前景如何？基因治疗是基于修饰活细胞遗传物质而进行的医学干预。细胞可以体外修饰,随后再注入患者体内；或将基因治疗产品直接注入患者体内,使细胞内发生遗传学改变。这种遗传学操纵的目的：预防、治疗、治愈、诊断或缓解人类疾病。1、体细胞基因治疗( somatic gene therapy)治疗基因转移到体细胞内使之表达基因产物,以达到治疗目的；只影响受试者本人,而与后代无关。2、生殖细胞基因治疗(germline gene therapy)将治疗基因转移到患者的生殖细胞或早期胚胎内的一种基因疗法；永久地改变后代的遗传组成,其目的是要预防后代患特定的遗传疾病。前景：体细胞基因
11、治疗临床实验已经开始，生殖细胞Gene治疗正在完善。进行基因治疗必须具备一定条件。选择适合的疾病，清楚疾病的发病机理，Gene的结构和功能。被纠正的基因已克隆，并清楚Gene表达与调控机制与条件。选择适当的受体细胞并在体外有效表达。安全有效的基因转移方法，以及供利用的动物模型。7细胞因子主要包括哪些种类？何谓干扰素？包括哪些类型？如何提高基因工程干扰素IFN-的生物学活性？干扰素(Interferon, IFN)白细胞介素(Interleukin, IL)、集落刺激因子(Colony stimulating factor, CSF)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,T
12、NF)、生长因子(Growth factor, GF)、趋化因子(Chemokine CK)、造血细胞因子(Hematopoietic cytokine)、神经营养因子(Neurotrophic factor)。干扰素是由多种细胞产生的具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的可溶性糖蛋白。可根据产生细胞分为3种类型：白细胞产生的为型；成纤维细胞产生的为型；T细胞产生的为型。根据干扰素的产生细胞、受体和活性等综合因素将其分为2种类型：型(, )和型()。用Ser17替代Cys17，称为丝氨酸干扰素(IFN- Ser)，使大肠杆菌的表达产物能够正确折叠成高活性的IFN-。8基因工程重组激素类药物有
13、哪些主要类型？各自的结构特征如何？胰岛素：胰岛素是胰岛细胞合成和分泌、由A、B两条多肽链借二硫键连接而成、含51个氨基酸残基的蛋白质激素。A链有21个氨基酸残基，B链有30个；两条肽链有A7-B7和A20-B19的Cys之间形成的两对二硫键相连，A链内部还有一对由A6-All的Cys残基形成的链内二硫键。生长激素：191个氨基酸的单一多肽链构成的球形蛋白。在55-165位和182-189位氨基酸之间有两个分子内二硫键，不含糖基。心素钠及利钠多肽：ANP、BNP和CNP都具有一个17个aa的环状结构，其中11个aa位置和种类高度保守，完全一致，被认为是生理功能相似的结构基础。人心钠素(hANP)
14、是由28个氨基酸残基组成的活性多肽，含链内二硫键(Cys7-Cys23)，使ANP分子呈环状结构，除第12位的氨基酸(人为Met，其它为Ile)外，哺乳动物的ANP高度保守。人的BNP分子由32个氨基酸组成；猪和鼠的BNP分别由26和45个氨基酸组成。BNP中两个Cys之间形成二硫键，使分子呈环状结构。现已发现有两种CNP，一种由22个氨基酸残基组成，另一种由53个氨基酸残基组成；它们来自同一个CNP前体，经不同的加工方式裂解而成。与ANP及BNP相似，两种CNP分子中均有二硫键连接形成的环状结构，但没有C端的延伸区。促性腺激素：人黄体生成激素与人FSH具有相同的亚基，而编码亚基的基因位于人的
15、第19号染色体上。人FSH含糖约14，有4个Exon构成的亚基基因位于第6号染色体上，有3个Exon的亚基基因位于第11号染色体上。编码两个亚基的mRNA分别在粗面内质网翻译后，除去信号肽进入内质网。亚基由92个氨基酸残基组成，寡糖链连接在Asn52和Asn78位上；亚基由111个氨基酸组成，寡糖链连接在Asn7和Asn24上。促卵泡激素、黄体生成激素和人绒毛膜促性腺激素均为糖蛋白，包括一个相同的亚基和一个各异的亚基，以及不同的糖链组成。9抗体药物包括那几个层次?比较细胞工程抗体与基因工程抗体的特点？整体水平抗体生成技术、细胞工程抗体生成技术、基因工程抗体生成技术。细胞工程抗体：单克隆抗体，优
16、点理化性状高度均一，生物活性专一，只与一种抗原表位发生反应，特异性强，纯度高，易于实验标准化和大量制备缺点作为异源蛋白,可在体内诱发抗鼠抗体的生成,使其半衰期缩短,药效降低,应用次数越多,药效越小;大剂量鼠源性异源蛋白的使用还可能引起超敏反应;人源杂交瘤细胞系存在建株难、易出现染色体丢失的问题,更存在不能用抗原去免疫人体的问题;McAb 生产成本较高,价格昂贵,难以普及应用;B细胞与骨髓瘤细胞的融合率低,难以获得稀有抗体;作为完整的抗体分子,相对分子质量较大,很难通过血管间隙,吸收率较差。基因工程抗体：利用重组DNA 和蛋白质工程技术,对抗体基因进行加工改造和重新装配,经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子。以1994年W
