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1、ICS 71.040.40DB37G20山 东 省 地 方 标 准DB 37/T 33142018肥料中海藻酸含量测定分光光度法Determination of Alginic Acid in Fertilizer- Spectrophotometric2018-07-12实施2018-06-12发布山东省质量技术监督局发布本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省质量技术监督局提出。本标准由山东化工标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、青岛海大生物集团有限公司、青岛海力源生物科技 有限公司、山东洁晶集团股份有限公司、济南阿波罗甲壳素肥业有限公
2、司、济南高新区阿波罗甲壳素工 程技术研究中心。本标准主要起草人：刘金凤、焦毅、王景超、于晓菲、齐云、刘鹏飞、赵丽芳、商姗姗、于军、张 娟、单俊伟、张守福、林成彬、刘有利。肥料中海藻酸含量测定 分光光度法1 范围本标准规定了采用硫酸-咔唑分光光度法和间羟基联苯分光光度法测定肥料中海藻酸含量的试验方 法。本标准适用于以海藻为原料加工制造的海藻酸肥料。 硫酸咔唑显色法不适用于含硝酸根、葡萄糖等中性糖类物质及其它在比色过程中产生干扰的海藻酸 肥料。间羟基联苯显色法不适用于含硝酸根、腐植酸类物质及其它在比色过程中产生干扰的海藻酸肥料。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引
3、用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法HG/T 2843 化肥产品化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液3 硫酸咔唑显色法3.1 方法原理海藻酸在强酸条件下水解为甘露糖醛酸和古罗糖醛酸, 这两种糖醛酸可在强酸中与咔唑缩合反应 成为紫红色化合物，在550 nm处测定其吸光度，在一定浓度范围内，该化合物的吸光度与糖醛酸浓度成 正比例关系，由此可以用分光光度法测定。3.2 试剂或材料本标准中所用试剂、水和溶液的配制，在未注明规格和配制方法时，应符合HG/T 2843
4、的规定。3.2.1 浓硫酸：分析纯。3.2.2 无水乙醇：分析纯。3.2.3 咔唑-乙醇溶液：P（C HN） =2 g/L。称取0.20 g咔唑（准确至0.0002 g），溶于100 mL无水12 9乙醇中。3.2.4海藻酸钠标准品，纯度299.9%。3.2.5海藻酸钠标准贮备溶液：P（海藻酸钠）=1.000 g/L。准确称取海藻酸钠标准样品0.1 g （准 确至0.0002 g）,置于100 mL烧杯中，用少量水溶解后，全部转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定 容至刻度。3.3 仪器设备3.3.1分光光度计，带有光程为1 cm的吸收池，可在550 nm处测量。3.3.2 分析天平：感量精度
5、为0.0001 g。3.3.3 恒温水浴。3.4 分析步骤3.4.1 试样的制备固体样品缩分至约100 g，将其迅速研磨至全部通过0.50 mm孔径试验筛（如样品潮湿，可通过1.00 mm试验筛），混合均匀，置于洁净、干燥容器中；液体样品经多次摇动后，迅速取出约00 mL，置于洁 净、干燥容器中。3.4.2 试样溶液的制备称取约0.10.5g （精确至0.0002 g）样品，置于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀，必要 时干过滤，得试样溶液A。3.4.3 标准曲线的绘制取6个25 mL刻度试管，准确移取0.0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL海
6、藻酸钠标准 溶液（3.2.5），然后再分别准确加入3.0 mL、2.8 mL、2.6 mL、2.4 mL、2.2 mL、2.0 mL蒸馏水至3 mL 混匀，配成一系列含海藻酸钠分别为0 mg、0.2 mg、0.4 mg、0.6 mg、0.8 mg、1.0 mg的标准工作溶液。 放入冰水浴中，边振荡边缓慢加入浓硫酸（3.2.1） 10 mL （开始要慢，约每秒1滴，待加入一半酸后可 增加至每秒2滴），放入沸水浴中加热20分钟，取出刻度试管，待温度降至80 C，加入咔唑-乙醇溶液0.3 mL,摇匀，室温下放置45 min，在波长550 nm处，用1 cm比色皿，以试剂空白为参比液，测其吸光值， 拟
7、定标准曲线方程。3.4.4 试样的测定3.4.4.1准确移取适量试样溶液A （如海藻酸含量较高可适当稀释）置25 mL刻度试管中，加蒸馏水 定容至3mL，后续步骤从“放入冰水浴中，”与标准系列（3.4.3）同样处理。3.4.4.2 由于一般的海藻酸样品有颜色干扰，对于这种样品需进行空白试验，去除颜色干扰，方法为 除显色阶段用0.3 mL无水乙醇代替咔唑乙醇溶液外，其余操作同试样溶液。3.4.5 空白试验除不加试样外，其他步骤同试样溶液。4 间羟基联苯显色法4.1 方法原理海藻酸经含四硼酸钠-硫酸作用后，可与间羟基联苯反应形成紫红色化合物，在波长520nm处测定 其吸光度。在一定浓度范围内，该化
8、合物的吸光度与海藻酸含量呈线性关系，由此可以用分光光度法测 定。4.2 试剂和溶液4.2.1四硼酸钠-硫酸溶液：0.0125 mol/L四硼酸钠的浓硫酸溶液。准确称取十水合四硼酸钠0.478 g， 置于100 mL烧杯中，用50 mL浓硫酸溶解后转移到100 mL容量瓶中，用浓硫酸洗涤烧杯内壁，并如容 量瓶中重复洗涤2次，最后用浓硫酸定容至100 mL。4.2.2氢氧化钠溶液：P(NaOH) =5 g/L。称取5 g氢氧化钠，用蒸馏水稀释至1 L。4.2.3间羟基联苯：P (C12H100) =1.5 g/L。称取间羟联苯0.15 g，溶于100 mL氢氧化钠溶液(4.2.2) 中，置于棕色瓶
9、中，阴暗处保存。4.2.4 海藻酸钠标准品：同3.2.4。4.2.5海藻酸标准溶液：P(海藻酸钠)=0.100mg/mL。准确吸取海藻酸标准贮备溶液(3.2.5) 5.00 mL至50 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。使用前配置。4.3 仪器和设备4.3.1分光光度计，带有光程为1 cm的吸收池，可在520 nm处测量。4.3.2 分析天平：感量精度为0.0001 g。4.3.3 恒温水浴。4.3.4 恒温振荡器。4.4 分析步骤4.4.1 试样的制备同3.4.1。4.4.2 试样溶液的制备同3.4.2。4.4.3 标准曲线的绘制取海藻酸钠标准溶液(4.2.5) 0 mL、0.1 mL、0.
10、2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL于试管中，用蒸 馏水补加至0.5 mL。冰浴预冷后加入3.0 mL四硼酸钠-硫酸试液，配成一系列含海藻酸钠分别为0 mg、 0.01 mg、0.02 mg、0.03 mg、0.04 mg、0.05 mg的标准工作溶液。振摇混合，沸水浴5 min，以冰浴冷 却至室温后，加入50 yL间羟基联苯(4.2.3)，混匀，室温放置10 min后，在520 nm波长处，用1 cm 比色皿，以试剂空白为参比液，测其吸光值，拟定标准曲线方程。4.4.4 试样溶液的测定4.4.4.1准确移取适量试样溶液A (如海藻酸含量较高可适当稀释)，与标准系列(4. 4.3
11、)同时同样 处理。4.4.4.2 由于一般的海藻酸样品有颜色干扰，对于这种样品需进行试验空白，去除颜色干扰，方法为 除显色阶段用50 UL氢氧化钠溶液代替间羟联苯溶液外，其余操作同试样溶液。4.4.5 空白试验除不加试样外，其他步骤同试样溶液。5 结果的表述：以质量分数表示的海藻酸含量错误!未找到引用源。数值以 %表示，按式(1)计算：(m - m ) x 100+ 0mx1000xVx0.8839x100(1)式中：mi从标准曲线查得试样溶液中海藻酸质量的准确数值，单位为毫克（mg）； m0空白中海藻酸质量的准确数值，单位为毫克（mg）； m试样质量，单位为克（g）；V移取试样溶液A的体积，单位为毫升（mL）； 1000毫克转换为克的系数；0.8839海藻酸钠换算为海藻酸的系数。6 允许差平行测定结果和不同实验室测定结果的允许差应符合表1要求表1 平行测定结果和不同实验室测定结果的允许差海藻酸含量，%平行结果测定的绝对差值，%不同实验室测定结果的绝对差值，%3W2.0W0.2W0.42.0V3W5.0W0.5W1.05.0V3W10.0W1.0W2.0310.0W2.0W4.0
