primer50已知基因序列设计引物

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1、Primer5.0目的基因序列引物设计GATTtCTTGGCTTtATATATCTTGTGGAaAGGaCGAAACACCGTGCTCGCTTCGGCAGCAC ATATACTAGTCGACGGGTCTAGACAAGATGCTGGGTAATGACACCAAGCTGGGACTGGTACAGAAAGTCAGAGAACACTTACAGAACGGCATCTAGACAATGATGCTGGGTAATA CACTTACAGAACGGCATCTAGATGCCGTTCTGTAAGTGTTTGTTGAATGAATGAGTGTT GAACAAACTGCTAAGGTATCTT ACAAGGTAG从中扩增出目的基因片段

2、(绿色的部分):首先:将绿色部分复制到primer5.0引物设计软件中,ctrl+v用鼠标右键不管用选择As is后,惦记OK出现:GeneTank N evS e quenc eTranslation:Function:Triiislatioii$:Active Se(|uence:HeaderAAACACC&TG61AATGATGCTQ121GAACGCATCTAGACAATGA181TCT&TAAGTGTTTGTTGAAT|HwSeer PruieESResultsDirect Select:10204LIt.ii7LIPrimer: nr1巫|沁希:三匚匚TTTC匚TGCTTTGTGG

3、匚心匚GAGCG s I I I II I I I II I I I II I I I II I I I II厂幺曰itrimers1L弊4n 25图中右上角标记Pr imR:其中惦记S合成的是上游引物,A是下游引物,点击S后出现出现这些OG-AAAG-M 匚 GJUU 匚 ACCGT GC丁匚 &C就是上游引物,选中后ctrl+c复制到引物合成单中,发给公司,下游引物:回到点击A出现Prer PruieEPrimer:3k0 Search宙只姿皿寸Eri-ersDirect Select:1L弊4n匚匚TTT匚匚TGCTTTGTGG匚心匚GAGCG sI I HI I I I II I I

4、I II I I I II I I I II5 1 GGAAAGG 直C tAAACkCC GTGC TCGCTTC GGCAGCACATATAC TAGT C GAC GGGT C TAi;ACAAT GATGCT &GGTAAT GACACC 3i i ii Iii iiI i i i iI i ii i Ii i i i I i ii i I i i ii Iii iiI i i i i Ii i i i I i i i i I iii iI i i ii Iii iiI i i i iIi i ii I i i1101201 301 401 501 601 701 80GKDE TPC

5、S LP. QHIY -S T G LD NDA&-H QHairpiiiDimerFalsePrimingCrossDimerMost Stable Hair|)iii:AG =kcalsAnol (3 Hairpin)Sense|FoundI|Found |None |Ifound |r CACAAAGDAGGAAAGG S IIILcgtgctc&c 3Antiksense| NodeNone |LRatingSe| lloLengthTimFCGC%AGkcalsAnolActivitypg-ocDegeneracyTa OptCSense861257XGM-52.S31.611002

6、-573L60.034.91Product2425776048.7用前后调节框,如下,将序列向右移动移到最后,得到下图3 AACTTGTTTGACGA7TCCAIAGJUkA SI I I I I I I I I I III I III I III I IIILAT OGT G-TICAJLC AAAjCT GCT Arc TTTr I: | li I b I | i i a d p I I I I I i i i | i i I i I m I rid是丄打! 220! 30注意xu-THC -匚tp显示的是3一5,ctrl+cctrl+v后悔发现序列变成5-3 了,这是软件的好处,因为公司引物合成就是从53的其实上下游引物只是相对的,将得到的引物序列填表后发给公司就好了

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