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1、脯氨酸的检测方法1. 原理样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。2. 应用范围本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。别论证。本方法在其它方面的应用必须经过个3. 试剂及仪器3.1 脯氨酸3.23%茚三酮 2-甲氧基乙醇溶液（0.3g 茚三酮溶解于10ml 2- 甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）3.32-甲氧基乙醇3.4蚁酸 (96%) ，即甲酸3.5异丙醇（ 2- 丙醇）水溶液：水：丙醇 = 1：13.615ml 旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）3.7分光光度计，检测吸光度设定在520nm 下
2、3.81cm 玻璃比色皿4. 样品准备4.1 苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20 的水进行稀释。其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L( 见稀释表 )。浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。蜂蜜的稀释，采用 2.5g 蜂蜜加 50ml 水。将样品在分析之前离心5min 左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。4.2 原果汁稀释表稀释比例颜色空白期望值样品类型Apple苹果1:1yesApricot杏21:1yesAronia野樱莓1:1yesBanana 香蕉1:1yesBlackberry 黑莓1:1ye
3、sCherry樱桃1:1yesCranberry 蔓越莓1:1yesGrape 葡萄16:1yesGrapefruit 柚子21:1noGuava 番石榴3:1yesKiwi 泥猴桃1:1yesLemon 柠檬21:1noLime酸橙21:1noMandarin中国柑桔21:1noMango 芒果1:1yesNectarine油桃21:1noOrange 柑桔21:1noPapaya 番木瓜1:1yesPassion Fruit 西番莲1:1yesPeach桃6:1yesPineapple菠萝1:1yesPlum李子7:1yesPrune西梅16:1yesRaspberry悬钩子（树梅）5:1
4、yesStrawberry草莓1:1yesTangerine 橘子21:1noTomato 番茄1:1yes5. 标准溶液的制备5.1 脯氨酸贮备液（ 500mg/L ）： 0.0500g 脯氨酸加水定容至 100ml 。此贮备溶液冷藏存放，每月重新配置一次。5.250mlg/L 准工作溶液：每天配置一次，取5ml 脯氨酸贮备溶液，用水定容至50ml 。用该溶液作为分析用的标准溶液。6. 结果判定6.1 将离心管编号，并设计样品编号与离心管标号的对照表格。按下表，向离心管内移取相应溶液：* 颜色水样品空白标准空白茚三酮溶液1.00 mL-1.00 mL1.00 mL2-甲氧基乙醇-1.00 m
5、L-标准溶液-0.50 mL-样品0.50 mL0.50 mL-水-0.50 mL蚁酸0.25 mL0.25 mL0.25 mL0.25 mL6.2 深颜色的果汁或者稀释度较低的果汁中的色素物质，将会对检测结果的判定产生影响。为纠正因此产生的结果偏差，使用颜色空白对照实验。对苹果汁、梨汁、浆果汁和蜂蜜采用颜色空白对照实验。50mg/l 标准溶液的水空白对照实验用于柑橘汁及其它高稀释倍数的果汁检测。6.3盖紧离心管，充分摇匀（处理茚三酮时要戴乳胶手套）。同时将所有离心管放入沸水浴中加热15 分钟。将离心管放在室温水浴中冷却5 分钟。向每个离心管中加入5ml 异丙醇水溶液（ 1： 1）。充分混匀后
6、，用1cm 比色皿，在520nm 下测量每管溶液的吸光度(A520)（对于有絮状物的样品，如芒果，将样品离心后，把上清液用移液管小心转移至比色皿中，直接用离心管倾倒会将絮状物混到上清液中）。每次测量之前，要先用待测溶液将比色皿润洗一下，倒掉润洗液，然后再进行测量。在35 分钟的冷却时间，内将所有待测溶液的A520检测完毕。 应戴乳胶手套，以避免茚三酮溶液滴溅到皮肤上，茚三酮溶液滴溅到皮肤上，会产生深紫色的色斑。7.计算如果 50 mg/L 标准溶液的 A 值 0.600 ，结果需经实验室主管的核准，才能上报结果，否则样品可能需要进行复测脯氨酸 (mg/L) = (A 样品 / A 标准溶液 )
7、 x CC 是标准溶液的浓度（通常为50 mg/L ）对于脯氨酸含量的水果来说，结果必须要乘上稀释倍数（稀释后体积果汁和蜂蜜来说，结果必须乘以稀释倍数（稀释后体积ml/ 预案重量/原体积）对于浓缩g）结果用 mg/kg表示8. 参考资料AOAC官方分析方法出版时间15th Ed. (1990)方法编号979.20工作表脯氨酸样品编号#_Date_样品类型_Analyst_样品标准_稀释度 (w/v)_稀释度 (v/v)_离心管编号 #_ _ _ _ _空白管号 _A 520吸光度_ _ _ _ _A 520空白吸光度_ _A 520_ _如果 50 mg/L 标准溶液的A 值 0.600 ，结
8、果需经实验室主管的核准，样品脯氨酸_mg/L or mg/kg_mg/L or mg/kg_mg/L or mg/kg_mg/L or mg/kg_mg/L or mg/kg_mg/L or mg/kg_mg/L or mg/kgPROLINEPrincipleThe prepared sample is treated with ninhydrin.Proline in the sample reacts to form an orangederivative.Absorbance is measured at 520 nm versus appropriate reagent blank.
9、ApplicabilityThis method is applicable to the determination of proline in honey, fruit juices and concentrates.Other applications of this method must be individually validated.Reagents and EquipmentProline脯氨酸3% ninhydrin in 2-methoxyethanol (0.3 g of ninhydrin dissolved in 10 mL 2-methoxyethanol issatisfactory; make up fresh daily)3%的茚三酮在2-甲氧基乙醇（0.3 g 茚三酮溶解在10 mL 2- 甲氧基乙醇；每天补充新的）2-methoxy ethanol2-甲氧基乙醇formic acid (96%)蚁酸 (96%) （甲酸）aqueous isopropanol(2-Propanol) - diluted 1+1水：异丙醇1： 115 mL screw cap glass centrifuge tubes (be sure that there are no chips on the rim
