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1、近年来已有大量临床研究及5项著名的大规模冠心病(CHD)一级或二级预防试验(4S,WOS,CARE,LIPID,AFCAPS等多中心协作计划)都明确指出强化 降脂治疗降低血清 总胆固醇(TC)与低 密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)可以预防CHD临床事件(如心肌梗死、不稳定性心绞痛,猝死)的发生,减少CHD死亡。有人主张 在CHD的众多危险因素中,应将高LDL-C放在致病作用的中心位置1,在CHD防治方案中,已把降低LDL-C水平作为重点治疗目标2。 但是仅仅测定LDL-C只能不完全地估计LDL的 致动脉粥样硬化(As)危险。现在普遍重视LDL亚组分 型式,Austin提出LDL以 大而轻的颗粒为
2、主时称为A型,以小而密的颗粒为主时称为B型3,不少横向与纵向研究均已证明B型LDL与CHD的关系最 密切。小LDL颗粒易进入动脉壁,在 内膜下被氧化修饰,而LDL发生氧化修饰是 As病变形成的关键步骤。 脂蛋白(a)Lp(a)可以看作一种特殊的 LDL,它的 脂质组成与LDL相同,也含有 一分子载脂蛋白apoB100,但是它还含有一个与血凝有关的apo(a)分子。它被认为是一种受遗传决定的As危险因素。近年研究指出apo(a)的致As作用与LDL密切相关,因此不妨将Lp(a)与CHD的关系和LDL结合起来讨论。 基于上述理由,笔者介绍小LDL,氧化修饰LDL和Lp(a)三者与CHD联系的某些新
3、观点。 LDL亚组分,小而密LDL(sLDL) 血脂(异常)三联症sLDL的产生与高甘油三酯(TG)血症有关,其代谢机制已如前文介绍3。新 近Grundy氏4将sLDL增多、TG增高与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低三 者同时 存在称为“血脂(异常)三联症”(lipid triad),更确切地反映“致As性脂蛋白谱(ALP)”5,是冠心病的主要脂类危险因素。各种脂蛋白在代谢上是有相互联系的,临床上 不应孤立地看待sLDL增多,同样也不应孤立地看待TG升高。血脂三联症也与代 谢综合征有联系,这种病人往往有胰岛素抵抗,非胰岛素依赖性糖尿病,轻度高血压与躯干肥胖等。TG增高代表富含TG的 脂蛋白
4、(TRL)增多,其中包括强致病性的中间密度脂蛋白(IDL)及残余颗粒增多。最好把高TG作为冠心病危险性增高的一种标志,除了IDL等直接致病外,它可以通过sLDL生成、HDL-C下降,影响凝血因子等多方面起到致As作用。因此治疗上需要在广泛的代谢水平上来处理,如治疗胰岛素抵抗、减肥、增加运动量等。 sLDL的特性及其与As发生的关系根据实验、临床与流行病学资料,Hokanson等6将sLDL与As之间的关系归纳为:(1)sLDL与其他 致As脂蛋白(如高TG等)有代谢上的联系。(2)sLDL增多常与胰岛素抵 抗综合症和内脏脂肪贮积综合症相关。(3)sLDL颗粒的氧化易感性增强。(4)sLDL对L
5、DL受体的亲和力低,故在血循环中存留时间延长。(5)sLDL流入动脉内膜增多。(6)sLDL与动脉壁蛋白聚糖的结合力强。As的发生是上述多种因素协同作用的结果。 降脂治疗对LDL亚组分的影响根据家族性As治疗研究的10年随访资料,表明CHD临床疗效与LDL亚组 分变化有密切关系。用它汀类药物做强化治疗后,血脂改变不仅在于LDL-C和apoB水平下降,而且LDL的物理性质有明显改变,即LDL颗粒变得大、轻与漂浮(buoyancy)。临床资料的多因素分析显示LDL颗粒变大变轻与冠状动脉As病变的退缩(regression)及管腔阻塞程度的减轻(改变37%,P0.01)高度相关。因为疗效基于LDL亚
6、型改变,则临床上监测LDL颗粒大小是推测病人能否从治疗中获益的有效手段。 !-empirenews.page-以apoB测定评估sLDL水平的设想 在正常情况下sLDL颗粒数少于大颗粒LDL,但在B型LDL时,sLDL增多远远超过大LDL颗粒,比较这两种颗粒的组成,可见sLDL含胆固醇比例相对较少,而ap oB较高。综合若干文献资料,B型LDL与A型LDL的个体相比,前者血浆apoB比后者高12%23%6。所以B型LDL患者可以表现为LDL-C不高而apoB增高的现象。每一个大或小LDL颗粒及TRL颗粒中都只含有一 分子apoB100,但因LDL在循环中的半寿期远比TRL长,在任何时候由LDL
7、携带的apoB都在总apoB的90%以上,因此测定apoB可以代表LDL颗粒数。Sniderman1认为高TG而apoB正常者(表示sLDL颗粒不增加),CHD危险不增加;高apoB而TG正常或增高者,CHD危险性高。横向与纵向研究都支持LDL颗粒数是比LDL-C(或TC)更好 的CHD危险指标。Sniderman1根据魁北克心脏研究,指出高apoB是最重要的CHD危险因素,有人甚至主张以apoB代替LDL-C与TG作为第一线的CHD危险的筛选指标7。 选择代表LDL的指标的意见代表LDL水平的指标主要是LDL-C与apoB,apoB反映LDL的颗粒数,而LDL-C指LDL所携带的胆固醇量,可
8、以反映胆固醇代谢状态。作者以为在没有sLDL临床实用的测定方法以前,LDL-C与apoB同时测定结合TG水平有助于估计LDL亚组分的类型。国外有人主张首先测apoB是因为apoB测定方法简单,有统一的国际标准,且不一定要求用空腹血,而LDL-C数据多由Friedewald公式计算得来,容易出现误差。但我国情况不同,目前广泛存在apoB商品试剂质量差及操作方法不合理问题,难于准确测定apoB,也没有以大量人群调查为基础的参考值作为apoB高低划分的依据,何况目前血脂异常诊断标准与治疗目标中,主要参照LDL-C水平,尚未采用apoB。 LDL亚组分的测定方法 测定方法主要依据LDL颗粒的物理性状,
9、即在超离心中的漂浮率(密度),电泳分离不同大小的颗粒,电镜测定颗粒直径等6。这些方法都不适用于大批量血清标本及自动化分析。看来比较可行的是非变性梯度凝胶电泳法,及新近报道的用凝胶柱作高效液相色谱法8。简单实用的分析方法有待开发。 氧化修饰的LDL(oxLDL) “oxLDL”的涵义 各类脂蛋白都可以被氧化修饰,动脉内膜下巨噬细胞清道夫受体所能大量摄取的是oxLDL及少量氧化的Lp(a)。有人提出:“何谓oxLDL?”的质疑9,因为oxLDL一词是含糊的,它既不反映LDL天然氧化修饰的不同形式,也不反映氧化修饰的程度,它组 成一种相当复杂的 生化系统。在体外实验中,LDL的氧化可以是细胞介导的(
10、如内皮细胞、单核-巨噬细胞与平滑肌细胞),也可以是Cu、Fe等金属离子介导的。体外用过渡金属离子或用紫外线氧化所得oxLDL的特征是不同的,前者破坏LDL与其受体(B/E受体)的识别,但后者则否。Cu离子可以使LDL氧化修饰至足以被清道夫受体所摄取的程度。 氧化修饰的形式LDL中的蛋白质与脂质都可以被氧化,典型的是脂质过氧化10,LDL中的脂肪酸有50%为氧化易感性强的多烯酸。多烯酸的 过氧化是触发LDL其他成分氧化的共同途径。活性氧使多烯酸发生分子重排形成共轭双烯,进一步产生醛基(丙二醛MDA,4羟壬烯醛HNE,己醛等)及多聚物。氧化过程中并有溶血卵磷脂形成。LDL中的胆固醇也易氧化,主要生
11、成7-酮胆固醇,7及7羟胆固醇和环氧胆固醇,我们也曾检出5、6二羟胆固醇及25羟胆固醇11。LDL中的抗氧化剂(如-生育醇)被消耗。Cu离子可以修饰apoB分子结构,甚至使apoB裂解成多肽或碎片。apoB的反应性氨基酸残基(如赖氨酸、组氨酸)能与脂质过氧化物(如MDA)交联,在有As病变的动脉组织中可以出现MDA-LDL的自家抗体。来自血管As病灶的LDL样提取物可以识别oxLDL抗体,但天然LDL则不能。也有人报道人血浆中可以检出能识别oxLDL某些抗原位点的循环抗体。 !-empirenews.page-LDL氧化修饰及受体识别 LDL氧化程度可以理解为连续的、不同层次的。体外实验可以设
12、计将LDL氧化到不同水平,但体外氧化所见能否沿用于体内氧化是非常可疑的。LDL氧化修饰主要发生在动脉内膜下,初步形成轻度修饰的LDL(mm-LDL),这种LDL还保留LDL受体的识别能力,但氧化程 度高的LDL及Cu氧化的LDL123下一页 则不被LDL受体所接受。进一步氧化的LDL可依次被巨噬细胞的下列受体所识别9:Fc受体亚类(Fc rR-B2),清道夫受体B类(CD36及SRB1)及清道夫受体A类(SRA及SRA)。oxLDL与其抗体的复合物由Fc受体清除,oxLDL的聚合物则能被巨噬细胞所吞噬。 oxLDL的致As作用机制9,10,12 内膜下产生的 mm-LDL能诱导内皮细胞表达单核
13、细胞粘附因子,单核细胞分泌化学趋化蛋白(MCP-1)及巨噬细胞群落刺激因子(M-CSF),使单核细胞粘附于内皮,进而移至内膜下,M-CSF使它分化成组织巨噬细胞,后者在活性氧的参与下进一步使 mm-LDL氧化成oxLDL。巨噬细胞的清道夫受体可以大量摄取oxLDL而不受细胞内胆固醇含量的调控,从而导致胆固醇积聚而逐渐形成泡沫细胞。巨噬细胞分泌的生长因子和白细胞介素(IL-1b)能刺激平滑肌细胞增生。oxLDL还有细胞毒性,可以抑制内皮舒张因子(EDRF),引起内皮功能障碍。现在认为一氧化氮(NO)即内皮细胞合成的舒张因子,是维持冠状动脉舒张的关键物质,它能抑制LDL氧化,但oxLDL能直接或间
14、接使NO灭活13,从 而加速LDL氧化 。mm-LDL还能促使血小板集聚和内皮细胞合成纤溶酶元激活抑制物(PAI-1),对凝血系统产生不良影响。 oxLDL测定方法 根据LDL氧化修饰后物理、化学性质的改变而设计,详见Devarej的综述10。例如测定多烯酸产生的共轭 双烯(234 nm吸光度增加),测定LDL硫代巴比妥酸反应物质代表生成的过氧化脂质,利用oxLDL有负电荷增加的特点而测电泳相对移动度,测定胆固醇氧化产物(气相与高效液相色谱),测定内源性抗氧化剂的减少,SOS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定apoB裂解,测定oxLDL自身抗体,测oxLDL生物学特性等许多方法。这些方法都有一定局限性,都
15、只能从某个侧面检测oxLDL的存在。 现在认为血循环中oxLDL易于被清除,其浓度极低,自然状态下氧化修饰的程度大概比较轻微,目前尚无足够特异与灵敏的测定方法。文献中比较合理的方法是监视共轭双烯,探测LDL的氧化易感性14,新近也有测定LDL中基线共轭双烯的报道15,也有测定oxLDL的自家抗体的。 Lp(a)的致As作用 Lp(a)的生理功能未明,正常人Lp(a)水平极低或近于零者也不出现病态。有许多病理学及实验研究资料支持Lp(a)与As发生有关的学说16,17,其依据是:(1)竞争性抑制纤溶酶原激活,干扰纤溶酶原与纤维蛋白、细胞外基质、内皮细胞、单核细胞及血小板结合,从而延缓血块溶解,延
16、缓血管壁损伤的修复,加速As进程。apo(a)转基因小鼠体内实验也证明有血块溶解的抑制。(2)apo(a)可以与LDL相互作用形成聚合物,其机制可能是apo(a)分子Kringle区域与apoB的脯氨酸残基结合,因此延长在内膜下的存留时间,增加氧化修饰机会,终于被巨噬细胞摄取,促进泡沫细胞形成。国内外文献中均有apo(a)存在于As病灶中的报道18。(3)Lp(a)能激活转化生长因子(TGF),刺激平滑肌细胞增生并提高其活力,而LDL则否。(4)Lp(a)在内膜下易于与细胞外基质(蛋白聚糖,纤维连结蛋白)结合。因为Lp(a)的apoB部分更易与蛋白聚糖结合,游离的apo(a)部分能诱捕更多的富含胆固醇的颗粒,使巨噬细胞大量摄取经受体介导的LDL和Lp(a)。 !-empi