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1、二、植物全磷的测定（一）钒钼黄吸光光度法1、适用范围。适合于含磷量较高的植物样品的测定（如籽粒样品）。2、方法原理植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸，其吸光度与磷浓度成正比，可在波长400490nm处用吸光光度法测定。磷浓度较高时选用较长的波长,较低时选用较短波长。此法的优点是操作简便,可在室温下显色，黄色稳定，在HNO3、HClO4和H2SO4等介质中都适用，对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格，干扰物少，在可见光范围内灵敏度较低，适测范围广（约为120mg/LP）,故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的
2、测定。3、试剂（1）钒钼酸铵溶液:25.0g钼酸铵（NH4）6Mo7O24H2O,分析纯溶于400mL水中，必要时可适当加热，但温度不得超过60C。另将1.25g偏钒酸铵（NH4VO3,分析纯）溶于300mL沸水中，冷却后加入250mL浓HNO3（分析纯）。将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵（溶液中，不断搅匀，最后加水稀释至1L，贮于棕色瓶中。（2）NaOH溶液（c=6mol/L）:24gNaOH溶于水，稀释至100ml。（3）二硝基酚指示剂（p=2g/L）:0.2g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100ml水中。（4）磷标准溶液p（P）=50mg/L:0.2195g干燥的KH2PO4（分析纯）
3、溶于水，加入5ml浓HNO3,于1L容器瓶中定容。4、主要仪器设备。分光光度计。5、分析步骤准确吸取定容，过滤或澄清后的消煮液520ml（V2,含P0.050.75mg）放入50ml容量瓶中，加2滴二硝基酚指示剂，滴加6mol/LNaOH中和至刚呈黄色，加入10.00ml钒钼酸铵试剂，用水定容（V3）。15min后，用1cm光径的比色槽在波长440nm处进行测定，以空白溶液（空白溶液消煮液按上述步骤显色），调节仪器零点。校准曲线或直线回归方程:准确吸取50mg/LP标准液0,1,2.5,7.5,10,15ml分别放入50mL容量瓶中，按上述步骤显色，即得0,1.0,2.5,5.0,7.5,10
4、,15mlP的标准系列溶液,与待测液一起进行测定，读取吸光度，然后绘制校准曲线或求直线回归方程。6、结果计算p（P）xV3x（V1/V2）x10-4ro（P）=m式中：ro（P）植物磷的质量分数,%;p（P）从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度,mg/L;V1消煮液定容体积，ml;V2吸取测定的消煮液体积，ml;V3显色液体积，ml;m称样量,g;10-4将mg/L浓度单位换算为百分含量的换算因数。7、注释（1）显色液中p（P）=15mg/L时，测定波长420nm;520mg/L用490nm。待测液中Fe3+浓度高应选用450nm，以清除Fe3+干扰。校准曲线也应用同样波长测定绘制。
5、（2）般室温下,温度对显色影响不大，但室温太低（如vl5C）时,需显色30min。稳定时间可达24h。（3）如试液为HC1,HC1O4介质，显色剂应用HCl配制;试液为H2SO4介质,显色剂也用H2SO4配制。显色液酸的适宜浓度范围为0.21.6mol/L，最好是0.51.0mol/L。酸度高显色慢且不完全,甚至不显色;低于0.2mol/L易产生沉淀物，干扰测定。钼酸盐在显色液中的终浓度适宜范围为1.6x10-310-2mol/L,钒酸盐为8x10-52.2x10-3mol/L。4、此法干扰离子少。主要干扰离子是铁，当显色液中Fe3+浓度超过0.1%时，它的黄色有干扰，可用扣除空白消除。（二）
6、钼锑抗吸光光度法1、适用范围适合于含磷量较低的植物样品的测定（如茎秆样品等）。2、方法提要植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。在一定酸度下，待测液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸，后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物，可用吸光光度法测定。3、试剂（1）6mol/LNaOH溶液（2）0.2%二硝基酚指示剂（3）2mol/L（1/2H2SO4）硫酸溶液:5.6mL浓H2SO4加水至100mL（4）钼锑贮存液：浓H2SO4（分析纯）126ml缓慢地注入约400ml水中,搅拌,冷却。10.0g钼酸铵（分析纯）溶解于约60C的300ml水中,冷却。然后将H2SO
7、4溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中,再加入100ml0.5%酒石酸锑钾（KSbOC4O61/2H2O,分析纯）溶液，最后用水稀释至1L,避光贮存。此贮存液含钼酸铵为1%,酸浓度为c（1/2H2SO4）=4.5mol/L（5）钼锑抗显色剂:1.50g抗坏血酸（C6H8O6，左旋，旋光度+21+22,分析纯）溶于100ml钼锑贮存液中,此液须随配随用,有效期一天,冰箱中存放,可用35天。（6）磷标准工作液p（P）=5mg/L:吸取100mg/LP标准贮存液稀释20倍，即为5mg/LP标准工作溶液，此溶液不宜久存。4、主要仪器设备。同上5、分析步骤吸取定容过滤或澄清后的消煮液2.005.00ml（V2，含P
8、530ug）于50ml容量瓶中,用水稀释至约30ml,加12滴二硝基酚指示剂，滴加6mol/LNaOH溶液中和至刚呈黄色，再加入1滴2mol/L（1/2H2SO4）溶液，使溶液的黄色刚刚褪去，然后加入钼锑抗显色剂5.00ml,摇匀，用水定容（V3）。在室温高于15C的条件下放置30min后,用1cm光径比色槽在波长700nm处测定吸光度，以空白溶液为参比调节仪器零点。校准曲线或直线回归方程：准确吸取p（P）=5mg/L标准工作溶液0,1,2,4,6,8ml,分别放入50mL容量瓶中,加水至30ml，同上步骤显色并定容，即得0,按0.1,0.2,0.4,0.6,0.8mg/LP标准系列溶液，与待测液同时测定,读取吸光度,然后绘制校准曲线或直线回归方程。6、结果计算:同1。7、注释根据分光光度计性能,可选用650890nm波长处测定,880890nm处灵敏度高
