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1、肉桂醇脱氢酶(CAD)检测试剂盒(肉桂酸比色法)简介：肉桂醇脱氢酶(cinn amyl alcohol dehydroge nase, CAD)是催化香豆醛形成松柏醇的 酶。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，属于细胞木质素合成途径中间 的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水 果石细胞含量提高其品质提供依据。Leagene肉桂醇脱氢酶(CAD)检测试剂盒(肉桂酸比色法)检测原理是以肉桂酸、NADP 作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光 度计检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物
2、组织的裂解液 或匀浆液、血清等样品中内源性的肉桂醇脱氢酶活性，尤其适用于检测水果中肉桂醇脱氢 酶活性，25T可以检测23-24个样本。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其 他用途。组成：编号名称-一一TE041925TStorage试剂(A): CAD Lysis buffer50ml4C避光试剂(B): CAD Assay buffer20ml4C避光试剂(C): NADP2支-20C使用说明书1份自备料：1、蒸馏水2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、低温离心机5、水浴锅或恒温箱6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、准备样品： 植物样品：取植物组织或水果中层果肉置于液氮中
3、迅速研磨或匀浆，加入预冷的CADLysis buffer，离心，留取上清液，冻存，用于肉桂醇脱氢酶的检测。 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定， 冻存，用于肉桂醇脱氢酶的检测。 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用CAD Lysis buffer进行适当匀 浆，离心，取上清液，冻存，用于肉桂醇脱氢酶的检测。 高活性样品：如果样品中含有较高活性的肉桂醇脱氢酶，可以使用CAD Lysis buffer稀 释进行恰当的稀释。2、酉己制CAD Assay buffer工作液：取1支NADP完全溶解于CAD Assay buffer，即为 CAD
4、Assay buffer工作液。该NADP工作液4弋保存1周，-20C保存3个月。3、加样：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。 如果样品中的CAD活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检 测最好能设置2平行管，求平均值。加入物(ml)对照管测定管CAD Lysis buffer0.2一待测样品一0.2CAD Assay buffer 工作液0.80.84、CAD检测：立即以分光光度计，比色杯光径1.0cm ,以对照管为对照，测定测定管的 吸光度(A测定)。准确孵育后，立即加入CAD终止液终止反应(备选方案)，以分光光度 计，比色杯光径1.
5、0cm ,以对照管为对照，测定测定管的吸光度(A测定詁。注意：加入 CAD终止液终止反应不是必须步骤，可准确孵育后直接以分光光度计，比色杯光径 1.0cm ,以对照管为对照，测定测定管的吸光度(A测定詁。计算：CAD活性单位的定义：在该实验条件下，每1min吸光度变化所需酶量为一个活性单 位。组织样本 CAD(U)=(A 测定 1-A 测定 o)xVT/(WxVsX0.01xt)式中：A测定产孵育10min后测定管的吸光度值A测定0二加入CAD Assay buffer工作液后立即测定的测定管吸光度值W=组织样本的重量(g)VT二提取酶液的总体积(ml)VS=测定时所用酶液体积(ml)液体样本
6、CAD(U)=(A测定1-A测定。)/(001xt)式中：A测定产准确孵育10min后测定管的吸光度值A测定二加入CAD Assay buffer工作液后立即测定的测定管吸光度值 t二反应时间注意事项：1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。2、CAD酶液提取时，注意低温操作，防止酶活性，亦可-20弋保存。3、CAD终止液具有一定腐蚀性，请小心操作。4、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：6个月有效。相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液（10 x PBS，无钙镁）CM0004LB培养基DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液（4% PFA）NROOO1DEPC 处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液（强）TC1167尿素（Urea）检测试剂盒（脲酶波氏比色法）
