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1、自来水中细菌总数的鉴定摘要：水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。良好的饮用水细菌总数因500CFU/mL则不适宜饮用，我国饮用水卫生标准（GB574985）规定每毫升水样细菌总数37培养24h不得大于100个，每升水中总大肠杆菌群数小于3个。本实验采用营养琼脂培养基对水中细菌进行培养，通过对菌落的计数从而来测定自来水是否符合饮用水的微生物方面的卫生标准。关键词： 自来水 细菌总数 营养琼脂培养基 平板菌落计数技术 菌落 0.引言：微生物学指标是评价饮用水生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的
2、保证。水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。1各种天然水中常含一定数量的微生物。水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。自来水指通过水处理厂净化、消毒后生产出来的符合国家饮用水标准的供人们生活、生产使用的水。我国饮水卫生标准（GB574985）规定每毫升水样细菌总数37度培养24个小时不得大于100个，每升水中总大肠杆菌群数小于3个。微生物学指标是评价水中生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的保证。近年来随着环
3、境污染加重我国水质不断下降，给居民饮水安全带来隐患。因此，我们想通过测定自来水中的细菌总数，了解水质情况，呼吁人们保护水资源。测定水样是否符合饮用水的微生物方面的卫生标准，通常包括下列两个项目：细菌总数测定和总大肠杆菌群的测定。本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数，通过此实验我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。2 1.材料与方法本次实验于2010年10月27日下午，在太原师范学院微生物实验室进行。实验前先将培养皿，吸量管，三角烧瓶放入高压蒸汽灭菌锅内，0.1MPa，121，20min灭菌。再将营养琼脂3 4与蒸馏水按33g100
4、0mL配制，将配好的培养基在电炉上煮沸35min,冷却备用。对自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，用灭菌三角烧瓶接取水样，迅速地进行分析。用灭菌的吸量管吸取1mL水样，注入小灭菌培养皿中，再倾注约为培养皿1/3高已溶化并冷却到4550的培养基，盖上大培养皿，左手持培养皿在桌面作平面旋转摇动，是水样与培养基充分混匀。另取一个小灭菌培养皿，不加水样，倾入等量的培养基，作空白对照。5待培养基凝固后，倒置于37，培养24h,进行菌落计数。2.结果与分析经过24h的培养，实验培养基上出现了85个菌落，对照培养基出现了0个菌落。所以自来水中细菌总数是85 CFU/mL。本次实验
5、数据是参考单璐、赵志洁小组的，由于营养琼脂培养基在培养皿中与自来水混匀时有严格的温度限制4550，在将培养基分配给单璐组后，培养基温度降低、泡沫增多，导致我组3个培养皿中培养基与自来水无法均匀混合。24h后，培养基上出现菌苔，无法计数，并且培养基上的泡沫也影响计数。如果再对培养基进行加热，会使培养基受到空气中细菌的污染。3.讨论在本实验中的有的空白对照培养基上长了细菌菌落，说明此培养基被污染了。通过此实验，我们可知平板菌落技术法是测定水样中细菌个数比较方便的方法，但它也存在不准确的因素比如在数菌落时，菌落太小且又处于培养基内部这样就不能观察到菌落从而影响结果，又如在培养过程中由于细菌之间的相互
6、抑制也会使计数菌落减少。因此，在制作培养基及培养的过程中要严格杀菌，并严格按照实验步骤认真操作，从而使得结果更加精确。6 倒置培养基时应降温至45 ，以免温度过高烫死大肠杆菌。切记不能过低，防止培养基凝固。倾注培养基后要将平皿在桌面上做匀速旋转，将培养基和自来水样摇匀，在培养基中观察时可见一些菌苔就是平皿没有摇匀的结果。倾倒完培养基后没有迅速盖上另一个培养基，使空气中的杂菌落入，也会使实验结果受到影响。本次实验取自来水样时，由于自来水管是塑料的无法用火焰灼烧灭菌，水样可能会被自来水管口的杂菌污染，自来水样置于锥形瓶中暴露在空气中的时间过长，遭空气中的杂菌污染。由于培养基是倒置的，所以可以观察到
7、绝大多数的细菌着生在培养基表面。这是由于菌种在固体培养基上借助重力作用而形成的，有利于菌落计数。4.结论 根据国家饮水卫生标准（GB574985）规定：每毫升水样细菌总数37度培养24个小时不得大于100个，每升水中总大肠杆菌群数小于3个。此实验自来水中的细菌个数为86个，符合国家标准，故该自来水水质合格。7本组实验没成功，出现了菌苔。说明自来水样与培养基没能充分混匀，其原因是因为操作不当，培养基温度过低，以至于培养基一倾倒于培养皿中就立即凝固。本组实验还出现了泡沫，说明在制造培养基的过程中,加热搅拌容易产生泡沫,而泡沫难于除去。倒平皿时泡沫随着培养基各种成分一起进入平皿,这对观察菌落生长干扰
8、很大8。原因是泡沫中有空气，而空气中也含有细菌，其中的细菌在培养24h后，也能产出菌落，从而影响计数。其他小组的对照培养基上出现菌落，而对照组中的菌落数应为0个。说明在实验操作过程中被污染，主要是因为有杂菌混入，杂菌来源可能：培养皿灭菌不充分；灭菌后在空气中放置又落入杂菌；培养基倾入培养皿后没有立即加盖；配置培养基时反复升降温（没有立即转移使培养基凝固），使一些杂菌产生抗性。高压蒸汽灭菌锅使用时要注意：切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故；灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。压力一定要降到0时，才能打开排气阀，开
9、盖取物。9营养琼脂培养基制备时要注意：琼脂培养基的熔化时因不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦，沸腾后继续加热3 5分钟。10通过对本次实验操作，不仅仅学习水样的采取方法、检测水中细菌总数的方法，同时了解检测水中细菌总数和总大肠杆菌群各种方法的原理及其应用中的优、缺点,并且对水质评价的微生物学卫生标准有所了解,明白其应用的重要性。 水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大。细菌总数是指1mL水样在普通营养琼脂培养基中，37经24h培养后，所生长的菌落数。本实验应用平板菌计数测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种
10、条件下，使水中所有细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是近似值11。总大肠杆菌群指数高，表示水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染。测定总大肠杆菌群的方法有多管发酵法、滤膜法等等。多管发酵法包括：初发酵法、平板分离和复发酵试验，其多被水厂等单位采用。 参考文献：1 罗雪云等，食品卫生微生物检验标准手册 北京：中国标准出版社，19952 顾孔珍 钱纯 罗岳平.用R2A Agar培养基提高饮用水中细菌总数的检出率J.净水技术,2004,23(1):42-43.3 郝士海，现代细菌学培养基和生化试验手册北京：中国科学技术出版社，19924 白晓慧,戈
11、志坚,邢一,范新元.两种培养基对饮水机出水中细菌总数的测定效果比较J.中国环境检测.2006,22(6):22-24.5 李根生 干燥培养基恩德制造及应用上海：上海科学技术文献出版社，19946 张秀绘，苏筱军，李庆平，等生活饮用水细菌学指标的影响因素环境与健康杂志，2006，23：1521537 陈声明 刘丽丽 微生物学实验研究方法 北京：人民教育出版社，19828 张斌巧除制造培养基时产生的泡沫四川农业科技1994.10.289 10 沈萍 陈向东主编.微生物学实验.（第4版）.高等教育出版社.2007.1111 徐飞，王开元，江迎春.水中细菌总数测定方法的优化研究J.今日科技.2007，01：46-47.
