《疫苗杂菌计数和病原性鉴定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《疫苗杂菌计数和病原性鉴定（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、杂菌计数和病原性鉴定以及沙门氏菌检验只允许非病原性杂菌 如果允许制品中含有一定数量非病原菌，应进一步作杂菌计数和病原性鉴定。一、杂菌计数1、（药典）每批有杂菌污染的制品至少取样3瓶，用普通肉汤或蛋白胨水分别按头（羽） 份数作适当稀释，接种含4%血清及0.1%裂解血球全血的马丁琼脂培养基平皿上，每个 样品接种平皿4个，每个平皿接种0.1ml （禽苗的接种量不少于10羽份，其他产品的接 种量按各自的质量标准），置37C培养48小时后，再移至25C放置24小时，数杂菌 菌落，然后分别计算杂菌数。如果污染霉菌，亦作为杂菌计算。任何 1 瓶制品每头（羽） 份（或每克组织）的杂菌应不超过规定。超过规定时，
2、判该批制品不合格。2、操作：A. 马丁琼脂和蛋白胨水（或普通肉汤）配制B. 37C温箱放置血清（先无菌取出10ml）和全血（避免加入培养基中出现絮状物）C. 待马丁琼脂在65C左右，加入4%血清和0.1%裂解血球全血，混匀，铺板（每批对应 12+1 平板）D. 倒扣平板于37C干燥半小时E. 用蛋白胨水或普通肉汤（即营养肉汤）稀释至200羽份/0.1ml,每个平皿接种0.1ml， 每批产品至少取3份样品，每份样品接种4个平板，铺匀。F. 将平板至37C培养48小时，再移至25C培养24小时。G. 计算菌落数平均值，在要求范围内可进行下一步病原性鉴定。附注：裂解血球全血：-15分装冻存，使用前取
3、出（网上）培养基鉴定：将培养基放37C温箱内培养24小时后，证明是否无菌，同时用 已知菌种检查在此培养基上生长繁殖及生化反应情况，符合要求者方可使用。禽苗胚苗不超过 1 个非病原菌细胞苗无菌猪苗猪瘟兔源75个/头份猪瘟细胞源 无菌二、病原性鉴定对杂菌进行病原性鉴定需氧菌：（药典）将所有污染需氧性杂菌的液体培养管的培养物等量混合后，移植1 支 TG 管或 马丁（肉）汤，置相同条件下培养24 小时，取培养物，用蛋白胨水稀释100倍，皮下 注射0.2ml体重在18-22g的小鼠3只，观察10日。厌氧菌：（药典）将培养物继续培养96小时。在65C水浴30分钟后，等量混合，移植1支TG 管或厌气肉肝汤，
4、相同条件下培养24-72小时。如果有菌生长，则将培养物接种1.0ml 体重350-450g的豚鼠2只，观察10日。判定：需全部存活，否则制品不合格。三、禽沙门氏菌（Salmonella）检验（药典）将样品划线接种麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板2个，置37C培养18-24小时 （若无可疑菌落，继续培养24-48小时），挑选无色、半透明、边缘整齐、表面光滑并 稍突起的菌落，用0多家1沙门菌银子血清作玻片凝集试验。如果为阳性，即为沙门氏 菌污染，该批制品判不合格。1麦康凯琼脂MAC:检验革兰氏阴性菌因成分含胆盐，故抑制革兰氏阳性菌（但也抑制少数革兰氏阴性菌） 利于大肠杆菌和沙门氏菌生长。2. 沙门氏菌
5、G-无芽孢杆菌，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙 门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。兼性厌氧菌，生长温度范围为 1042C，最适生长温度为37C，适宜pH为6.87.8，对营养要求不高，在普通培养 基中生长旺盛，胆盐可促进其生长。麦康凯琼脂平板上菌落无色半透明；SS琼脂平板上 无色半透明、中心黑色或几乎全部黑色附注：1、马丁琼脂氯化钠2.5g琼脂13g猪胃消化液500ml牛肉汤500ml除琼脂外，将上述成分混合，调节pH值至7.6-7.8,加入琼脂，加热溶解，以卵白 澄清法（注）除去沉淀，分装,116C灭菌30-40分钟，灭菌后培养基的pH值应为7
6、.2-7.6。 该培养基适用于细菌类疫苗的检验。2、普通肉汤（营养肉汤）3.1g营养肉汤干粉加入100ml蒸馏水，116C灭菌30分钟，灭菌后培养基的pH值 应为 7.2-7.4。3、蛋白胨水（药典）蛋白胨1.0g 或 10g氯化钠5g纯化水加至 1000ml将上述成分混合，加热溶解，放至室温，调节pH值至pH7.0-7.4，分装，116C灭 菌30-40分钟，灭菌后培养基pH值为6.8-7.2。1%蛋白胨水（含蛋白胨10g）用于细菌 类疫苗活菌计数等项目的检验，0.1%蛋白胨水（含蛋白胨1.0g）用于检验稀释液。4、麦康凯琼脂蛋白胨20g、乳糖10g、氯化钠5.0g、胆盐5.0g、1%中性红溶液7.5ml、琼脂11-13g， 加至 1000ml 纯化水。 116 灭菌 20-30 分钟，灭菌后培养基 pH 为 7.0-7.45、SS 琼脂116C灭菌20-30分钟
