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1、利用发光细菌查验水中有毒有害物质(精)利用发光细菌查验水中有毒有害物质纲要：水源污染引起了一系列的问题，第一是水质查验，特别是水中有毒有害物质的查验问题，水中有毒有害物质能够经过各样水质剖析方法予以检出，而后对之进行对人体健康的综合评论，检测水中有毒有害物，有时采纳生物方法，如鱼毒理学生物查验，水蚤试验等；也有采纳近代遗传毒理学的方法，如Ames致突变试验1，姐妹染色体互换试验等等，则可供给水质对人体健康影响的信息，本文则介绍利用发光细菌查验水中有毒有害物质的基来源理，查验方法和评论标准。重点词：水质查验发光细菌有毒有害物质一、发光细菌的存在，分别，纯化和培育2广阔的大海是发光细菌生活的大本营
2、，从近海沿岸到南北极；从海水表面到深达1000米的海底都可找到发光细菌，只有少量生活在淡水湖泊河流中；有的寄生于各样大海动物如海鱼的发光器官中；有的独立生活在海水中，其数目依外界条件的变化而异，据测定夏秋天的海水中每毫升多达几十到几百个，发光细菌属于肠道菌属，分为十个种四个属，在我国大海中也陆续分别到十个种的六种，此中包含我国独有的新种。发光细菌能够直接从海水中和海鱼的体表和内脏中分别，所采纳的培育基为：胰蛋白胨0.5%，酵母膏0.5%，甘油0.3%，KH2PO40.1%，Na2HPO40.5%，NaCI3%，琼脂2%，pH6.5。高压灭菌后制成平板，将海鱼或无脊椎动物（如乌贼）切成34cm大
3、小小块，或取其内脏放入灭菌培育皿中20培育1218小时，在暗室中寻发光点，用接种环挑取发光点，在营养平板上，线培育后形成单个发光菌，再挑取单菌落频频划线分别几次，即可获得纯化的发光菌株，将纯化的菌株接种入相同成分的斜面培育基上，经培育12小时后，在4下保存，每个月转接一次，可长久保留活力，使用前接种到液体培育基中20下振荡培育1012小时，用磷酸缓冲液稀释后备用。国内外一般都用光亮发光杆菌(PhotobacteriumPhospholcum)作有毒有害物的查验，上海华东师范大学已将此菌种制成干燥粉剂-20下可长久保留，使用极为方便。二、发光菌的发光机理微生物在氧化代谢或呼吸作用过程中获得能量，
4、呼吸作用等于生物的氧化作用，好气性细菌拥有细胞色素氧化复原酶系统，因为好气性细菌的细胞色素能够作为氢的最后受体而利用空气中的氧，底物的氢传达到NAD（烟酰胺腺嘌呤核苷酸）的脱氢酶的辅基上，结果形成复原型的AAD-H2，它能够将氢传达给/黄素腺嘌呤二核苷酸FAD，后者转变为FAD-H2，就能够传达给细胞色素，能量以ATP（三磷酸腺苷）的形式开释。发光细菌的发光过程是一种光呼吸过程，是上述电子传达链上的一个侧支2 ，复原型的黄素单核苷酸，FMNH2充任反响的底物，萤光酶起催化作用，长链脂肪醛起作改变萤光酶结构的“修饰”作用。萤光酶经过分子氧催化FMNH2和脂肪醛(RCHO)的氧化，这类氧化复原反响
5、结果便产生磷光(465490nm之间许多)。外界条件和培育基成分pH，温度，氧浓度变化会影响细菌的发光，而有毒的化学物质，重金属离子，抗生素，化学治疗剂，农药等相同会影响细菌发光，故采纳发光细菌作为敏感的指标物测定有毒有害物是可能的。三、发光细菌检测有毒有害的方法31. 仪器：SHG-1型生物化学发光丈量仪（上海市技术监察局实验工厂产品）或Microtox2055型毒物剖析系统（美国MICROBICSCORPORATION产品）2.培育基(1) 液体培育基：酵母膏5g，胰蛋白胨5g，NaCI40g，Na2HPO45g，KH2PO4lg，甘油3g，蒸馏水1000ml，pH6.5。(2) 固体培育
6、基：上述液体培育基成份加2%琼脂即可。(3) 稀释用磷酸缓冲液：Na2HPO45g，KH2PO4lg，NaCI30g，蒸馏水100ml，pH6.5。3. 水样浓缩作某化学物质的试验只要配制必定浓度的溶液即可，进行水样中有毒有害物质的试验则需预先进行水样中迫害物的吸附，洗脱和浓缩。取必定体积水样V升（视水质而定），用大孔树脂(XAD系列预先分别经甲醇、乙腈、丙酮回流8小时后保留于甲醇中)，用重蒸乙醚洗脱，浓缩至残渣，用1ml重蒸过的二甲亚砜溶解之。1ml1V升水样0.1ml0.1V升水样4. 测定步骤(1) 菌体活化：装置为0.5ml干燥菌剂，开封后注入23ml冷的稀释液，在旋转混淆器上振荡23
7、分钟，20均衡510分钟，使其活化，待发光稳固后即为活化菌悬浮液，置4下备用（活化后一天可用）。(2) 菌液办理：汲取不一样体积（视水质而定）二甲亚砜水样浓缩液，分别在试管顶用无菌蒸馏水稀至1ml，加入1ml缓冲液，而后再加入0.1ml菌悬浮液，摇匀，在必定温度下(201)反响10分钟。并同时以二甲亚砜作比较试验。(3) 用SAG-1型发光丈量仪测定光强度。(4) 活菌计数在测定光强度的同时用上述加有菌悬浮液的稀释液稀释涂布营养平板，23培育1216小时，计算活菌数。(5) 结果计算：相对抑光率=比较管光强样品管光强比较管光强100细菌死亡率=比较活菌数样品组活菌数比较组合菌数100关于单调化
8、学物质当达到抑光率为50%时的浓度用EC50表示，当前已有大批的有机物测得了其EC50值4。关于水样试验结果只好用水样体积表示，EV50即表示抑光率为50%时所相对应的水样体积。5. 试验结果的评论标准关于某个水样品可依据EC50评论其毒性的有无，依据25%的准则，当某个水样品的EC5025%时可记为有毒，按50%准则，某个水样的EC5050%可记为有毒5，还有一些其余分级方法。怎样用发光细菌的查验结果来评论水质进行分类是一个有待研究的问题，当前只好用以在相同条件下比较不一样水样的毒性，即加入同一水样体积后测定其抑光率，抑光率大小评论其毒性；或许测得其EV50，依EV50的大小评论其毒性。参照
9、资料1岳舜琳：“给水环境毒理学简介”上海城镇供水1988年1期14-17页。2 吴自荣：“察看生物发光现象的好资料发光细菌生物学通告1986年第6期。3 吴自荣等“以发光细菌作指示生物迅速评论塑料包装资料的生物毒性”中国环境监测1987年3卷第4期。4KLAUSL.E.KAISER;“Photobacteriumphoay11,ToxicityDataCompilation”ToxicityonalJournalVo1.3195-237(1988)。phoreumToxicityAssesmint:AnBioassInternati5A.A.Bulich;theToxicity/April1982“APracticalofAqualicP.45-47。andReliableMlthodforMonitoringSamplts”March
