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1、 常用监测项目的分析方法介绍第一节 化学需氧量化学需氧量（COD），是指在一定条件下，用强氧化剂处理水样时所消耗氧化剂的量，以氧的毫克/升来表示。化学需氧量反映了水中受还原性物质污染的程度。水中还原性物质包括有机物、亚硝酸盐、亚铁盐、硫化物等。水被有机物污染是很普遍的，因此化学需氧量也作为有机物相对含量的指标之一。水样的化学需氧量，可受加入氧化剂的种类及浓度，反应溶液的酸度、反应温度和时间，以及催化剂的有无而获得不同的结果。因此，化学需氧量亦是一个条件性指标，必须严格按操作步骤进行。对于工业废水，我国规定用重铬酸钾法，其测得的值称为化学需氧量。具体监测方法参见水和废水监测分析方法（第三版）P3
2、54356。第二节 溶解氧溶解在水中的分子态氧称为溶解氧。天然水的溶解氧含量取决于水体与大气中氧的平衡。溶解氧的饱和含量和空气中氧的分压、大气压力、水温有密切关系。清洁地面水溶解氧一般接近饱和。由于藻类的生长，溶解氧可能过饱和。水体受有机、无机还原性物质污染，使溶解氧降低。当大气中的氧来不及补充时，水中溶解氧逐渐降低，以至趋近于零，此时厌氧菌繁殖，水质恶化。废水中溶解氧的含量取决于废水排出前的工艺过程，一般含量较低，差异很大。测定水中溶解氧常采用碘量法及其修正法和膜电极法。清洁水可直接采用碘量法测定。具体监测方法参见水和废水监测分析方法（第三版）P246248。第三节 五日生化需氧量生活污水与
3、工业废水中含有大量各类有机物。当其污染水域后，这些有机物在水体中分解时要消耗大量溶解氧，从而破坏水体中氧的平衡，使水质恶化。水体因缺氧造成鱼类及其它水生生物的死亡。水体中所含的有机物成分复杂，难以一一测定其成分。人们常常利用水中有机物在一定条件下所消耗的氧，来间接表示水体中有机物的含量，生化需氧量即属于这类的一个重要指标。生化需氧量的经典测定方法，是稀释接种法。测定生化需氧量的水样，采集时应充满并密封于瓶中。在0-4下进行保存。一般应在6h内进行分析。若需要远距离转运。在任何情况下，贮存时间不应超过24h。具体监测方法参见水和废水监测分析方法（第三版）P362366。第四节 氨氮氨氮（NH3-
4、N）以游离氨（NH3）或胺盐（NH4+）形式存在于水中。水中氨的来源主要为生活污水中含氮有机物受微生物作用的分解产物，某些工业废水，如焦化废水和合成氨化肥厂废水等，以及农田排水。此外，在无氧环境中，水中存在的亚硝酸盐亦可受微生物作用，还原为氨。在有氧环境中，水中氨亦可转变为亚硝酸盐，或继续转变为硝酸盐。在废水中氨氮含量较高的前提下，推荐氨氮的监测方法为蒸馏酸滴定法。具体监测方法参见水和废水监测分析方法（第三版）P252254和P258。第五节 显微镜的使用及微生物形态的观察一、目的1. 学习普通光学显微镜的使用方法。2. 结合曝气池活性污泥的观察，认识原生动物、菌胶团等微生物的形态，并学习测量
5、微生物大小的方法。二、实验器材1.活性污泥法曝气池混合液。2. 显微镜、目测微尺、物测微尺、载玻片、盖玻片等。三、实验步骤（一）显微镜的结构和各部分的作用图5-6所示，是微生物检验常用的显微镜，其构造分机械和光学两部分。 图5-6 显微镜机械部分主要包括：1. 镜筒 镜筒长度一般是160mm。它的上端装有接目镜，下端有回转板。回转板上一般装有3个接物镜。2. 载物台 载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。3. 调节器 镜筒内旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒，调节接物镜与需观察的物体之
6、间的距离。光学部分主要包括：1. 接目镜 一般使用显微镜具有23个接目镜，其上常刻有“5”、“10”或“15”等数字及符号，意即使用时可放大5倍、10倍或15倍。观察微生物时常用放大10倍或15倍的接目镜。2. 接物镜 接物镜装在回转板上，可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40（或45）100倍数的乘积。例如，用放大40倍的接物镜（高倍镜）与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为4010=400，如果用放大15倍的接目镜则放大倍数为4015=600。接目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，所以通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察主要是指使用不同的接物镜而言的。油
7、镜的放大倍数最大（90或100）。放大倍数这样大的镜头，焦距就很短，直径就很小，所以自标本玻片透过的光线，因介质密度（从玻片至空气，再进入油镜）不同，有些光线因折射或全反射，就不能进入镜头，致使射入的光线较少，物象显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，须在油镜与玻片中间加入和玻璃折射率（n=1.52）相仿的镜油（香柏油，n=1.515）。因为这种接物镜使用时须加镜油，所以我们称它为油镜（图8-2）。一般的低倍或高倍镜使用时不加油，所以也称干镜。使用低倍镜和高倍镜时，一般作活体的观察，不进行染色。在观察细小动物时，低倍镜主要用来区别动物的种类和看出它们的活动状态，而高倍镜则可看清动物的结构特
8、征，低倍镜容易看到标本的全貌，油镜在大多数情况下是用来观察染色的涂片。3. 集光器 集光器在载物台的下面，用来集合由反光镜反射来的光线。集光器可以上下调整，中央装有光圈，用以调节光线的强弱。当光线过强时，应缩小光圈或反集光器向下移动。4. 反光镜 反光镜装在显微镜的最下方，有平凹两面，可自由转动方向，以反射光线至集光器。（二）显微镜使用和保护的方法1. 低倍镜的使用法（1）置显微镜于固定的桌几上，窗外不宜有障碍视线之物。（2）拨动回转板，把低倍镜移到镜筒正下方，和镜筒连接而对直。（3）拨动反光镜向着光线的来源处。同时用眼对准目镜（选用适当放大倍数的接目镜）仔细观察，使视野完全成为白色，这是光线
9、已经通到镜里的表示。（4）把载玻片放到载物台上，要观察的标本放到圆孔的正中央。（5）将粗调节器向下旋转，同时眼睛注视接物镜，以防接物镜和载玻片相碰。当接物镜的尖端距载玻片约0.5cm时即停止旋转。（6）把粗调节器向上旋转，同时左眼向接目镜里观察。如标本显出，但不十分清楚，可用细调节器调节，至标本完全清晰为止。（7）假如因旋转粗调节器太快，致使超过焦点，标本不能出现时，不应在眼睛注视接目镜的同时向下旋转粗调节器，必须从第（5）步作起，以防因没有把握的旋转，使接物镜与载玻片碰触。（8）在观察时，最好两眼都能同时睁开。如用左眼看显微镜，右眼看桌上纸张，便可一面看一面画出所看到的物象。2. 高倍镜的使
10、用法（1）使用高倍镜以前，先用低倍镜检查，把要观察的标本放到视野正中。（2）拨动回转板使高倍和低倍两镜头互相对换。当高倍镜移动到载玻片时，往往镜头十分靠近载玻片。这时必须注意是否因高倍镜靠近的缘故而使载玻片也随着移动。如果载玻片有移动的现象，则应立刻停止推动回转板，把高倍镜退回原处，再按照使用低倍镜的方法，校正标本的位置，然后旋动调节器，使镜筒稍微向上，再对换高倍镜。（3）当高倍镜已被推到镜筒下面时，向镜内观察所显现的标本，往往不很清楚，这时可旋转细调节器，上下移动，但不要过分移动。3. 油镜的使用法（1）如用高倍镜放大，倍数还不够，则须采用油镜。用油镜以前，先用高倍镜检查，把要观察的标本放到
11、视野正中。（2）用油镜时，在载玻片上加一滴镜油，然后拨动板对换高倍镜和油镜，使油镜头尖端和油接触，而后向接目镜观察。假如不清晰，可稍微转动调节器，但切记不要用粗调节器。（3）用过油镜后，必须用擦镜纸或软绸将载玻片和油镜所粘着的油拭净。必要时，可略蘸二甲苯少许，揩拭镜头，最后用擦镜纸或软绸擦干。4. 显微镜的保护法（1）显微镜应放置在干燥的地方，使用时须避免强烈的日光照射。（2）接物镜或接目镜不清洁时，应当用擦镜纸或软绸揩擦。（3）用完显微镜后，应当立即放到镜匣中。（三）目测微尺和物测微尺及其使用的方法1目测微尺 目测微尺是一圆形玻片，其中央刻有精确的刻度。刻度的大小，随使用的接目镜和接物镜放大
12、的倍数以及镜筒的长而改变。使用前，应先利用物测微尺进行标定。2物测微尺 物测微尺系一厚玻片，中央有一圆形盖玻片。上有100等分刻度，每等分的长度为1/10mm，即10m，。使用时，先将目测微尺装入接目镜的隔板上，使刻度朝下；把物测微尺放在载物台上，命名刻度朝上，用平常观察标本的方法，先找得物测微尺的刻度，再移动物测尺与目测微尺使两者的第一线相合，然后计算物测微尺的每一小格内有目测微尺的小格若干个，于是计算后者刻度所表示的长度。如物测微尺的一小格相当于5个目测微尺的小格，则目测微尺在此种条件下，其每格的长度即等于10/5或2m。如在同样条件下测量物体，而物体之长适为目测微尺的两小格，宽为半小格，
13、则可知此物体的大小为1m4m。（四）活性污泥的观察活性污泥法曝气池中的活性污泥是生物处理废水的工作主体。它们是由细菌、霉菌、酵母菌、放线菌、原生动物等微生物，以及后生动物如轮虫、线虫等与废水中的固体物质所组成。本实验主要是观察活性污泥和生物膜的结构及菌胶团的形状和辨认活性污泥与生物膜的组成之一原生动物的形态和特征和运动方式等。1标本的制备（1）活性污泥1）取活性污泥法曝气池混合液一小滴，放在洁净的载玻片的中央（如混合液中污泥较少，可待其沉淀后，取沉淀污泥一小滴加到载玻片上；如混合液中污泥较多，则应稀释后，进行观察）。2）小心地用洗净的盖玻片覆盖。这样，就制成了活性污泥的标本。加盖玻片时应使其中央已接触水滴后才放下，否则会在片内形成气泡，影响观察。2显微镜观察（1）低倍镜观察1）在选定的接目镜下，利用低倍镜，确定目测微尺一格的长度（单位以m计）。2）观察所制备的微生物标本玻片，画出所见原生动物、菌胶团等微生物的形态草图。选择一个原生动物，量出其尺寸。3）计下观察所用接目镜和接物镜的放大倍数和算出显微镜的放大倍数。（2）高倍镜观察1）改用高倍镜观察，画出微生物的形态草图，并与用低倍镜所看到的比较，注意其不同点。2）记下显微镜的放大倍数。4
