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1、实验十一 DNA的粗提取与鉴定教学目的1 初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。2 观察提取出来的DNA物质。实验原理1 DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在014mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。2 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。3 DNA二苯胺蓝色（用于DNA的鉴定）实验步骤1材料制备0.1G/ml柠檬酸钠100ml 500ml烧杯玻璃棒搅拌1000r/min离心2min吸去上清液活鸡血180ml 即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自
2、行沉淀）2方法步骤 取血细胞液5-10ml20ml蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌（1）提取血细胞核物质 纱布过滤，滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质 原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂（2）溶解核内DNA：滤液2mol/LNaCl溶液40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于稀释到014mol/L）（4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上（5）DNA粘稠物再溶解： 20ml2mol/LNaCl溶液
3、 50ml烧杯， 上述粘稠物 缓慢搅拌3 min（6）过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA（7）提取含杂质较少的DNA：上述溶液95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起。（8）DNA鉴定：实验关键： 本实验成功的关键是获取较纯净的DNA，因此应注意：1充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA2沉淀DNA必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中（5以下）至少存放24小时。3正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3）、（5）步骤，玻璃棒不
4、要直插烧杯底部，且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。在步骤（7），要将玻璃棒插入烧杯溶液中间，用手缓慢转动5-10min。【同类题库】在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中分别使用2molL、014molL、2molL、0015molL的氯化钠溶液，其作用分别是（A）A溶解、析出、溶解、溶解 C溶解、溶解、析出、溶解B析出、溶解、析出、溶解 D溶解、析出、溶解、析出下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是（C）DNA在下列哪种浓度的NaCl溶液中溶解度最低（B）A200mol/L B014 mol/L C0015 mol/L D010 mol/L在DNA的粗提取过程中，初步
5、析出DNA和提取较纯净的DNA所用的药品的浓度和名称分别是（B）01 g/ml的柠檬酸钠溶液 200mol/L的NaCl溶液 014 mol/L的NaCl溶液 体积分数为95%的酒精溶液 0015 mol/L的NaCl溶液 004 mol/L的NaCl溶液A B C D与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是（C）A操作时缓缓滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度B在操作A时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA分子完整C加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度，两者均可析出D当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl的浓度约为0.14mol/L.（多选）下列有关“DNA粗提取”的操作中，正确的是（ABCD）A在
6、鸡血细胞液中加入蒸馏水B在“析出DNA粘稠物”时，要缓缓加入蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增多C在用酒精凝集DNA时，要使用冷酒精D用玻璃棒搅拌时要沿一个方向“DNA的粗提取与鉴定实验”中有三次过滤：（1）过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液。（2）过滤含粘稠物的0.14mol/L NaCl .（3）过滤溶解有DNA的2mol/L NaCl.以上三次过滤分别为了获得（A）A含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液B含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液C含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布中DNAD含较纯的DNA滤液、纱布上粘稠物、含DNA的滤液为获取较纯净的DNA，采集来的血样
7、可用蛋白酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。下列有关叙述，正确的是（D）A除去血浆中的蛋白质 B除去染色体上的蛋白质C除去血细胞表面的蛋白质 D除去血细胞中所有的蛋白质在“DNA的粗提取与鉴定实验”中，和“使用蛋白酶从染色体中提取DNA”中的蛋白酶具有相似作用的物质是（D）ANaCl溶液 B蒸馏水 C柠檬酸钠 D冷却的酒精DNA不溶于下列何种溶液（D）ANaCl溶液 BKCl溶液 CMgCl溶液 D酒精溶液下列不同浓度的NaCl溶液中，使DNA析出最彻底和溶解度最高的是（A）0.14mol/L 2mol/L 0.25mol/L 0.015 mol/LA和 B和 C和 D和下列操作中，对DNA的提
8、取量影响较小的是（B）A使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA等核物质B搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动C在析出DNA粘稠物时，要缓缓加入蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增多D在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却E在DNA的溶解和再溶解时，要充分搅拌在“DNA的粗提取与鉴定实验”中：（1）实验中两次使用蒸馏水，第一次目的是 ，第二次目的是 。（2）说明不同浓度的NaCl溶液的作用：2mol/L NaCl的作用 ；0.14mol/L NaCl的作用 ；0.015 mol/L NaCl的作用 ；（3）提纯DNA的原理是 ，所用试剂为 。搅拌要 ，目的 。（4）能否用哺
9、乳动物血液代替？简述理由。 。 （1）使血细胞吸水破裂，溶解细胞核内的DNA；降低NaCl溶液的浓度，降低DNA分子在NaCl溶液中的溶解度析出DNA分子（2）溶解含DNA的核物质；使含DNA的丝状粘稠物析出DNA分子；进行DNA鉴定（3）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些盐类蛋白质可溶于酒精溶液；95%的冷却酒精；轻缓、同方向；保持DNA分子的完整性（4）不能，成熟的哺乳动物红细胞没有细胞核此实验中有几次用玻璃棒搅拌，每次搅拌的方向是一致的；但每次搅拌的强度不同，请就此予以说明。（1）提取鸡血细胞核内物质时，应 搅拌，目的是 。（2）向含核物质的2mol/L NaCl 溶液滴加蒸馏水析出DN
10、A粘稠物时，应 搅拌，目的是 。（3）DNA粘稠物再溶解于2mol/L NaCl 溶液时，应 搅拌，目的是 。（4）用95%的冷却酒精提取含杂质较少的DNA时，应 搅拌，目的是 。（1）快速；加速血细胞破裂（2）轻缓；尽量保持DNA分子的完整性（3）轻缓；尽量保持DNA分子的完整性（4）轻缓；保持DNA分子的完整性以下是有关DNA的粗提取实验的阅读材料： a核酸极不稳定，在较为剧烈的化学、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制备DNA时要加入DNA酶（水解DNA的酶）的抑制剂柠檬酸钠，以除去Mg，防止DNA酶的激活。b核酸中的DNA和RNA在生物体内均以核蛋白（由核酸和蛋白质组成）的形式存在，D
11、NA核蛋白在1 mol/L NaCl 溶液中溶解度很大，但在0.14mol/L NaCl 溶液中溶解度很低；而RNA核蛋白溶于0.14mol/L NaCl 溶液。c用苯酚处理，可使蛋白质变性，且留在苯酚层内；在DNA溶液中加入25倍体积，浓度为95%的酒精，可将DNA分离出来。此时DNA十分粘稠，可用玻璃棒搅成团取出。dDNA在强酸性环境下，水解产生脱氧核糖等小分子物质，它与二苯胺酸性溶液反应，能生成蓝色化合物。e实验材料与器械：柠檬酸钠溶液、石英砂、0.14mol/L NaCl 溶液、1 mol/L NaCl 溶液、苯酚、95%的酒精、二苯胺试剂、浓硫酸、花椰菜、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、量
12、筒、石棉网、酒精灯、吸管、试管等。以下是DNA粗提取实验的步骤，请根据以上阅读材料回答有关问题：（1）研磨：取10克花椰菜加适量的 、 和石英砂，研磨成匀浆。（2）过滤。（3）将滤液稀释6倍，其目的是： 。（4）离心处理，产生沉淀。（5）取沉淀物，置于2毫升1 mol/L NaCl 溶液中，使DNA核蛋白再次溶解，再加2毫升苯酚充分震荡后静止，待其分层后弃其上层苯酚。这一步的目的是除去 。（6）如何将剩余溶液中的DNA提取出来？ 。（7）如何证明提取物质确实是DNA分子？ 。其实验过程的要点是向放有DNA的试管中加入适量该试剂，混合均匀后，将试管置于 中5min，待试管 后，观察试管中的颜色变化。这个实验也说明DNA耐 温，前次温度有利于
