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1、RPHPLC 法检测海马脑片灌流液中氨基酸 类神经递质 作者：王晓菲 罗晓星 周四元 赵德化 程涛 潘小军 【关键词】 谷氨酸 关键词: 高效液相色谱;海马;天门冬氨酸;谷氨酸;牛磺酸;g- 氨基丁酸 摘 要:目的 建立一种可同时测定微量谷氨酸（Glu） ，天门冬氨 酸（Asp） ，牛磺酸（Tau） -氨基丁酸（GABA）4 种氨基酸类神经递 ，g 质的 HPLC 分析方法. 方法 制备大鼠海马脑片，灌流取样，冻干再溶 后，采用邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生，反相梯度洗脱的高效液相/荧 光检测法， 测定其中 4 种微量氨基酸的含量. 结果 各氨基酸的浓度与 峰面积均呈现良好的线性关系，相关系数（
2、r）分别为:Asp0.9920， Glu0.9667，Tau0.9803 和 GABA0.9584;日内变异系数（%）为 Glu4.3， Asp4.6，Tau6.7 和 GABA7.1;最低检出限（pmol L-1 ）为:Asp0.17， Glu0.35，Tau0.68 和 GABA1.12，标准加入回收率（%）分别为:Asp106 7，Glu1015，Tau946 和 GABA9211. 结论 该法具有衍生化反 应操作简便，流动相成本低，灵敏度高，特异性强，分析时间短的优 点，而且同样适用于其他生物样品的测定. Keywords:HPLC;hippocampus;aspartic 1acid
3、;glulamate;taurine;GABA Abstract:AIM To establish a method for simultaneous de-termination of trace amino acid neu rotransmitters Glu ， Asp ， Tau and GABA by HPLC was improved.METHODS The sample prepared by rat hippocampal slices perfusation was lyophi-lized and resoluted，4kinds of trace amino acids
4、 were determinated by HPLC which involved pre-column derivatiza-tion with o-phthalaldehyde，reversed-phase gradient elution and fluorescence detection.RESULTS A good linear rela-tionship existed between peak area and concentration of amino acids.The correlation coefficients（r）were:Asp0.9920， Glu0.966
5、7， Tau0.9803and GABA0.9584respec-tively.The precisions （%） were Glu4.3， Asp4.6， Tau6.7and GABA7.1for interassay CV.The detection limits（pmol L-1 ）were:Asp0.17，Glu0.35，Tau0.68， GABA1.12and the recovery rates of4amino acids（%）were Asp106 7 ， Glu101 5 ， Tau94 6and GABA92 11respec tively.CONCLUSION The
6、operation of the derivatization is easy， the mobile-phase is cheap and this method has suffi-cient sensitivity，specificity and less separation time.Also it is good for determination of amino acid in other biologic sam-ple. 20 引言 谷氨酸（Glu） 、天门冬氨酸（Asp） -氨基丁酸（GABA）和 、g 牛磺酸（ Tau） ，是大脑海马结构中分布最广泛研究最多的神经递质，
7、 前两者属于兴奋性递质， 后两者属于抑制性递质.这些氨基酸类递质的 异常是诱发多种神经系统疾病，如兴奋性毒性反应、癫痫、舞蹈病、 帕金森病的因素之一1，2 .随着对神经药理学研究的深入和临床 神经系统疾病病因的探索，要求建立一种快速、精确的微量氨基酸定 量分析方法.经典的氨基酸分离方法是离子交换色谱法3 ，此法需 特殊装置， 且分析时间较长;而荧光分光光度法和氨基酸自动分析仪检 测灵敏度较低，且干扰因素较多4 .我们以大鼠的海马脑片灌流液 为标本，以邻苯二甲醛为柱前衍生剂，建立起一种更简便、更灵敏， 适于检测生物样品中微量氨基酸的高效液相色谱分析方法. 1 材料和方法 1.1 材料 美国 Agilent-1100 系列高效液相色谱仪及荧光检 测器， 度设置及数据均由 on-line 计算机数据处理系统处理.邻苯二 梯甲醛（OPA） 2-巯基乙醇，L-Glu，GABA，Asp，Tau 及乙醇胺均购自 ，Sigma 公司.甲醇为色谱纯（进口）.其余试剂均为分析纯（国产）.试 剂用水为三蒸水. 1.2 方法 3
