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1、国家开放大学电大本科农业微生物学形考任务4试题及答案形考任务41实验一细菌的革兰氏染色的与要求了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染色的主要操作步骤，学会革兰氏染色的方法。二实验原理革兰氏染色是细菌学中一个重要的鉴别染色，按照细菌对这种染色反应的不同，可以把细菌区 分为二大类群，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌能保留初染染色剂（结晶紫）于细胞中， 不受脱色剂（酒精）的影响，而被染成紫色或深蓝色。革兰氏阴性菌不能保留初染染色剂于细胞中，因 脱色剂的作用而洗出结晶紫，然后被另一种染色剂（番红或藏花红）染成红色。也有一些菌种革兰氏染 色是可变的。三，实验材料菌种:大肠杆菌（Escherichi
2、a coli ）、枯草芽大杆菌（Bacillus subtilis ）、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus *番红染液。染色液：草酸镣结晶紫染液、路戈氏碘液、95%酒精、器皿及材料：洁净载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、酒精灯、接种环、镶子、无菌水、废玻片缸、火柴等。洗瓶、染色盘、载玻片架、记号笔、75%消毒酒精瓶、仪器：显微镜。四，实验方法与步骤1. 涂片固定如简单染色。2. 初染：在涂片处加1滴草酸较结晶紫染液，染色1分钟，水洗。3. 媒染：用路戈氏碘液染色1分钟，水洗。4 .脱色：将载玻片略倾斜，滴加95%酒精脱色，约30-60秒，洗至流下的脱色酒精刚好无色
3、为 止，立即水洗。5 .复染：用番红染色液染色1 2分钟，水洗后干燥。6 ,镜检。五、实验结果将显微镜下观察到的2个菌种的革兰氏染色结果填于下表中，并描述菌体的颜色、形态、排列方式。菌种名称大肠杆菌枯草芽泡杆菌菌体形态图菌体颜色红色紫色菌体形态两端着色钝圆棒状菌体排列方式单独存在或成双，不是长链状链状排列结论（G+或G-）G-G+形考任务5实验十四：土壤微生物的分离和计数的与要求学习用稀释平板法从土壤中分离微生物，掌握平板计数方法，计算土壤中微生物的数量。二实验原理自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，生活在土壤中的微生物无论是数量和种类都非常丰富的，因此从土壤中分离微生物是人类获得微生物资源
4、的重要途径。土壤中的微生物种类、数量与土壤的肥力、类型等有关。一般情况 下，肥沃的土壤中微生物种类和数量多，贫瘠的土壤中微生物种类和数量少。从土壤中分离微生物时，应根据被分离 微生物特点，设计分离方法。实验采用稀释平板法，从土壤中分离微生物，采用该方法分离土壤微生物的同时，还可 以计算出土壤中微生物的数量。三，实验材料培养基：牛肉膏蛋白豚琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基、高氏合成一号琼脂培养基。器皿及材料：菜园土（经2mm分样筛过筛）、90mL无菌水瓶（内装玻璃珠约20粒）、9mL无菌水试管、ImL无 菌吸管、无菌培养皿、乳酸溶液，链霉素溶液（20mg/mL）、1%重铭酸钾溶液、天平、试管架、无菌
5、称量纸、牛角匙、 酒精灯、玻璃刮铲、记号笔、火柴等。四，实验方法与步骤土壤样品逐续稀粹示意图1. 土壤稀释液的制备：称取10克菜园土置于90mL无菌水瓶中，振荡30分钟，使微生物细胞充分分散，即成1（M 稀释液；静止片刻后（约2030秒钟），取101稀释液ImL置于9mL无菌水试管中，得10.2稀释液，摇匀；按同样 方法将土壤浸液稀释到10-610-8稀释度，每次更换1支无菌吸管（图9-4）o图9Y2. 平板接种培养 细菌平板培养：采用基内接种法，将无菌培养皿编上1Q5、10.6和10/7三个稀释度号码，每个号码设3个重复, 共9皿。用ImL无菌吸管按无菌操作要求吸取107稀释液各1毫升放入编
6、号10-7的3个培养皿中，同法吸取106稀释 液各ImL放入编号10-6的3个培养皿中，再吸取10-5稀释液各ImL放入编号10-5的3个培养皿中（由低浓度向高浓 度吸取菌液时，即由高稀释度向低稀释度吸取菌液时，可不必更换吸管)。然后在9个培养皿中以无菌操作方法分别倒 入已融化并冷却至45笆50笆左右的牛肉膏蛋白豚琼脂培养基，轻轻转动培养皿使菌液与培养基混合均匀。待冷凝后 将培养皿翻转培养在28C30笆的温箱中，2448小时后观察生长情况。计算菌落数量，计数时每皿菌落20100个 为宜。 真菌平板培养：方法同细菌，取土壤稀释液10-4. 10-3和10-2分别接种，再倒入已熔化且冷却到45C5
7、0C的 马铃薯琼脂培养基(培养基熔化后加乳酸调节pH至5.5-6.0左右，100mL培养大约加1滴乳酸，同时再加入20mg/mL 的链霉素溶液O.lmL,凝固后，将培养皿翻转，置于25C-28C培养35天。检查计数，每皿菌落以2060个为宜。 放线菌平板培养：采用表面接种法，按无菌操作要求，将已熔化且冷却到45C50C的高氏一号琼脂培养基(当 培养基熔化后加1%重铭酸钾12滴)倒入无菌培养皿中，共倒9皿，凝固后，进行编号。用ImL无菌吸管按10.4、 10.3和102稀释度吸0.1mL壤稀释液置于培养基表面，每个稀释度设3个重复。然后用无菌玻璃刮铲涂布均匀。每 涂完一皿后，重新消毒玻璃刮铲。操
8、作完毕，将培养皿翻转，置于25C28C培养57天。检查计数，每皿菌落以 20100菌落为宜。3. 土壤样品中微生物数量的计算由于土壤含有一定的水分，且含水量不同，因此在计数时会产生差异。为了统一标准，便于比较，常以干土为标 准，在实验的同时测定土壤样品含水量，然后计算出每克干土样品含菌数。计算公式：土， 土、 菌落平均数* X稀释倍数每克干土样品含菌数cfii)=接种量iKmL) X (1-含水量*菌落平均值：为同一稀释度3个重复的平均数。五、实验结果:土壤菌落数统计表稀释液处理10-3IOIO5123123123菌落数89921112017199172平均数96.66718.6679.333
9、革兰氏染色结果菌种对照A对照B分离菌株革兰氏染色反 应蓝紫色/g+红色/G蓝紫色/G+形态长杆菌短杆菌长杆菌结论：被测土壤中的细菌数约为9.6667X1()4个，且其中含有革兰氏阳性的杆菌。形考任务6主题讨论：为什么说微生物是自然环境中的“清洁工” ？答：我们学过微生物都知道，微生物在自然界中无处不在，如果离开微生物，很难想想会是什么样子。说微生物是白然环境的清洁工一点也不为过。为什么这样说呢？1、自然界中每天都排除大量的动物粪便，需要微生物分解，利用。2、大量的动植物残体需要微生物分解回归大自然。3、许多城市废弃物需要微生物处理。4、大自然中的河流、水库、江河需要微生物净化，5、土壤中的大分子物质需要微生物的分解才能被植物利用。等等等等许多的地方都需要微生物，才能使大自然环境净 化，所以说，微生物是大自然环境中的清洁工。
