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1、肾小球肾炎动物模型研究概述【摘要】慢性肾小球肾炎hrniglerulnephritis的发病机制有多种，设计模型时都是针对某一发病机制，使动物出现类似人类肾炎的情况而建模。本文对肾小球肾炎动物模型的造模机制、造模方法等方面进展了归纳和总结，简要说明其中存在的问题。【关键词】肾小球肾炎；动物模型；造模机制；造模方法肾小球肾炎是由多种病理类型的原发性肾小球疾病开展而来的，以血尿、蛋白尿、高血压和水肿为主要临床表现的慢性疾玻目前认为肾小球肾炎是一种自身免疫反响性疾病，通过免疫作用而造成肾脏损害。1Heyann肾炎模型本模型是通过针对自身抗原的免疫复合物I诱发而成，故称其为自身免疫复合物性肾炎autl
2、gusiuneplex，AI。Heyann肾炎模型根据是否由同种动物提供抗体分为主动型和被动型两种模型。主动型Heyann肾炎模型机制:动物由自体抗肾抗体或自体抗原抗体复合物刺激引起肾小球基膜产生免疫反响形成肾炎。被动型Heyann肾炎模型机制：用甲种动物的肾皮质匀浆免疫乙种动物,使后者产生抗甲种动物的抗肾血清抗肾抗体,然后将这种抗肾血清注射给安康的甲种动物,而使其产生肾炎。主动型Heyann肾炎，孙永宁1用大鼠肾皮质匀浆加弗氏完全佐剂制备乳化液,同种大鼠腹腔注射次乳化液，2l/只，每周注射1次，共注射7次。现研究常用模型为被动型Heyann肾炎模型。其详细造模方法2为大鼠后足垫注射含6.5g
3、免疫球蛋白的完全弗氏佐剂0.25l后，由大鼠尾静脉注射1.0l兔抗FXIA抗血清，qd，共2天，造模完成。这一实验模型与人类原发性膜性肾病非常相似，其特征为弥漫性基膜增厚伴钉突形成。2原位免疫复合物性肾炎模型该模型的特点是在肾小球基膜上直接形成免疫复合物。由细菌感染合并异种免疫蛋白结合作用造成模型。杨宏等3制作家兔原位免疫复合物肾小球肾炎模型:将大肠杆菌毒素和阳离子化牛血清白蛋白BSA溶于0.15l/L、pH值为7.2的磷酸缓冲液PBS溶液中,最终浓度为每1l溶液中含1g大肠杆菌毒素和1g牛血清白蛋白,每只兔经耳缘静脉注射2l预免疫,7天后开场正式免疫造模:每只免疫兔每天经耳缘静脉给予阳离子化
4、牛血清白蛋白20g预先溶于PBS溶液中,共7周。肾脏组织学检查显膜性肾小球肾炎的典型病变，故一般认为，膜性肾炎病理模型是原位免疫复合物性肾炎模型的典型病理代表。3马杉肾炎此模型4又称asugi肾炎、肾毒血清性肾炎、大鼠抗肾小球基膜GB肾炎。其根本原理5是以A种动物的肾小球基膜作为抗原，与完全佐剂一起注射到B种动物身上，使之产生抗A种动物的肾小球基膜抗体，将含有此种抗体的B种动物血清给A种动物静脉注射，A种动物经过一定的埋伏期之后尿中出现明显蛋白，伴肾小球增生，终至新月体形成与完全纤维化改变，是利用异体抗GB抗体直接诱导后产生的具有典型的人类新月体性肾炎病理变化的动物模型6。毕柳等7报道,英国K
5、azuhir等用牛肾小球基膜免疫istar大鼠造成实验性自身免疫抗肾小球基膜肾小球肾炎。伍小波等8用鼠肾皮质匀浆每周3次，每次10l免疫大耳白兔，在最后加强免疫后第11天，从兔耳缘静脉采血测效价，利用双向琼脂扩散法测定兔抗大鼠GB-Ab的效价为116,收获血清-30保存备用。正常兔IgG加等量完全弗氏佐剂皮下注射SD大鼠进展预免疫,预免疫后第7天和第8天后从大鼠尾静脉注射稀释一倍兔血清，剂量1l/只，连续两天为致病免疫。本模型的优点9是造模简单、阳性率高、重复性好，常被用于多发性肾炎的研究。缺点是病情反响较重，易导致局部动物中途死亡，同时在人的肾炎中，与这种模型相似的发病机制的病例很少，仅限肺
6、出血-肾炎综合征Gdpasture综合征。4系膜增殖性肾炎sPGN模型机制有以下两种，由细菌感染合并异种免疫蛋白结合作用造成模型及单纯异种免疫蛋白造成模型。朱声永等10复制家兔膜增殖型肾炎模型按北京医科大学第一附属医院肾炎研究室介绍的方法复制,预免疫:每只家兔背部皮下注射牛血清白蛋白1g,每周1次,连续3次。第4周时每只家兔耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素1g,共1次。正式免疫:第3周开场每只家兔耳缘静脉注射牛血清白蛋白25g,每日1次,每周6次,共6周,并于最后1周中血清白蛋白剂量加倍注射。按照吴衡生法11制备兔模型，每只兔第1天从耳静脉一次性注射牛血清白蛋白250g/kg。第4周分别从兔耳静脉抽
7、血做各项检查。第8周后处死动物，做肾脏病理检查，此病理改变与人类sPGN极相似。由于兔模型费用昂贵，石志超等12制备大鼠血清白蛋白模型，即每只大鼠尾静脉注射1g/kg结晶性小牛血清白蛋白，7天造模成功。目前,国际上普遍采用抗Thy-1抗体诱导的肾炎模型研究人类系膜增殖性肾小球肾炎的发病机制。“抗Thy-1抗体肾炎模型可用抗Thy-1多克隆抗体或抗Thy-1单克隆抗体nlnalantibdy,Ab经静脉注射大鼠而建立。如蒋文功等13对单克隆抗体X-7诱导的系膜增殖性肾小球肾炎大鼠模型的研究，经大鼠尾静脉单独注射单克隆抗体X-71g/kg,第7天模型制作成功。抗Thy-1单抗引起的肾病可能于1周后
8、缓解，故冯媛等14用单侧肾切除后3天按5g/kg体重静脉注射磷酸盐缓冲溶液溶解的Thy-1单抗1-22-3法造模。单纯性sPGN模型制作方法简便易行，且病变稳定可靠，重复性好，因此越来越受到人们的重视。5血清病肾炎模型它是一种经典的免疫复合物肾病模型，包括急性血清病肾炎和慢性血清病肾炎两类：急性模型由一次性大剂量注入牛血清白蛋白抗原，使动物的免疫系统产生抗BSA抗体，并和循环中剩余的抗原结合，形成循环免疫复合物I滞留于肾脏。丁秋兰等15按Dixn方法首先将牛血清白蛋白用生理盐水溶解。按250g/l剂量1次家兔耳静脉注射，即成功制作急性兔肾毒血清性实验模型。慢性模型由屡次注入牛血清白蛋白每日1次
9、，使动物体内抗原持续对免疫系统形成刺激，随着血清中抗BSA抗体的增多，可溶性I在循环中出现，分别沉积在肾小球毛细血管壁或系膜区，形成肾小球肾炎。杨解人等16选用新西兰大耳白兔,耳缘静脉注射-BSA10g,1次/d,共5周,第6周剂量加倍的方法成功制作家兔-BSA肾炎模型。由于慢性血清病肾炎复制周期长、阳性率低，而急性血清病肾炎较慢性血清病肾炎模型方便省时且抗原消耗少，因此得到更为广泛的应用。6氨基核苷肾病模型此模型又名嘌呤霉素肾病，属于肾毒性药物导致肾损伤造成的肾炎模型。现常用17，18注射盐酸阿霉素ADR、氯化汞、灌服碳酸锂等制造模型。彭蕴茹等19用盐酸阿霉素复制模型，大鼠一次性尾静脉注射盐
10、酸阿霉素7.5g/kg，于第10天获得满意造模效果。7其他肾炎模型如IgA肾病模型、局灶性节段性肾小球硬化模型、狼疮性肾炎模型等。20世纪70年代末Rifai等用牛血清白蛋白BSA作为载体交联二硝基苯酚DNP6；20世纪80年代初Isaas等用带不同电荷的右旋糖酐经腹腔静脉注射，结果均诱发小鼠IgA肾玻刘志红等20每周一次，连续3周给大鼠静脉注射葡萄球菌肠毒素BSEB0.4g/kg成功地复制出IgA肾病模型。局灶性节段性肾小球硬化模型嘌呤霉素一侧肾切除嘌呤霉素法，或5/6肾切除等。狼疮性肾炎模型包括自发性肾炎小鼠模型及慢性移植物抗宿主病模型。这些肾炎模型由于临床病理类型的发病较少见或模型制作的
11、繁琐复杂性而应用较少。综上所述,肾小球肾炎动物模型的研究已经越来越细致和深化。其中马杉肾小球肾炎模型因与人的发病机制相近，研究相对成熟和完善；而嘌呤霉素肾病肾小球肾炎模型的研究相对复杂和不易操作；阳离子牛血清白蛋白引起的肾炎模型的研究以其简便、高效与病理相似性而被广泛应用。另外，肾炎模型近十余年无新的研究进展，只是对原有模型的复制，如何找出既省时又经济的模型更有利于肾炎机制的阐述，也成为实验研究的迫切问题。【参考文献】1孙永宁.慢肾康胶囊治疗实验大鼠HN肾炎主要药效学研究.陕西中医学院学报,2001,243:40-43.2NagaT,NagaatsuT,SuzukiI.EffetfDP1904
12、,athrbxaneAsynthaseinhibitr,npassiveHeyannnephritisinrats.EnrJphardel,1996,3161:73-80.3杨宏,朱明德,黄佩文,等.中药白鹤粉治疗肾小球肾炎的实验研究.成都中医药大学学报,2000,232:42-45.4王海燕.肾脏病学.北京：人民卫生出版社，1996，532.5张家玮.中医药治疗肾小球肾炎的实验研究进展.国医论坛，2000，151：52.6朱起芝，杜学海.肾炎的动物实验模型.国外医学:内科学分册，1980，71：11-16.7毕柳,王文余.TLA24镶和蛋白对大鼠自身免疫肾小球肾炎的作用.国外医学：免疫学分册
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