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1、项 目总胆固醇（TCH）方 法终点法目 录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备：2.2 静脉采血：。2.3 抗凝剂：2.4 标本处理：3试剂3.1 试剂：3.2校准血清：3.3 试剂与校准血清的稳定性：4仪器5操作6计算7操作性能7.1 精密度：7.2 准确度：7.3 灵敏度：7.4 可报告范围：7.5 特异性：7.6 干扰：8参考值9临床意义附录A: 参数1. 检测原理酯化的胆固醇经酶水解后，经胆固醇氧化酶氧化，所产生的H2O2与 4-氨基安替比林和苯酚反应生成醌亚胺。醌亚胺在520nm 有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。胆固醇酯酶 胆固醇酯 + H2O - 胆
2、固醇 + 脂肪酸胆固醇氧化酶 胆固醇 + O2 - 胆淄烯酮 + H2O2过氧化物酶 H2O2 + 4-氨基安替比林 + 苯酚 - 醌亚胺 + H2O 3. 标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取
3、坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3 抗凝剂：血浆使用EDTANa2（1mg/mL）抗凝。2.4 标本处理：血标本室温放置30min45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8保存。3试剂3.1 试剂：本科适用湖南永和阳光科技有限责任公司TCH试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下：组 成浓 度缓冲液30mmol/L pH=6.50.2 4-氨基安替比林0.25mmol/L 胆固醇酯酶150U/L胆固
4、醇氧化酶100U/L 过氧化物酶5000U/L苯酚25mmol/L叠氮钠0.01%胆固醇标准液 200mg/dL (5.17mmol/L )3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3 试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。试剂储存在18-22稳定28天，试剂应避免污染。试剂颜色为无色至浅红色透明，当试剂变色或者在546NM的吸光度高于0.15ABS，按照试剂失效处理。多项校准血清在2
5、-8储存至标签所示失效日期，复溶后-20保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。试剂盒配备的水标准液在2-8储存至标签所示失效日期，开瓶后2-8储存避免污染，可稳定2个月。4仪器KONELAB 30型号仪器。性能：波长520nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。5操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附，附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6计算A测定C = C0A标准式中：c 测定血清总胆固醇浓度，mmol/L；A测定 标本管吸光度；A标准 标准管吸光度；CO 校准血清中总胆固醇浓度，mmo
6、l/L；7操作性能7.1 精密度：批内CV0.56%，批间CV2.31%。7.2 准确度：检测结果的相对不准确度10%。7.3 灵敏度：总胆固醇为2mmol/L时, 显色吸光度A520nm为：0.141-0.186。7.4 可报告范围：血清与试剂用量之比为1:100时，测定上限为19.3mmol/L。7.5 特异性：测量值在给定值的90%-110范围内。7.6 干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸200mg/ml对测试结果无明显影响。8参考值5.17mmol/L（200mg/dl）9临床意义检测血清中胆固醇的含量，主要用于辅助诊断高血脂症。胆固醇的含量和动脉粥样硬化有一定关联。附录A: 参数
