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1、临床微生物培养基手册大全临床微生物检验 常用基础培养基营养琼脂【用途】供作一般细菌培养和菌株的纯化及传种用【原理】培养基含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖【成分】蛋白胨牛肉膏.氯化钠.琼脂粉蒸馏水p.27.4【制备】将上述成分(除琼脂外)溶于水中校正pH后假如琼脂,煮沸溶解,根据用途不同进行分装,经121灭菌15min,倾注平板或制成斜面,置冰箱保存,两周内保持用完【接种】根据用途不同按常规操作,351824h观察结果【观察结果】在平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为溶血，菌落周围呈绿色为a溶血。溶血的情况可以显微镜下用低【质量控
2、制】金黄色葡萄球菌,菌落浅黄色,直径1.5mm志贺痢疾菌,菌落无色,直径1.5mm铜绿假单胞菌,菌落无色或浅绿色,直径2.5mm血琼脂培养基【用途】适用于各类需氧及兼性厌氧细菌生长，一般细菌学检验标本的分离培养、溶血鉴别及菌种保存【原理】羊血或兔血时细菌生长繁殖的良好营养物质。在4550的基础培养基中加加入血液（510%）可以保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将NaCl的浓度提高到0.85%,则可使血平皿经351824h后色泽仍然鲜艳。在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为溶血。菌落周围呈绿色为溶血。溶血的情况可以显微镜下
3、用低倍镜观察【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维羊血60ml p.27.4【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，置三角瓶内，高压灭菌（12115min）后冷至约50 ，加入无菌纤维羊血，旋转式充分摇匀后倾平板。血琼脂层厚4mm。凝固后，抽样置于35培养1824h，如无菌生长，冷藏备用。【接种】取标本增菌培养物或纯培养物划线接种到平板上，置35培养12d，观察结果【观察结果】在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全被破坏为溶血，菌落周围呈绿色为【质量控制】化脓性链球菌，ATCC19615，生长良好，-溶血。肺炎链球菌，AT
4、CC6303，为溶血。表皮葡萄球菌，ATCC12228，生长良好，不溶血。巧克力培养基【用途】主要用于嗜血杆菌的分离，亦可用于奈瑟菌的增菌培养。【原理】流感嗜血杆菌培养时，需要依赖血液中的X及V因子方能生长繁殖，当培养基加热至8090时，可使血液中的红细胞破裂，以利于嗜血杆菌，奈瑟菌等的生长培养。凡疑有这些菌种存在的标本，均应接种巧克力平板。血液标本培养，增菌后又细菌生长，若移种巧克力平板上，有利于分离更多的细菌。【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维马血、羊血或兔血100mlpH.27.4【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，高压灭菌（12115min）后在809
5、0以无菌方法加入血液，摇匀后置90水浴中。维持该温度15min，使之呈巧克力色取出，至室温冷至约50，倾制平板 。凝固后，抽样置于35培养1824h，如无细菌生长，冷藏备用。【接种】将可疑标本直接划线接种于该培养基上，置35普通培养或置含5%10%二氧化碳环境培养1824h，取出观察细菌生长状况。【观察结果】流感嗜血杆菌菌落微小(0.8mm),无色透明、光滑整齐、似露滴状，48h后达1.5mm，从血液或脑脊液中分离的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心呈凹陷。【质量控制】流感嗜血杆菌ATCC10211，生长良好，菌落典型。肺炎链球菌，ATCC6305，生长良好，菌落典型。【保存】置冰箱
6、，1周内用完。营养肉汤【用途】用于一般细菌的增加培养，加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。【原理】该培养基含有氮及微量无机盐，适宜一般细菌的生长繁殖，因此是最基础的培养基。【成分】牛肉浸液1L蛋白胨10氯化钠5pH7.27.4（牛肉浸液可用3.0g牛肉膏和1L蒸馏水代替）【制备】上述各成分混合溶解，校正pH。分装试管，每管35ml。高压灭菌（12115min），做无菌试验后冷藏备用。【质量控制】金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌均生长良好。肉浸液培养基【用途】供作基础培养用。营养比肉膏汤好，一般营养要求不高的细菌均可生长。【原理】牛肉含有丰富的营养物质，如蛋白质、碳水化合物及无机盐类等，通过
7、水解并用Nacl【成分】新鲜牛肉500蛋白胨10氯化钠5蒸馏水1LpH7.47.6【制备】1.将新鲜牛肉去除脂肪、肌膜及肌腱，切成小块后用绞肉机绞碎(或用刀剁碎)。取500g碎肉，加蒸馏水1L，混合后置冰箱中冷浸过夜。2.将肉浸液取出，煮沸2030min（并不断搅拌，以免沉底、烧焦）。冷后，用绒布或麻布挤压过滤，使所有的肉浸汁尽量挤出。3.加入蛋白胨、氯化钠，加热溶解，补足蒸发的水分。矫正Ph至7.47.6。4.用滤纸过滤，装瓶。高压灭菌（12115min）即成肉浸液。5.与1L肉浸液中加入23g琼脂，即成肉浸液琼脂。【使用】根据用途不同可以制成营养肉汤，以此为基础制成其他培养基。如制作固体培
8、养基，加入琼脂1.52%即成。【质量控制】金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好。【保存】置冰箱可使用较长时间。牛脑心浸液培养基【用途】用于培养要求较高的细菌。【原理】牛心脑浸液是细菌生长的营养物质，磷酸盐为缓冲剂，加上适宜的无机盐，有利于细菌的生长繁殖。【成分】牛脑（小牛脑制成浸液）200牛心（制成浸液）250眎胨或多胨10葡萄糖2Na2HPO4蒸馏水1L。【制备】1.将牛脑、牛心制成浸液，并加水至1L，加入固体成分，加温溶解。2.调整pH为7.6，分装，高压灭菌（12115min）。3.牛脑心浸液中加放1.52%琼脂，即为牛脑心浸液琼脂。【临床经验】1.培养厌氧菌时
9、再加入半胱氨酸0.5g。2.若在此培养基中再加入酵母浸出物5g/1L，则效果更佳。肝浸液及肝浸液琼脂【用途】使用于对营养要求较高的细菌培养。【原理】肝组织除了含有丰富的营养成分，如蛋白质、碳水化合物以及无机盐外，还含有胆固醇、铁化合物、血红蛋白等细菌生长因子，有利于各种细菌的生长繁殖。【成分】牛肝或猪肝500蛋白胨10氯化钠5蒸馏水1LpH7.0【制备】将新鲜的牛或猪肝洗净，除去脂肪、浆膜、大血管、肝胆总管，绞碎，置铝制容器内，加蒸馏水500ml，经流动蒸汽加热30min，取出调匀后，再蒸90min。然后，用数层纱布或绒布过滤。滤液中加入蛋白胨、氯化钠，并加蒸馏水至1L。加热溶解，矫正pH至7
10、.0，再置于流动蒸汽蒸30min。用滤纸过滤，分装经高压灭菌（12115min），即成肝浸液。于每100ml肝浸液中加入23g琼脂，即成肝浸液琼脂。【保存】置冰箱内有效期较长。蛋白胨水【用途】1.供细菌靛基质（吲哚）试验用2.一般细菌培养和传代【原理】培养基中的蛋白胨含有色氨酸，能被有些细菌利用而成靛基质，与试剂对二甲氨基苯醛缩二吲哚。而不利用色氨酸的细菌则无此反应，故可鉴别细菌。因含有胨和氯化钠，故可供一般培养和传代。【成分】蛋白胨（或胰蛋白胨）10氯化钠5蒸馏水1LpH7.2【制备】将上述成分溶于水中，校正pH，分装试管，每管23ml，至121灭菌15min备用【接种】将待检菌接种培养基内
11、，经35培养1824h。【质量控制】大肠埃希菌，生长极好，靛基质（+）伤寒沙门菌，生长良好，靛基质（-）金黄色葡萄球菌，生长良好，靛基质（-）血液增菌培养基【用途】用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。【成分】牛肉浸液1L眎胨或多价蛋白胨10氯化钠5葡萄糖3枸橼酸钠3酵母浸膏3琼脂0.75 0.75%对氨基苯甲酸5mlpH7.4【制备】将上述各成分混合校正pH。分装于螺旋盖有橡皮塞可穿刺的瓶，每瓶50ml。高压灭菌（12115min）后，无菌手续加入灭菌硫酸镁(24.65%)溶液1ml。也可选用各种商品血液培养系统。葡萄糖肉汤【用途】用于血液增菌。【成分】蛋白胨10氯化钠5肉浸液（或心浸液）1L葡
12、萄糖3枸橼酸钠3 0.5%对氨基苯甲酸水溶液10ml 24.65%MgSO4?7H2O水溶液20ml青霉素酶1000U【制备】将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解，再加入葡萄糖、枸橼酸钠、对氨基苯甲酸及硫酸镁，继续煮沸5min，并补足失水，调整pH至7.8。过滤分装于带有反口橡皮塞的玻璃瓶内，每瓶装50ml，高压灭菌11520min，每瓶加入青霉素酶50U，经无菌试验合格后，冷却备用。【接种】将采取的血液标本，以无菌手续注入培养液瓶中（血液1ml，培养液10ml），置35培养箱内，每日取出观察一次结果。【观察结果】经35培养，如有细菌生长，可出现数种不同的表现，应随时做分离培养，可选用血琼脂
13、、EMB及巧克力平板等。无细菌生长表现的培养瓶，需连续观察7d，仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中，至于应做2次分离培养。【临床经验】1.枸橼酸钠为抗凝剂，使血液加入培养基中不凝固。2.对氨基苯甲酸能中和血液中磺胺类药物的抑制作用。3.硫酸镁能破坏血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑制作用。4.本培养基近年来有许多改良配方，如加入0.30.5%酵母浸膏以增菌培养；加0.2%核酸刺激细菌生长；加0.1%粘液素能被覆于细菌的表面，使细菌免受抗体破坏；加入SPS可提高检出率。常用阳性及阴性球菌分离培养基甘露醇琼脂【用途】供致病性葡萄球菌分离培养用。【原理】根据致病葡萄球菌耐盐性
14、强和发酵甘露醇的两大特性，在25g/L含盐量的甘露醇琼脂平板上能生长，并形成橙黄色均落，酚红指示剂起显色作用。而凝固酶阴性葡萄球菌不发酵甘露醇呈现红色菌落。微球菌及大部分革兰阴性杆菌基本不生长。因此该平板起选择性分离和鉴别作用。【成分】眎蛋白胨10牛肉膏10氯化钠25琼脂20甘露醇10 0.2%酚红水溶液12.5ml蒸馏水1LpH7.4【制备】将上述成分（除甘露醇、酚红外）溶于水中，加热后溶解，校正pH后加入甘露醇和酚红水溶液，摇匀分装，经11515min灭菌，待冷却到50时倾注平皿，凝固后冷藏备用。【接种】取待检标本或增菌培养物划平板，置35培养1824h。【观察结果】挑取橙黄色菌落，接种营
15、养琼脂斜面，经培养后做涂片和其他生化鉴定。【质量控制】金黄色葡萄球菌，生长，菌落呈黄色，直径1.0mm.表皮葡萄球菌，生长，菌落呈红色，直径1.0mm.普通变形杆菌、大肠埃细菌，基本不生长。【保存】置冰箱内，使用期限23d，如用无菌塑料袋包装可延长使用时间。哥伦比亚血琼脂【用途】供革兰阳性球菌分离用。【原理】培养基内含有萘啶酸和黏菌素，对革兰阴性菌有很强的抑制作用。【成分】胰酪蛋白胨12牛肉蛋白胨15玉米淀粉1氯化钠5黏菌素10mg萘啶酸15mg 琼脂粉12蒸馏水1L脱纤维羊血50mlpH7.27.4【制备】将上述各成分（羊血和抗菌药物除外）充分混合，加热溶解，调pH7.27.5，11515min灭菌。待冷至50时加入脱纤维羊血
