《人类免疫缺陷病毒(I型)HIV-RNA核酸定量检测SOP》由会员分享，可在线阅读，更多相关《人类免疫缺陷病毒(I型)HIV-RNA核酸定量检测SOP（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、人类免疫缺陷病毒（I型）核酸定量检测系统原则操作程序1 目的:规范超敏PR仪器配备系统及人类免疫缺陷病毒(V-I RA)的检测过程,保证检测成果的精确性和反复性。. 检测措施和原理21检测措施:TaqMa探针荧光定量CR法。.2 检测原理：人类免疫缺陷病毒（I型)核算定量检测试剂盒（R-荧光法)采用核酸扩增技术,定量检测人血浆中HI-IRNA。该措施涉及三个重要环节:（1)样品制备以分离HI-RNA;（2)靶NA的逆转录形成互补DNA（cDA);（)靶(cDA）的PCR扩增以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。3标本规定1 标本类型:血浆(ETA抗凝）。32 标本的采集与解决321
2、 标本采集量：采集患者静脉血6m（ED抗凝真空采血管）。.2.2 标本解决:标本采集后应在小时内送至实验室,实验室收到标本后在1小时内解决标本。32.1签收：门诊、住院以及CD标本签收条码，并做好有关登记工作。.22.2编号:对标本进行唯一编号，内容如下:“年月日6位数字+标本号3位数字”,例如1月1日收到一种H-RNA标本即编号为:“”。3.2.离心：80-160g，0min离心标本。.2.4标本保存：血浆在室温（253)最多存储1天；-最多存储天;-80可存储6周。将待检血浆以管每管120 uL量存储于20mL戴螺旋盖的无菌聚丙烯管,在管壁编写如3.22.2的编号。未检标本放置于专用样本盒
3、中,冻存于-80冰箱。已检血浆置-0冰箱保存个月,到期后按科室有关程序作废弃标本解决。4.仪器和试剂.2 试剂：（配套封闭试剂).2.1试剂盒（涉及核酸提取试剂、质控品及阳性定量参照品组分、CR 检测试剂组分）保存于2环境下,有效期2个月。.2.3试剂开瓶后,在室温条件下放置时间不应超过2小时;2-8条件下不超过30天。4.2.4 重要构成成分：组份名称规格数量质控品阴性质控品1000L/管1临界阳性质控品1000L/管1强阳性质控品100/管1HIV2CS8测试HI2C248测试1HIV2CS38测试1HIV2CS448测试.原则操作5.1 COBA pliPrep_COBA TMa 48的
4、配备如下:配备实验所需的架子和耗材相应位置CBAAmplPpCOBASTaqMan a. Ktube放在样本架上b. 带有K-ips的K-ip 架c 将带有样本或质控的S-us放在样本架上d. 带有SPU 的SU-架e. CS1放在一种试剂架f. , S, S放在一种试剂架g. 将空的K-arrier放在 K-cier架上样本核酸提取完毕后:Kcrrier上的-tbs手工转移 F-H-HJA-MP(M）.2. OS mliPrep_CBAS TaqMan 8上使用试剂及耗材的保存及注意事项:1). 所有试剂（HIV- tet试剂)-保存,即拿即用；）.试剂启用后，可保存28 day （-8);
5、3). 试剂启用后，在Cobasplipr上合计使用时间最多 hr;4). TM()阴性质控、(+)弱阳性质控、 H(+）强阳性质控,使用后的废弃；5) 洗液230保存,打开后可使用28 days；6）. 耗材（S-tbe/样本条码/K-tip/K-tube/SPU)常温保存。.3COBAS Amlre_CO aqMan 48上使用样本的保存及注意事项：1） 需要的样本为血浆;2).血样在225 下运送,2rs内(IVRNA)收集出血浆(室温800-600g离心 0分钟)；3）HIRNA检测:血浆可在室温下(5-30)保存最多1天，在28最多保存天,或者-2-8下长期保存，至少6周；4).血浆
6、建议倒取100-20 L进行保存；5）. 血浆冷冻时,最多冻融5次不损失HIV RNA。.4.COBAmpliPre_COBASTaqMan48 HBV DNA定量检测操作流程:A仪器初始化及维护A1 打开COASmplPre 和 OBA Taqan 开关,等待仪器初始化完毕,为 sand-y 状态2登陆电脑及 AMPLILINK软件登陆WidowsP操作系统(Use ID 和pswod)a) 双击桌面上AMPLIINK 软件图标b) 登陆AMPLILK 软件( UserID和 passwrd）A3通过软件Sats界面检查洗液量与否足够，如不够需要更换新的洗液A4检查软件维护界面Du按钮下列出
7、的需要进行的维护内容，按照维护手册进行相应内容的维护工作 ，COBA AmliPe 仪器自动进行系统初始化工作B加载试剂将所有实验需要的试剂匣从28C冰箱拿出,立即放在试剂架上并放入COBAS AmpliPrep 仪器中,实验开始前在仪器上平衡至少0分钟。不要将试剂匣放在仪器外进行温度平衡,以免在试剂匣表面形成水凝结,导致条码的损坏。如果在试剂匣表面有水凝结，不要对条码部位进行擦拭，以免损坏条码导致仪器无法对条码进行辨识。B1将C试剂匣放在一种试剂架上，将试剂匣 CS, S3和CS4放于另一种试剂架上2将放有C的试剂架放入到BAS AmliPr仪器中的A位置B将放有CS2, CS 和 CS的试
8、剂架放入到CBAS AmpliPep仪器中的B、C、D、E的任一位置 加载耗材 注意:根据检测的样本数计算需要的OB AmliPep 试剂匣数目, 样本解决单元(S)， 样本管(S-tube）, K-枪头(K-tps） 和 K-管(K-tubes)的数量。 每个样本或质控分别需要 一种SPU, 一种-tub, 一种K-tip 和一种tbe。C加载样本解决单元(SPU)计算需要PU数量，一种样本或质控需要一种SPU 将SPs 放入到SP 架中,向下压SPU的边沿部分（不要遇到Sip的部分)使PU完全坐稳在SPU架的底部确认 PU 对的的放入在SU 架中 (若SUs放置不对的,也许导致仪器运营中停
9、止)将SU架放入到OBAS ApliPep仪器的 J， 或 L位置C3使用COB TaqMa分析仪时，将-crrier 放在K-carir架上，放在COBAS Amplre 的M,N, O 或 P 位置C加载K-ti架于OBAAmpiPre 上M，N, O 或 P位置D创立命令和加载样本D1样本架准备，将样本的条码夹放在样本架上相应有样本管 (S-tube）的地方将专用于质控的条码夹放在样本架上与阴性质控(-) C， 弱阳性质控L(+) 和强阳性质控相相应的地方注意对相应的质控使用对的的质控条码夹D2D通过AMPLILINK软件创立命令 （见下图）在软件ordrs界面下的ample rack按
10、钮下创立样本及质控的命令选择相应的检测项目，并进行保存打印创立好的样本及质控工作表4&在生物安全柜中进行样本准备涡旋混匀样本及质控3-5秒,将000 l 样本及质控品转移到相应的样本管-tub中;避免将颗粒或凝块状物质转移到样本管S-ube中装有样本及质控的样本管放到样本架相应的位置(与创立好的命令工作表中的位置一致);保证质控条码上的l 号码与质控的ot号码一致；保证相应的质控使用对的的质控条码夹 ；避免样本或质控污染样本管tube的上部D6加载带有样本管的样本架于CBAS AmpiPr 仪器的F, 或 H 位置E开始运营COBSmpliPrep 仪器E1在MPLILIN 软件上启动运营OB
11、S Amplirp检查Stat 界面下，保证没有样本、质控或试剂被锁住 保证所有的样本和耗材都已加载到ASApliPe中，点击tt 按钮COBAS Aplirep仪器运营结束后，手工转移提取好的样本到OBAS aqa4中,应避免将所有提取好的样本及质控直接放置于日光或光源下 F1检查AMLILIN 软件中也许显示的标记flags及错误信息2在COBASAmpliPp解决好的样本及质控必须在12 分钟内转移到OBS TqMa 4中开始反映,不要冷冻或在2-储存解决好的样本及质控。F3丢弃COBS ApliPrep 仪器中的废物G加载解决好的样本及质控G1加载解决好的样本及质控到OAS TaMan
12、48 中通过K-carrir 转移工具，手工转移带有 K-carier 的 carr 架到COBaqMan 中H开始运营BA TaMn 1打开扩增仪的外部盖子，将-crrier 放入到扩增模块中并关闭盖子，开始运营COBAS aqan 8ICOB TqMan 48 运营结束I1运营结束，打印成果报告 检查成果中的标记lags 或错误信息接受成果，数据自动备份(arhive)I2将检测完毕的K-te 从COBAS Taqn 8的废物盒中拿出，根据实验室规定进行相应解决或丢弃 7.质量控制7.阴性质控品:必须产生“没有检测到目的”的成果。如果有标记标为无效,那么整个批次都是无效的。7. 阳性质控品
13、:阳性质控品的检测值应当落在其指定的范畴内,如果一种或两个质控品标记表达无效,那么整个批次无效。8成果报告对于有效批次，检查每个样品与否在成果打印中浮现标记或注释。成果解释如下:有效批次也许涉及有效和无效样品的成果，这取决于每个样品与否得到标记和/或注释。样品成果解释如下:测定成果解释没有检测到目的HI-I的CT值超过该检测的界线之上或者未能获得HIV-的CT值。报告为“HIVI Notdeected”。1.00E0 c/m成果超过线性范畴。报告“1.0E+07 c/mL”。如果但愿得到定量成果,必须稀释原始样本,反复该测试。以1：00与HIV-阴性经EDTA解决人类血浆稀释。根据稀释因子换算最后的成果。性能参数9. 最低检出限及定量限:试剂最低检出限浓度为0 p/mL。9.2 精密度：检测高浓度（0E+07 cp/m)，低浓度（2+0 c/m)HIV
