《常用培养基的配方》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常用培养基的配方（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、伊红美蓝培养基原理般用来鉴定大肠杆菌。伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌 等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+,故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌步骤如下： 制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。 用灭过菌
2、的锥形瓶盛取河水或沟水，按1 : 10稀释。 取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。 将划线后的培养皿倒置37C温箱中培养1824小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。 将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。配置方法蛋白胨10g乳糖10g 磷酸氢二钾 2g琼脂2030g 蒸馏水1000ml2%尹红水溶液 20ml0.5 %美蓝水溶液 13ml储备培养基的制备先将琼脂加至 900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.27.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳
3、糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115C灭菌20min ,贮存于冷暗处备用。制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH,分装于烧瓶内，121 C高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至5055C，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。麦康凯培养基原理1. 全称麦康凯琼脂或是麦康凯培养基2种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈 现红色。配置方法蛋白胨17g脙胨3g猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g氯化钠5g琼脂17g蒸馏水1000mL乳糖10g0.01%结晶紫水溶液10mL0.5%中性红水溶液 5mL麦康凯-制法1将蛋白胨、胨
4、、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121 C高压灭菌15min备用。2临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至5055C时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。吲哚试验吲哚（indol）试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨 酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色， 是为吲哚试验阳性。LB培养基配方胰化蛋白胨1g 酵母提取物0.5g NaCI 1g 琼脂1.5-2g 水100mlLB培 养基 -LB培养
5、基条件LB培 养基 -固态培养基LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且 倒好板。LB固体培养基倒板1. 配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉2. 抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55C的水浴中，待培养基温度降到55C时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。3. 倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后， 打开盖子，在紫外下照10-15分钟。4. 保存：用封口胶封边，并倒置放于4C保存，一个月内使用。牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂）配方蛋白胨10g；牛肉膏3g ;氯化钠5g；琼脂1520g;蒸
6、馏水1000mL ;制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约 2mL，校正pH至7.27.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121 C高压灭菌15min。注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面，则应为2%。甲基红试验甲基红试验-化学属性甲基红（Methyl Red）试验肠杆菌科各菌属都能发酵 葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生 丙酮酸，进一步分解中，由于糖 代谢的途径不同，可产生乳酸， 琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基 PH值下 降至pH4.5以下，使甲基红 指示剂变红。甲基红试验-
7、试验方法挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于36 1 C或30 C （以30 C较好）35天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂12滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定 结果。甲基红为酸性指示剂，pH范围为4.46.0,其pK值为5.0。故在pH5.0以下，随酸度而增强 黄色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养 时间，重复试验。尿素酶某些细菌能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱。将待检菌接种于含有尿素的培养基中，35C孵育1824h，观察结果。红
8、色为阳性，不变为阴性。主要用于肠杆菌科 变形杆菌属、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定。明胶液化明胶液化gelaune liquefaction指细菌把明胶胶分解成液状的现象。明胶液化-它的特征这种能力可因细菌种类不同而有显著差异，因此很早以来就被用来作为鉴别、测定细菌的一种特征。明胶液化-适应范围葡萄球菌属、变形菌属、芽孢杆菌属均具有液化能力，而大肠杆菌就无这种液化能力。由于明胶是在热水中溶解胶原（collagen）而成的蛋白质，因此，它是由产生于体外的蛋白酶进 行分解的。用血清或蛋清清蛋白代替明胶也可看到大致相同的现象。VP试验vp试验-试验简介英VP test微生物检验中常用的
9、生化反应 之一。某些细菌在葡萄糖蛋白胨水 培养基中能分解葡萄糖产生 丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇， 后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为 二乙酰， 二乙酰与蛋白胨中的 胍基生成红色化合物，称 V P （+）反应。VP试验-试验方法1） O Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于 36 1 C培养48h，培养液1ml加O Meara试剂（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇 动试管12min，静置于室温或36 1 C恒温箱，若4h内不呈现伊红、即判定为阴性。亦有主张在4850 C水浴放置2h后判定结果者。2） Barritt
10、氏法：将试验菌接种于通用培养基，于 36 1 C培养4天、培养液2.5ml先加入 5 C a萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液 0.2ml ,摇动25min , 阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36 1 C恒温箱，如2h内仍不显 现红色、可判定为阴性。3）快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，孚L化接种于其中，加入5% a -萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min , 判定结果。不产酸的培养物不能使用。本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌
11、时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。生理盐水生理盐水就是0.9%的氯化钠水溶液，因为它的渗透压值和正常人的血浆、组织液都是大致一样的，所以可以用作补液（不会降低和增加正常人体内钠离子浓度）以及其他医疗用途，也 常用作体外培养活组织、细胞。氯化钠：俗称盐、食盐。菌注射用水一般使用来溶解难溶于生理盐水药物使用的，生理盐水就是我们静脉点滴常用的0.9%的氯化钠注射液，外用具有一定的杀菌消毒作用。所以它们不是一样的概念.。人体细胞生活中所处液体环境的浓度配方：哺乳类 需用生理盐水浓度是 0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少量 蒸馏水中，稀 释到100毫升。血琼脂平
12、板制法：取营养琼脂（PH7. 6）,加热使其溶解待冷至 45-50 C，以灭菌操作于每 100毫升营 养琼脂加灭菌脱纤维羊血 或兔血5-10毫升，轻轻摇匀，立即倾注于 平板或分装试管，制成斜 面备用。血琼脂平板-用途用途：1. 一般棉拭子均接种此培养基。2. 尿液，脓液3. 分离细菌标本用。胰蛋白胨胰蛋白胨水成分 胰蛋白胨10g;蒸馏水1000mL ; pH7.0制法将上述成分溶解，校正 pH。分装试管，121 C高压灭菌15min。Baird Parker氏培养基成分胰蛋白胨10g ;牛肉膏 5g ;酵母膏 1g ;丙酮酸钠10g ;甘氨酸 12g ;氯化锂(LiCI 6H2O) 5g ;琼脂 20g ;蒸馏水 950mL ; PH7.5。增菌剂的配法30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚蹄酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。 制法将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。冷至25C,校正pH。分装每瓶95mL ,121 C高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50C,每95mL加入预热至50C的卵黄亚蹄酸钾增菌剂 5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不 得超过48h。血浆凝固酶血浆凝固酶-血浆凝固酶血浆凝固酶：是能使含有肝素等 抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质,致病株大多数能产生，是鉴别葡萄球菌 有无致病性的重要指标
