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1、急性肾盂肾炎大鼠模型的建立与观察作者：周栋,孙伟,何伟明,高坤,陶兴,陈继红【摘要】目的 制作与人肾盂肾炎相似的动物模型,为临床治疗急 慢性泌尿系感染性疾病打下实验基础。方法 采用将大鼠单侧输尿管 “半结扎”并同时向膀胱内注射大肠杆菌的方法造成急性肾盂肾炎的 病理改变,并应用滋肾通关胶囊、三金片等进行干预观察。结果急性 肾盂肾炎中剂量组、西药组、中西医结合组的大鼠体重增长明显,给药 后大鼠的机体状况良好,药物治疗有效。结论急性肾盂肾炎的大鼠模 型在生长状态、体重系数、肾重系数以及肾脏病理改变方面均与人肾 盂肾炎发病相似,造模成功。【关键词】急性肾盂肾炎；滋肾通关胶囊；大鼠Abstract：Ob
2、jective To made the animal model which is similar to the human pyelonephritis to strengthen the experimental basis for the therapy of acute urologic infectious disease. Method Using the method of semi-ligation of the ureter on single lateral and the injection of Enterobacter into the bladder to get
3、pathologic transformation. Simultaneously, giving the different preparation of Zishen- tongguan Capsule, Sanjin Pills to intervene the models. Result Zishentongguan capsule middle dosage, western medicine treatment team had get obviously effect on rat body weight increasing, the drug treatment were
4、validity. Conclusion The rat model with the acute nephropyelitis is similar to the character in the break of human, which manifest on the appearance, mental condition, body weight coefficient, kidney weight coefficient and pathologic change of the kidney. Succeed in the model establishment.Key words
5、 ： acute pyelonephritis ； Zishentongguan capsule；rat肾盂肾炎是临床常见的尿路系统感染性疾病,急性期如治疗 不当常可复发或转为慢性,最终进入慢性肾功能不全阶段。虽然随着疾 病谱的变化,以肾盂肾炎为基础病变而导致慢性肾功能不全的比例逐 渐下降,但肾盂肾炎的发病率、复发率以及急性肾盂肾炎的转慢率并未 见降低。因此,制作与人类肾盂肾炎相似的动物模型,从发病机制上正 确认识肾盂肾炎,从而研究出行之有效的治疗方案,是一项很有必要也 很有意义的工作。1 实验材料1.1动物及饲养环境SD纯种大鼠，雄性，体重（140土 10）g,南京青龙山动物饲养厂 提供，许
6、可证号：SCXK-2001-0007。实验全部过程在江苏省中医院临床 药理研究中心进行，动物饲养符合二级标准，大鼠适应性饲养3 d后造 模，排除非健康实验动物对实验结果的影响。全价饲料由协同医药生物 工程责任有限公司提供，批号040422。1.2菌种造模用大肠杆菌0111B4标准菌株购自中国药品生物制品检定所, 菌号44155-11。1.3仪器FA1004电子分析天平，上海分析天平厂。1.4药物滋肾丸：黄柏、知母、肉桂按10：10：1分别研末，加入炼蜜， 配制成初始浓度为0.25 g/mL后稀释；滋肾通关胶囊：黄柏、知母分 别醇提3次，浓缩后加入肉桂粉末，浓度比仍为10：10：1，配制成初始
7、浓度为1.9 g/mL后稀释；滋肾通关胶囊（肉桂水提）：黄柏、知母分别 醇提3次后浓缩，肉桂水提后将三药提取物混合，浓度比仍为10：10： 1,配制成初始浓度为1.4 g/mL后稀释；三金片（桂林三金药业股份有 限公司生产，批号0406080）:取成品三金片（每粒含原药材3.5 g）,研 末，溶解，配成为0.29 g/mL的溶液直接灌胃；左氧氟沙星（商品名：乐 朗，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号04050751）：取左氧氟沙星 片（每片100 mg），研末溶解，配成浓度为6.6 mg/mL的溶液直接灌胃。2 实验方法2.1菌液制备37 C培养箱中肉汤过夜培养大肠杆菌O111B4标准菌株24
8、 h，使 其浓度达 0.5 麦氏单位，再用加样器稀释菌悬液 ，使最终浓度达 105/mL。2.2模型制备按参考文献1 方法结合实际操作改进。大鼠禁水18 h后,2% 戊巴比妥钠40 mg/kg，腹腔注射麻醉。动物仰卧固定于手术台上，腹部 皮肤去毛后消毒，铺无菌手术巾，下腹正中切口，长约2 cm,逐层切开腹 壁进入腹腔,在左侧后腹壁辨识左侧输尿管后,用4号缝合丝线从中段 输尿管两旁分别向腹前壁外侧穿针并引出缝合线，用动脉夹夹闭阴茎， 用TB针向膀胱内缓慢注射0.5 mL菌液，然后拉紧腹壁外侧的缝合线两 端，以适当的松紧度“结扎”输尿管，逐层缝合腹壁切口，恢复供水和饮 食。手术后24 h拆去腹壁外
9、面的输尿管结扎线,使输尿管重新开放。2.3 分组实验大鼠共180只，分为10组，每组18只，即假手术组、滋肾 通关胶囊水提组、滋肾丸组、三金片组、西药组、中西药组、模型组 及滋肾通关胶囊小、中、大剂量组，分别于实验造模后第3、7、14天 处死，每次每组处死6只。假手术组开腹不注射菌液，假手术组第3批 处死大鼠，造模时注射菌液，并以中药西药灌胃，其余各组膀胱注射 菌液。2. 4灌胃给药由于不同药物的当量不一，以成人1 d服用该药的总量为参照, 根据大鼠体重，参考文献2方法学，按公式d大鼠=d人乂（R大鼠/R人）X（W人1/3/W大鼠1/3）计算，其中R为体型系数,W 为体重,d即为每日应服用量。
10、分别计算出大鼠常规每日摄入量根据公 斤体重计算应为人的5. 477倍，我们在实验中滋肾丸、滋肾通关胶囊小 剂量组、三金片组、西药组大鼠用药量均为常规量（为方便计算，取 5 倍），中剂量及大剂量给药则为常规量的10、20倍。2. 5检测项目观察动物的生长情况 （包括外观及活动情况 ）,每批处死时称体 重、肾重,并计算肾重系数。2.6 统计学方法应用 SPSS11.5 统计软件包进行统计分析。3 结果3.1 一般情况综合3 批大鼠情况,总体来说,模型组、滋肾通关胶囊小剂量 组、滋肾丸组、三金片组大鼠精神萎靡,倦卧少动,毛发光泽差、蓬乱； 滋肾通关胶囊中剂量组、西药组大鼠活动良好,毛色光亮、整齐；假
11、手 术组、滋肾通关胶囊大剂量组、滋肾通关胶囊水提组活动情况无明显 改变。3.2 肾脏组织肉眼观察假手术组结扎侧肾脏（左）无明显改变,除个别肾脏因手术过程中 输尿管断裂而呈代偿性增大；未结扎侧肾脏（右）无明显改变。模型组 结扎侧肾脏肾表面可见数量不等的微小脓肿 ,个别肾脏可见较大脓肿 突出肾脏表面,肾切面肾盂扩大,黏膜充血、肿胀,肾盂内可见脓性分泌 物,有的肾切面可见微小脓肿或锥形炎症灶；未结扎侧肾脏外观和切面 无明显异常,个别色泽偏缺血性变,极个别有微小炎症灶。滋肾通关胶 囊中剂量组结扎侧肾脏表面光滑,脓肿点不多,且肾脏增大不明显,色 泽红；未结扎侧肾脏无明显变化。西药组结扎侧肾脏表面光滑,脓
12、肿点 较少,增大不明显,但肾脏色泽呈缺血性改变；未结扎侧肾脏无脓点形 成,但肾脏色泽呈缺血性改变。其余各组结扎侧肾脏肾脏外观表现无明 显差异,多明显增大,脓肿形成较多,个别脓肿灶较大；未结扎侧肾脏无 明显变化。3.3 大鼠处死前后体重变化比较大鼠在开放性实验室饲养,符合二级标准。由于大肠杆菌注射后, 大鼠的个体耐受性不一,以及治疗效果差异,大鼠的体重则与这些因素 存在明显相关性；且实验观察表明,体重较小的大鼠易于死亡。将 3 批大鼠的体重资料分别统计后汇总,得出结论,与模型组相比,滋肾通 关胶囊中剂量组、西药组、中西医结合组的大鼠体重增长明显；造模 成功大鼠给药后机体状况良好,药物治疗有效,但
13、以中西药结合灌胃组 大鼠生长情况最好,其次为西药组,再次为滋肾通关胶囊中剂量组,余 组无明显统计学意义。详见表1。表1 综合3批处死的大鼠体重变化 比较（略）注：与滋肾通关中剂量组、西药组、中西药组比较,在95% 的置信水平, *P<0.05。3.4 大鼠肾重系数比较综合 3 批处死大鼠总的肾重系数统计分析,以滋肾通关胶囊 中剂量组的肾脏增大最不明显,其次为中西药结合组及滋肾丸组,再次 为三金片组,而西药组的肾脏增大与模型组接近,但以滋肾通关胶囊小 剂量组的肾脏增大最为明显。大鼠肾重系数计算公式：大鼠肾重系数 =肾重（去被膜）/大鼠末次体重X100。结果左肾系数模型组与假手 术组比较,在
14、 95%置信水平上有统计学意义,说明造模成功；滋肾通关 胶囊中剂量组左肾系数与模型组比较,在 90%置信水平上有统计学意 义。详见表2。表2 综合3批处死的大鼠肾重系数比较（略）4 讨论本次实验我们应用古方滋肾丸,并以两种不同的剂型与临床 治疗泌尿系感染的常用药物三金片、乐朗等作比较。结果显示,在对造 模成功大鼠的机体状况改善方面,滋肾通关胶囊中剂量组明显好于三 金片和滋肾丸组,而在肾脏的改变方面,滋肾通关胶囊中剂量组大鼠肾 脏的增大系数亦小于其他各组,显示出较好的治疗作用。但根据统计表 可以看出,不同剂量组之间,体重指数、肾重系数的差异还是存在的, 这可能与滋肾通关胶囊中部分药物的使用量有关 ,今后我们将做进一 步深入研究。【参考文献】1 侯芳玉,高庆英,郭 超.大鼠急性逆行性肾盂肾炎模型的制作J.中国实验动物学杂志,1998, 8(1)： 31 34.2陈 奇.中药药理研究方法学M.北京：人民卫生出版 社,1993.1103.
