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1、脱氧胆酸羧甲基壳聚糖自聚集纳米粒作为阿霉素传递系统的研究本文制备了两亲性脱氧胆酸-竣甲基壳聚糖（DCMC总聚集纳米粒（SNPs）作为 疏水抗癌药物阿霉素的传递载体。带负电荷的亲水性竣甲基覆盖 SNPs外壳，其在 生理pH条件下可保持稳定。在微酸性的肿瘤组织细胞外液, 部分羧甲基发生质子化 , 壳亲水性降低, 可增加其对癌细胞的亲和力和细胞摄取。在细胞内酸性环境, 氨基和羧基发生进一步质子化 , 纳米粒的核- 壳结构变形, 并聚集沉淀, 引发药物快速释放 , 最终药物释放到胞浆。这样的系统是一种有效的药物传递方式 , 可以作为疏水抗癌药物的递送载体。本文首先以不同分子量的壳聚糖为母体聚合物 ,
2、经亲水修饰制备了水溶性羧甲基壳聚糖（CMCS）进一步通过脱氧胆酸-N-琥珀酰亚胺活化酯与CMCS勺氨基反应，得到两亲性脱氧胆酸修饰的羧甲基壳聚糖（DCMC。）采用FTIR、1H NMR胶体滴定等方法对合成产物进行了表征。优化了 CMCS 的合成工艺。通过才S制CS的分子量及DOCA-NHS CS单元白比例,合成了三种不同分子量及不同DOC做代度的两亲性聚合物。本研究合成的脱氧胆酸 -竣甲基壳聚糖 （DCMC在水溶液中，通过探头超声作用可形成规则近球形，分散性良好的自聚集 纳米粒，粒径为87.7174.5nm。随着疏水基团DOC做代度增加和CS分子量降低，临界聚集浓度（CAC）降低。DCM聚集纳
3、米粒具有pH敏感的聚集、沉淀和结构变形行为。以粒径为指标考察了 4c放置3个月的稳定性：随着DOC儆代度增加，CS分子量降低，DCMR内米粒有一定稳定性增加的趋势。 本研究以阿霉素作为模型药物 , 采用透析法制备了规则球形, 分散性良好的载阿霉素脱氧胆酸- 羧甲基壳聚糖自聚集纳米粒 (DNP), 考察了各处方因素对载药的影响：在一定范围内 , 随着DOX/DCMC例、载体浓度和DOX&度提高，载药量和包封率增加；随DOX/DCMC 比例增加 , 粒径增大 ,zeta 电位绝对值则降低。随DOC取代度和C朋子量增大,纳米粒的包封率和载药量稍有增加,而粒径则分别显著降低和增大。 DNP 在体外释药
4、最初 8h 内存在一个快速释放, 此后进入一个符合Higuich 方程、 Ritger-Peppas 方程或 Weibull 分布的缓慢释药期：随着载药量的提高、DOC做代度的降低、释放介质pH降低以及CS分子量增大, 药物释放明显加快。DNP 在 37动态条件下密封避光振荡7 d, 以及 4密封避光放置3 个月 ,稳定性良好。采用MTT去，以人乳腺癌细胞系MCF-7及人乳腺癌耐药细胞MCF-7/Adr为模型的体外细胞毒作用实验结果表明,三种分子量的DNP Xt MCF-7 的细胞毒作用显著弱于 DOX容液,其中DNP-600 kDa的作用明显强于DNP-50 kDa;对于MCF-7/Adr,
5、三种分子量的DNP抑制作用无显著性差异，均极显著强于DOX容液组,表现了明显克服多药耐药的效果，且耐药逆转因子随孵育时间延长 明显增大。激光共聚焦显彳镜结果表明，DOX溶液与MCF-7W育后，迅速进入细胞核；而在 MCF-7/Adr, 只在细胞浆出现极其微弱的荧光, 随着孵育时间延长, 细胞内荧光强度也没有明显增强。DNP在MCF-7和MCF-7/Adr的核分布均为受药物释放限制的时间依赖过程：与 MCF-7孵育0.5 h后，主要分布在胞浆，随孵育时间延长，细胞核累积量逐渐增加。流式细胞术结果表明，与DOXS液相比，DNP在耐药细胞MCF-7/Adr内的摄 取量增多 , 且显著降低了外排速度,
6、 增加了细胞内药物滞留量, 因而一定程度上克服了 MCF-7/Adr 的耐药性。 建立了阿霉素血浆样品和组织样品中的含量分析方法。大鼠体内药动学实验结果表明 , 与阿霉素溶液组相比 , 静脉注射三种不同分子量的DNP后，消除半衰期（t1/2）、药-时曲线下面积（AUC）与体内平均滞留时 问（MRT照显著增加（P<0.05）,同时表观分布容积（Vz）和血浆消除率均显著降 低；且随着分子量增加，AUC（o-oo）显著增大（p&it；0.0i）,清除率（CL）显著降低 （P<0.05） 。 表明 DNP 消除较阿霉素溶液显著减慢, 可以显著延长阿霉素的血液循环时间，且CS分子量越大，长循
7、环效果越好。与阿霉素溶液组相比，DNP组在荷肝癌H22实体瘤小鼠的心、肺和肾脏的分布显著降低, 而在肝脏、 脾、 肿瘤和血液中的分布明显增加 , 三个靶向评价指标均表明 DNP 具有明显的肝、脾和肿瘤靶向性以及长循环特性, 且随着分子量增加，上述靶向效果更明显。荷肝癌H22实体瘤小鼠体内药效学实验结果表明，不同 分子量CS制备的载药纳米粒中DNP-600 kDa和DNP-300 kDa抑瘤作用较强， 且抑瘤效果存在剂量依赖性。相同剂量下（5mg/kg）, DOX容液组与DNP-600 kDa组抑瘤效果无显著差异： 提高DNP药物剂量至10 mg/kg时,DNP-600 kDa的抑制作用显著增强，且小鼠 存活率更高。 说明制备成纳米粒, 在不降低疗效的同时, 可显著降低阿霉素的毒副 作用。
