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1、RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤关键词：RNA琼脂糖电泳20120309 00 00来源:互联网点击次数38148一、实验目的 掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%-1.4% 的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的 条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量 时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的 1%琼脂糖凝胶即可.25S* rRNA （占80-85%） . 1SS5S植物RNA ItRNA及小分子RNA （占1
2、0-15%）I inRNA （占15%）.bbiQQ.Gom寡聚脱氧胸晋（Oli妙dT层析柱三、实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫 外透射检测仪等。琼脂糖,1XTAE电泳缓冲液，0。5pg/ml溴化乙锭(EB )10X 载样缓冲液.实验步骤(1)用IxTAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加IxTAE电泳缓冲液至液面覆 盖凝胶.(2 )在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4训于封口膜上。在实验台上再加入5皿IxTAE电泳缓冲液及1皿的10X载样缓冲液，混匀后;小%心加入 点样孔。(3 )打开电源开关，调节电压至100V,使RNA由负极向正极
3、电泳，约30min后将凝胶放入EB 染液中染色 5min，用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观3Krft?fA% DcnistUTiin! Afiamst Gel AfTtfalRItAdMl -|uKl RALhIhvviHl VZ KhARNA的变性琼脂糖凝胶检测试剂：（1）MOPS 缓冲液（10*）:0。4mol/L 吗啉代丙烷磺酸（MOPS ）（ Ph7。0），0。1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA.（2 ）上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0。4%二甲苯蓝。(3 )甲醛.（4）去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）一水
4、冲洗-乙醇干燥一-3%H2O2灌满室温放置10分钟0。1%DEPC水冲洗。操作:1） 将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。（2）配制琼脂糖凝胶。 称取0。5g琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉 内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。 待胶凉至6070 C,依次向其中加入9ml甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液 和0。5ul溴化乙锭，混合均匀。 灌制琼脂糖凝胶。（3）样品准备： 取DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂：10x MOPS缓冲 液2ul,甲醛3.5ul,甲酰胺（去离子）10ul , RNA样品4。5ul，混匀。 将离心管置于60C水浴中保10分钟，再置冰上2分钟. 向管中加入3ul上样染料，混匀。（4）上样。（5 ）电泳:电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7。5V/ml的电压下电泳。6）电泳结束后,在紫外灯下检查结果.
