实验报告不同因素对酶的影响

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1、实验报告专业 姓名 学号 日期 地点课程名称实验名称生物化学实验（甲）指导老师: 成绩：酶的基本性质实验一一底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）三、主要仪器设备（必填）五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理（必填）四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析（必填）.酶的基本性质底物专一性一、实验目的和要求 1. 了解酶的专一性。2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。3. 学会排除干扰因素，设计 酶学实验。二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能酶的高效性，酶催化的 反应（酶促反应）要比

2、相应的没有催化剂的反应快103-1017 倍。 酶催化作用的一个重要特 点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无 催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种： 1.相对专一性 一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2. 绝对专一性： 有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。 如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双 糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。3.立体异构专一性 有些酶只有作用于底物 的立体异构物中的一种，而对另

3、一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作 用于L-型的糖。本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。2Na0H +C=0)+2Cu(0H)2HCO23CuO2Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生 氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。NaC0+ 2H0CuSO + 2NaOH4（砖红色或黄色）+在分子结构上，淀粉几乎没有，而蔗糖、棉子糖全无半缩醛基，它们均无还原性，232（0H） + Na SO 还原糖（CHO or2242H 0 F的氧化产物因此它们2与Be

4、nedict试剂无呈色反应。淀粉被淀粉酶水解，产物为葡萄糖；蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Benedict试剂共热, 即产生红棕色Cu20沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。 三、实验材料与试剂1、实验材料蔗糖酶（样品IV）; 新鲜唾液（含唾液淀粉酶）;2、实验试剂蔗糖酶液 蔗 糖酶液（样品IV）加蒸馏水适当稀释，备用； 唾液淀粉酶液（学生自制）取唾液至25ml量筒中，用蒸馏水（稀释）到25ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50400倍，甚至更高；5%蔗糖（.）溶液；淀粉溶液（含%NaCl）；B

5、enedict试剂；四、实 验器材与仪器1漏斗，2脱脂棉花；3恒温水浴（37C, 100C）； 4量筒；5试管；6烧杯；7吸量管。 五、实验操作方法和步骤 检查试剂 取3支试管，按下表操作：试剂处理7-一1220.為富粉（0.式L）溶很（ml3典頁榕溶液（ml）3蒸谯水（ml）:3Benedict 试剂(ml223摇匀程沸水浴煮沸2血九记录迎察绪果注：1、检查目的：试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。淀粉酶的专一性 取三支试管，按下表操作：试刊处理0 嶺淀粉(0. 3%aCI ；溶澈(ml)蒸请水(ml)唾液淀粉醉液E?ncdict

6、 试剂(ml)汇录观痉结果注：可增加一组唾液淀粉酶液经100C加热3min处理后的样品对照组。蔗糖酶的专一性取三支试管，按下表操作:试管骗+:二30.拠淀粉(0. 3%NaCL )溶漲(ml)35%蔗擁溶液(ml)3姦诺水(ml)3蔗耀聲溶液(ml)111摇匀，置驚C水浴保温LOninBenedict 试剂(ml)222瑶匀，置沸朮浴君3m计记录观察结果注：可增加一组蔗糖酶液 经100C加热3min处理后的样品对照组。六、结果分析讨论 各试管观察结果依次是：（一）： 1号蓝绿色， 2号蓝色， 3号蓝色Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生 氧化还

7、原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。3只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄 糖，说明在不加酶时，淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。（1号试管是蓝绿色可能 是因为有少部分的淀粉水解）（二）：1号土黄色， 2号黄绿色， 3号蓝色加入唾液淀粉酶，1号试管底物是淀粉，所以很容易水解成葡萄糖，与Benedict试剂共热, 即产生红棕色Cu 0沉淀。所以1号颜色变化比较大。（2号可能是因为蔗糖在37C恒温水浴中也2 有少部分水解，所以颜色变化，但变化不明显。）总的来看可以看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化 活性，不能催化蔗糖水解，具有对淀粉的底物专一性。 3号是对照。（三）：1号蓝色， 2号红棕色，

8、3号蓝色加入蔗糖酶，2号试管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，与Benedict试剂共 热，即产生红棕色Cu 0沉淀。所以2号颜色变化比较大。（1号可能是因为淀粉在37C恒温水浴2 中也有部分水解，所以有颜色变化，但变化不明显。）从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解 有 催化作用，对淀粉无催化作用，具有对蔗糖的底物专一性。 3号是对照。七、思考题1观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验？每组各有何意义？蒸馏水有何用？ 第一组作为整个实验的空白对照组，检测 Benedict 试剂对实验结果的颜色有何影响，排除干扰 因素的存在。第二组作为检测淀粉酶的专一性实验组，第三组作为检测蔗糖酶的专一

9、性的实验组。 蒸 馏水作为每一个组中的空白对照，与组内其余两组进行对照。2将酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，观察有何结果？ 各试管都为蓝色，因为酶在煮沸过程中 已经变性，失去催化活性，故不能催化各自对应底物的 水解反应。3在此实验中，为什么要用淀粉%NaCl）溶液？NaCl的作用是什么？%NaCl中的Cl-是作为激活剂激活唾液淀粉酶的活性，使实验结果不至于因为唾液淀粉酶的活 性不足而导致不同。八、注意事项1.试管要干净，所有试剂加量准确，加好试剂后要摇匀。 2.使用试剂时不要人为 造成试剂间的互相污染；试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。以免实验结果的错 误。11影响酶活性的

10、因素一一激活剂和抑制剂一、实验目的和要求1. 了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。2. 学习检定激活剂和抑制剂影响酶促反应速度 的原理和方法。二、实验基本原理在酶促反应过程中，酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激 活剂；某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团（主要是指酶活性中 心上的一些基团）发生变化，因而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的 抑制剂。酶的激活剂种类：1、一些简单的无机离子，如Mg2+、Cl-等；2、一些中等大小的有机分子， 如抗坏血酸等也是激活剂，它们对某些含巯基的酶具有激活作用； 3、有些酶的催化作用易受某

11、 些抑制剂的影响，因而能除去抑制剂的物质也可称为激活剂，如EDTA能除去重金属，因而能解 除重金属对酶的抑制作用。4、具有蛋白质性质的大分子物质，这些激活剂是指可对某些无活性 的酶原起作用的酶。酶的抑制剂有许多种： 如重金属离子（Ag+、Hg2+、Pb2 +、Cu2 +等）、 CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。 少量的激活剂或抑 制剂就能影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，各种激 活剂对酶的作用是不同的。 本实验利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同颜色反应，定 性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活或抑制现象。淀粉经酶促水解为葡

12、萄糖的不同阶段的产物与 碘作用的颜色反应如下：无色糊稱一麦芽糖一葡葡糖不显毎不宜色不显芭（濃芭淀粉一紫苦糊梢 一红色糊梢显讎色 显婆芭 显虹色仍为爭糖本实验中，Cl-为唾液淀粉酶的激活剂；Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。 利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同的呈色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中 激活和抑制现象。淀粉+碘蓝色淀粉+淀粉一水解产物+碘颜色变化水解的程度是通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色之变化来判断的。三、实验材料与试剂1、实验材料 新鲜唾液2、实验试剂 唾液淀粉酶（学生自制）取唾液1 ml至25ml量筒中，用蒸馏水稀释至25ml，用棉花过滤备用。唾液稀释倍数因人而异，可稀释

13、50400倍， 甚至更高。%淀粉溶液%氯化钠溶液%硫酸铜溶液%硫酸钠溶液碘化钾-碘液四、实验器材与仪器1.试管及试管架2.量筒3.漏斗4.脱脂棉花5.点滴板6.吸量管7恒温水浴（37C）五、实验操 作方法和步骤取试管4支，按下表操作：试菅编节12340, 1霁淀粉落嵌513333n硫巌铜溶液(ml)n就化钠落液fml)11%硫酸钠洛澈(ml)1蒸麗水(ml)1唾液淀竹毎(ml1111貂匸恒是木浴保温1加m11I1记录观察踣果注意：找出准确的保温时间，是本实验是实验能否成功的关键步骤之一，唾液淀粉酶液浓度 可根据个人情况而定，通过37C水浴溶保温计时，反应时间最好在815min以内，只有确定准

14、确的保温时间才能进行实验。 （2） 加入酶液后，务必充分摇匀，保证酶与全部淀粉液接触的反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。（3）碘化钾-碘液不要过早地加到点滴板上，以免碘 液挥发，影响显色效果。六、结果分析讨论1号试管为蓝紫色，2号为浅黄色，3号为褐色，4号为浅褐色。试管 1 中颜色最深，说明 CuSO4 可以抑制淀粉酶的活性；试管 2 中颜色最浅，基本呈碘色， 故淀粉酶活性最高，说明 NaCl 可以激活淀粉酶的活性；试管 3、4 中颜色基本 一致，且深浅 居于试管1、2之间，淀粉酶活性一般，说明Na+、SO 4 2-对淀粉酶活性都没有 影响。故总体 上看，可以得出Cl -是唾液淀粉酶的激活剂，Cu 2+是唾液淀粉酶的抑制剂。七、思考题1.激活剂可分哪几类？本实验中NaCl、硫酸铜是属于哪种类型？ 激活剂可分为：简单无机离子、中等大小有机分子、能除去抑制剂的物质、具有蛋白质性质的大 分子物质等。NaCl属于简单无机离子；CuSO属于重金属抑制剂。42. 本实验中， 1 ， 2 ， 3 ， 4管各有何用意？为什么要设计第3管和第4管？1 管可观察抑制剂对反应影响的现象， 2管可观察激活剂对反应影响的现象，第3管可以