GUS酶活性定量检测——Gloma检测仪

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1、Gloamx Jr多功能检测仪用于GUS酶活性检测试验GUS酶活性:每min水解4-MUG成lnmol的4-MU的酶量为一个单位;GUS的表达活性 以每 mg 总蛋白的酶活力表示: 4-MU nmol/mg/minGlomax 检测仪模块: UV(365nm/460nm) 标准曲线的制定:母液:用4-MU标准品配制成1mM的溶液工作液:采用依次倍比稀释 将1mM的4-MU用反应终止液(0.2M的Na2CO3) 稀释为200nM的工作液1,摇匀后,取部分工作液1将其稀释为100nM的工作液2,摇匀后,取部分工作液2将其稀释为50nM的工作液3,摇匀后,取 部分工作液3将其稀释为25nM的工作液4

2、,摇匀后,取部分工作液4将其稀释为1nM的工作液5; 用工作液1、2、3、4、5来制定标准曲线。浓度012550100200RFU01.33625.252.4298.24211.4未知样品的检测:1组织样本mg (如叶片)与GUS提取缓冲液ul比例为20mg: 250|J 1;2. 获得的 GUS 粗酶液先测总蛋白值;3. GUS粗酶液与4-MUG (浓度)的体积比是:20p 1: 180p 1,保育时间为:20min;4. 取反应后的样本10p 1与90p 1的反应终止液混合后,上样检测。GUS 提取 Buffer: 0.05mo1/L Na2EDTA, 0.1% Triton-X-100, ,01% Sarcosy1大致的操作过程:取预定的组织样本加提取Buffer后液氮研磨后收集匀浆,然后在4C下、 12000rpm离心10min,收集上清,取部分上清加预热的反应Buffer (提取buffer中加入 1mmo1/L 4-MUG), 37C下保育后取反应后溶液加反应终止液(0.2M的Na2CO3),然后上样 检测。

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