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1、细胞凋亡磷脂酰丝氨酸外翻分析关键词：磷脂酰丝氨酸磷脂 化合物磷酸 试剂细胞 标准物质 北京标准 物质网磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)又称丝氢酸磷脂，二酰甘油酰磷酸 丝氨酸，是一类普遍存在的磷脂，磷脂化合物中的磷酸甘油酯类，是细胞膜组分 之一，与一系列的膜功能有关。在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂 质双层的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表 面，暴露在细胞外环境中。磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法)是一种分子量为3536kD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与PS有高度亲和力，它通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨 酸与凋亡早期细
2、胞的胞膜结合。因此Annexin-V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏 指标之一。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记，以标记了的 Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发 生。碘化丙啶(PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期 的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI 匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如PI有抗染性，坏死细胞则不能。 细胞膜有损伤的细胞的DNA可被PI着染产生红色荧光，而细胞膜保持完好的细 胞则不会有
3、红色荧光产生。因此，在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有红色荧 光信号。正常活细胞与此相似。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示 活细胞，为(FITC-/PI-)；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为(FITC+/ PH+)： 而右下象限为凋亡细胞，显现(FITC+ / PI-)。Annexin-V可作为FACS(流式细胞分选)方法筛选凋亡细胞的基础。由于融合 蛋白Annexin-V-EGFP，EGFP与PS的结合比例为1： 1，还可进行定量检测。除 此之外，还提供生物素偶联的Annexin V，可通过常用的酶联显色反应来检测。另外，MACS公司将磁珠包被Annexin V，可采用磁分选方法筛选凋亡细胞
