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1、Image Lab中文操作手册A-SoftImag*VersionBloRad Laboratfiries. Inc. 2000 Alfred N&WDweHwtes,CA 9457 W09 Bid-Radi mborstofies. he.Fast and ReliableImage Lab全自动图像获取和分析软件用于M olecular Imager ChemiDoc XRS+、Molecular Imager Gel Doc XR+ 和 Criterion Stain FreeTM 成像系统，可应用于凝胶电泳和转印膜的数字成像和分析，而自动化的工作流程能加速图像获取步骤及参数优化，并针对
2、调整好的凝胶或转印膜影像进行系统性分析，进而得到所需的分析数据结果。一、软件操作界面主窗口工具列分析工具列状态列启动精灵程序桌面1. 主窗口工具列D .园H O .甌. New Protocol Openupshot/档案理ijrrdcPedjAnalysis Table Lane Profile Standard Curve一匚“r t丿分析数据 ResultsData2. 显示工具列Tutorials Start Page图像信息 转换3D成模式像 改变图像色彩 亮度明暗度转换 全窗口大小 缩小放大 图像显示设定3.分析工具列(1 )图像工具(Image Tools )( 2)泳道及条带工
3、具( Lane and Band Tools)( 3)分子量工具( MW Molecular Weight)( 4)自动定量工具( Quantity Tools)( 5)注释工具( Annotation Tools)( 6)手动定量工具( Volume Tools)二使用Image Lab软件进行化学发光图像获取流程1.建立图像获取程序：在 凝 胶 成 像 ( Gel Imaging ) 对 话 框 中 选 择 Chemi ( 化 学 发 光 ) 应 用 程 序在成像区域(Imaging Area )对话框中的下拉式选单中选择合适的样品大小(非必需，可之后通过 Position Gel 选择)
4、(2) 选择成像曝光( Image Exposure )方法，可以人为评估曝光时间并以手动设定( ManualExposure )，或是使用信号累积模式(Signal Accumulation Mode，SAM )来进行操作。在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光的确定，因为您想获得一个充分 利用了相机大的动态范围的图像。过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被 识别；过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和(也就是说，超出了相机准确报告信号的 能力)。如果这是您第一次用ChemiDoc XRS+分析化学发光样品，您需要在使用手控或信 号累积模式(SAM )之前决定一个合适的
5、成像时间框架。获得这个信息的最好的方式是取 得一个相对短的手工曝光并利用Image Lab里的工具估计最适的曝光时间。2. 手动曝光(1) 选择手动设定曝光时间( Manually set exposuretime )并在读秒框中输入10秒。(2) 选择 Highlight saturated pixels 。(3) 把胶置于透射箱的中心位置。在程序窗口中点击p5itioncel按钮。(5) 观察显示器中样品的实时图像，打开照胶系统的门并移动样品直到位于视野的中心区 域。可利用照相机的变焦滑板1调节成像区域的大小。ftun PfQ；0Ol选择按钮获得你的第一个图像。若所需的图像出现在计算机的显
6、示器上，确认图像中是否包含红色的饱和区域。若有饱和区域存在，请重新以较短的曝光时间来获取图像。若无饱和区域存在，则可移动鼠标置于X: 290 Y: 513 巾怕巴 1994 Int最暗的条带之上，在较低的右下角 Image Lab 窗 口中观察信号的强度数值。如图中显示强度为 1994，照相机能记录的最大值的 32 分之一 (最大值为 65,535)。用你的最初的 10 秒曝光再乘以 30 就可在照相机的最大动态范围附 近成像你的样品。若你只需针对单一图像的成像时间进行评估，可直接在手动曝光区域中输 入 300 。1 he 5。打*占氓 whEI arquHFe rheum upthe sig
7、nalFirst iEdges limeTotal number of mages.Last image lirne (secli：-j S-iyrul ALuEci：uldili(9n3. 信 号 累 积 模 式 ( Signal Accumulation Mode，SAM)如果预估方法不足以精确满足您的目的，请选择SAM按钮，然后按Setup按钮。一个新的对话框会跳出来，其包含有可输入细分的成像时间的领域。.Signal Accumulabon SeiupThewillthe pmiQS and &um upTotal numbe r of images.FivsC mnia-gc lim
8、e Hix);J i 1iii i n刚Ekd曲底QIasi已 rum&在这个例子中，我们已经输入了小于和大于我们原始的 300秒曝光估计时间，因为我们有理由相信准确的成像时间将会在这些时间之中。我们总共想要 5 个成像，推测其中一个将会与最佳成像极为接近。一个您的SAM设定的图像显示出现在对话框里。而SAM设定的影像显示对话窗口，在您选择E 按钮后再点选恥皿z按钮，窗口会显示相关进度图标来说明整体图像获取的时间。在250秒获取第一个图像，同时一个小的缩略图会出现在窗口的下方，以此类推整个过程将持续到获取所有的图像。就像前面做过的那样，通过移动鼠标在图像上，您能判定强度值。您也可以通过使用位于
9、程序窗口左边的图像转换窗口( Image Transform )中的调节划片改变图像的表观。在SAM 程序中的任何地方您都能通过点击缩略图查看图像。若确定调整到符合您要求的图像擬賦丫 Innag-e时，点击按钮舍弃其它不适合的图像来完成获取图像的程序。也可在SAM获取图像的过程中或之后来保存需要的所有图像，直接点选右键单点缩图窗口内的图像即可进行存 盘保留下来。在决定获取图像的数量时，记住增加 SAM 图像会导致背景信号的平均。当较 多的图像被获得时，在背景强度水平附近的弱的信号将会变得难以识别。如果辨别最弱的信 号很重要，我们推荐在合适的时间下获得单一的成像。三、建立全自动图像获取及分析程序
10、Creating Protocols )1. 启动分析精灵窗口 - STEP 1. GEL IMAGING(1 )按照应用(NucleicAcid/Protein/Blots )选择相关的程序(Choose an application )2)选择成像区域( Choose the ImagingArea)Application1 Nuclei匚 Acid GelsLProtein Gels1 Coomassie Blue1 BlotsCopper Stain1 Custom1 Zinc StainFlamingoSilver StainCoomassie Fluor Orange5YPRO R
11、uby3)选择成像曝光时间( Choose Image Exposure Time)(4 )is我alffl( Choose Disp-ay options - High-ighi sacraied pixe-s and -mage co-or)2置畫(Ana_yze -mage ) i STEP 2 DETECT LANES AND BANDS菇DETECT LANES AND BANDSS瞬嬉(Low Band Deocion Sens 三 SM Low sensiiMiy H 25rHigh Band Deieciion SensiiMiy ( High sensiiMiy H 75 )
12、毘皿 Gffl別 曲篩。(Ana_yzeMO_ecu酉 Weight ) STEP 3 ANALYZE MOLECULARWE0HTfflAna-yze Mo-ecu-ar Weighi sehingss刪劈曲( Mo-ecu-ar Weighi standard ) 耳血 BeRads秣列蓊( s )sra国划。味滉、8 艸。4mSMEE常(Report Settings ) ! STEP 4 SPEC-FY CONTENT OF REPORTS5ffirM( ResEsroverview ) WRDIf( Report )Report(1 )数据显示信息(Displaying Data )
13、Report謹HAnalysis TableAnalysis Table Lane Profile Standard Curx2 )分析表格设定( Analysis Table Options )曙壓颤elBand No.Band LabelMol. Wt. (KDa)Relative FrontVolume (Int)Abs. Quant.Rel. Quant.Band %Lane %1140.00.313230,0409.00.558.93.5296.90.403243,1209.50.589.43.7：335.40.650258,00010.10.6210.04.0422.107661,623,2406373.9163.124.950.975218,4608.80.538.53.3Lane 2Band No.Band LabelMol. Wt. (KDa)Relative FrontVolume (Int)Abs. Quant.Rel. Quant.Band %Lane %1134.70.323318,60012
