益生菌的检测方法

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1、益生菌的检测方法 益生菌的检测方法 一：主题内容与适用范围 本标准规定了益生菌的检测方法。 二：原理 细菌经过一定倍数的稀释后，能在典型的培养基上培养长成，典型的菌落，通过计数，可以得到每1ml本产品中活菌数的量。 三：设备和器材 分析天平 100g架盘天平 震荡器 恒温培养箱 高压灭菌锅 超净工作台 平皿 试管 吸管 三角瓶 酒精灯 试管架 移液枪 四：试剂与溶液 0.9灭菌生理盐水，营养琼脂，纯化水。 五：操作步骤： 1：采样 采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具。采样后应尽快检验，否则将样品放在低温干燥处保存。 2：试样的稀释及培养 1.1准确称取

2、本产品1.0g，加入内装99ml的灭菌生理盐水和几棵玻璃珠的三角瓶中，在震荡器上以震荡30min，使样品充分混匀，制成1：100的均匀稀释液。 1.2吸取上述的稀释液1ml，加入装有 9ml无菌生理盐水的试管中，振荡摇匀，制成1：1000稀释液。 1.3按1.2操作至样品溶液稀释到1*10-6备用。每一次操作必须用无菌吸管，吸管不可重复使用。 1.4准确吸取上述1*10-6样品溶液0.1ml，接种在事先制成的营养琼脂平板培养基上，再用无菌接种环在平板上涂抹均匀。做3个平行样和一个空白对照样。将涂抹好的平板放与超净工做台上30分钟，使菌液渗透于培养基内，然后将平板倒置，在37培养箱内培养24小时

3、至长出典型菌落即可计数。 2：菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必需时借助放大镜检查，以防遗漏。在计数出各平板菌数后，求出同一稀释级的平板的平均数。 3：菌落计数的报告 以三个重复的菌落数相差不悬殊，每个平皿菌落数在30-300之间来确定此操作的准确性，否则需要重新操作。最终菌落总数取三个平皿中的菌落总数的平均数。以上均在无菌条件下操作。 4：稀释度的选择 4.1 应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。 4.2 如果有两个稀释度，其生长的菌落数都在30-300之间，视两者的比值来确定，如果其比值小于2，应报告其平均数；如果小于2，则报告其中较小的数字。 4

4、.3 如果所有的稀释度平均菌落数均大于300，则应按照稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 4.4如果所有的稀释度平均菌落数均小于30，则应按照稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 4.5 如所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。 4.6 如所有稀释度平均菌落数均不在30-300之间，其中一大部分大于300或小于30时，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 5：结果报告 菌落在100以内时，按其实有数报告；大于100时，采用两位有效数字，其后面数值，以四舍五入的方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可采用10的指数来表示。 六：计算公式 X=A10B 其中： X-每毫升样品中益生菌落数 耐酸试验：你可以模拟机体内环境。控制一定的温度和酸度，让菌液在水浴中作用一定时间，检测前后的菌落数。 可作抑菌、杀菌试验。和药敏试验和消毒剂的试验差不多。 A-最终计数的菌落总数 B-稀释倍数