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1、DNA重组技术的基本工具一、单项选择题1下列有关基因工程诞生的说法，不正确的是 ()A基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的B工具酶和载体的发现使基因工程的实施成为可能C遗传密码的破译为基因的分离和合成提供了理论依据D基因工程必须在同物种间进行答案：D2下列有关下图所示的黏性末端的说法，错误的是()A甲、乙、丙黏性末端分别是由不同的限制酶切割产生的B甲、乙具有相同的黏性末端，可形成重组DNA分子，但甲、丙之间不能CDNA连接酶的作用位点是b处D切割产生甲的限制酶不能识别由甲、乙黏性末端形成的重组DNA分子片段解析：选C。据图可知，切割形成甲、乙、丙黏性末端的限制酶识
2、别序列与切割位点分别是GAATTC(在G与A之间切割)、CAATTG(在C与A之间切割)、CTTAAG(在C与T之间切割)，即甲、乙、丙是由不同的限制酶切割产生的，A正确。甲、乙的黏性末端互补，所以甲、乙可以形成重组DNA分子；甲、丙的黏性末端不互补，所以甲、丙无法形成重组DNA分子，B正确。DNA连接酶可以恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，而b处是氢键，C错误。甲、乙黏性末端形成的重组DNA分子片段为，其中没有切割产生甲的限制酶的识别序列及酶切位点，所以切割产生甲的限制酶不能识别由甲、乙黏性末端形成的重组DNA分子片段，D正确。3下图所示为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，
3、图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是()ABC D解析：选C。图示中是酶切割DNA分子双链产生黏性末端的过程，用到的酶是限制性核酸内切酶，是黏性末端连接的过程，用到的酶是DNA连接酶，是DNA分子解旋的过程，要用解旋酶，是DNA分子复制时子链的形成过程，需要DNA聚合酶。4质粒是基因工程中最常用的载体，其主要特点是()能自主复制不能自主复制结构简单是蛋白质是环状RNA是环状DNA能“友好”地“借居”A BC D解析：选C。质粒存在于细菌和酵母菌等微生物中，是一种很小的、独立于拟核之外的环状DNA分子，上面有标记基因，便于在受体细胞中检测。质粒在受体细
4、胞中能“友好”地“借居”，并能随受体细胞DNA的复制而复制，能进行目的基因的扩增和表达。5(2019衡水高二检测)一环状DNA分子，设其长度为1，限制酶A在其上的切点位于0.0处；限制酶B在其上的切点位于0.3处；限制酶C的切点未知，但C单独切或与A或与B同时切的结果如下表，请确定C在该环状DNA分子上的切点应位于图中的哪处()C单独切长度为0.8和0.2的两个片段C与A同时切长度为2个0.2和1个0.6的片段C与B同时切长度为2个0.1和1个0.8的片段A0.2和0.4处 B0.4和0.6处C0.5和0.7处 D0.6和0.9处解析：选A。据图表信息可知：限制酶C单独切割环状DNA分子，获得
5、长度为0.8和0.2的两个片段，可推知限制酶C有2个切割位点。限制酶A只有1个切割位点，且位于0.0处，又知限制酶C与限制酶A同时切割时，获得2个0.2和1个0.6的片段，因此以限制酶A切割点向左或向右推测，可得知限制酶C的切割位点可能为0.2、0.4或0.6、0.8处。再根据限制酶C与限制酶B同时切割时，获得2个0.1和1个0.8片段，可推知限制酶C的切割位点可能为0.1、0.2或0.4、0.5处。综上分析，只有0.2和0.4两处与之前推测相吻合，选项A正确。6(2019河北巨鹿高二期中)下图表示某种质粒和人的胰岛素基因，其中a表示标记基因，b表示胰岛素基因，E1表示某限制酶的酶切位点，现用
6、该种限制酶分别切割质粒和胰岛素基因，后用DNA连接酶连接切割后的质粒和胰岛素基因，下列选项中不可能出现的是()答案：C7基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶的识别序列和切点是GGATCC，限制酶的识别序列和切点是GATC。根据下图判断下列操作正确的是()A目的基因和质粒均用限制酶切割B目的基因和质粒均用限制酶切割C质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割D质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割解析：选D。解此题要明确目的基因要切下，质粒只要切开。限制酶的识别序列和切点是GATC，单独使用时可以把目的基因和质粒都切断；限制酶的识别序列和切点是GGATCC，只
7、能把它们切开，单独使用时不能切断，所以目的基因用限制酶切割，质粒用限制酶切割。用限制酶切割质粒时破坏了Gene，所以只能用Gene作为标记基因。8(2019江苏扬州中学质量检测)基因工程利用某目的基因(图甲)和P1噬菌体载体(图乙)构建重组DNA。限制性核酸内切酶Bgl、EcoR和Sau3A的酶切位点分别如图所示。下列分析错误的是()A构建重组DNA时，可用Bgl和Sau3A切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体B构建重组DNA时，可用EcoR和Sau3A切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体C图乙中的P1噬菌体载体只用EcoR切割后，含有两个游离的磷酸基团D用EcoR切割目的基因所在片段和P1噬
8、菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA解析：选D。用Bgl 和Sau3A 切割目的基因和P1噬菌体载体会形成相同的黏性末端，因此它们可构成重组DNA，A正确；由于Sau3A的切割位点在EcoR的两个酶切位点之间，因此，用EcoR和Sau3A切割目的基因和P1噬菌体载体会形成相同的黏性末端，因此它们可构成重组DNA，B正确；P1噬菌体载体为环状DNA，其上只含有一个EcoR的酶切位点，因此用EcoR切割后，该环状DNA分子变为双链DNA分子，因每条链各含有一个游离的磷酸基团，故切割后含有两个游离的磷酸基团，C正确；由图甲可知，用EcoR切割目的基因所在片段和P1噬菌体后形成的黏性
9、末端相同，可任意连接，不止产生一种重组DNA，D错误。二、多项选择题9某线性DNA分子含有3 000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。下列有关说法正确的是()a酶切割产物(bp)b酶再次切割产物(bp)1 600；1 100；300800；300A在该DNA分子中，a酶与b酶的识别序列都是2个Ba酶与b酶切出的黏性末端不能相互连接Ca酶与b酶切断的化学键不同D用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，序列会明显增多解析：选AD。根据题图分析可知在该DNA分子中，
10、a酶与b酶的识别序列都是2个，A正确；图中显示两个酶的识别序列不同，但是切割后露出的黏性末端相同，a酶与b酶切出的黏性末端可以相互连接，B错误；a酶与b酶切断的化学键都是磷酸二酯键，C错误；a酶和b酶切割后形成的黏性末端相同，在DNA连接酶的作用下可连接形成。所以用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，所得DNA分子中序列会明显增多，D正确。10(2019扬州高二模拟)下图为某种质粒的简图，小箭头所指分别为限制酶EcoR、BamH的酶切位点，P为转录的启动部位。已知目的基因的两端有EcoR、BamH的酶切位点，受体细胞为无任何抗药性的原核细胞。下列叙述正确的是
11、()A将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoR酶切，在DNA连接酶的作用下，由两个DNA片段之间连接形成的产物有三种BDNA连接酶的作用是将酶切后得到的黏性末端连接起来，形成一个重组质粒时形成两个磷酸二酯键C为了防止目的基因反向粘连和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoR和BamHD能在含青霉素的培养基中生长的受体细胞表明该目的基因已成功导入该细胞解析：选AC。如果将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoR酶切，那么酶切后二者的黏性末端相同，在DNA连接酶的作用下，由两个DNA片段之间连接形成的产物有三种，只有一种符合基因工程的需求；DNA连接酶的作用是将酶切后的目的基因和质粒的黏性末端连
12、接起来形成重组质粒，该过程形成4个磷酸二酯键；为了防止目的基因和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoR和BamH，这样切割后得到的DNA片段两侧的黏性末端不同；由于受体细胞为无任何抗药性的原核细胞，因此能在含青霉素的培养基中生长，可能是受体细胞成功导入了目的基因，也可能是只导入了不含目的基因的载体。三、非选择题11下图表示两种限制酶识别DNA分子的特定序列，并在特定位点对DNA分子进行切割的示意图，请回答以下问题：(1)图中甲和乙代表_。(2)EcoR、Hpa代表_。(3)图中甲和乙经过相应操作均形成两个片段，切口的类型分别为_、_。甲中限制酶的切点是_之间，乙中限制酶的切点是_之间。(4)
13、由图解可以看出，限制酶的作用特点是_。(5)如果甲中G碱基发生基因突变，可能发生的情况是_。解析：(1)由图示看出，甲和乙代表由脱氧核苷酸构成的不同的DNA片段。(2)EcoR和Hpa能切割DNA分子，说明它们是限制酶。(3)甲中切点在G、A之间，切口在识别序列中轴线两侧，形成黏性末端；乙中切点在A、T之间，切口在识别序列中轴线处，形成平末端。(4)(5)限制酶能识别DNA分子的特定核苷酸序列，并从特定位点切割DNA分子。当特定核苷酸序列变化后，就不能被相应限制酶识别。答案：(1)有特定脱氧核苷酸序列的DNA片段(2)两种不同的限制酶(3)黏性末端平末端G、AA、T(4)能识别双链DNA分子的特定脱氧核苷酸序列，并从特定的位点将DNA分子切开(5)限制酶不能识别切割位点12根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)限制酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_和_。(2)质粒载体用限制酶X(识别的序列由6个核苷酸组成)切割后产生的片段如下：AATTCG GCTTAA该酶识别的序列为_，切割的部位是_。(3)为使切割后的载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用限制酶X切割外，还可用限制酶Y切割，两种酶共同的特点是_。(4)按其来源不同，基因工程中所使用的D
