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1、吸收试验操作规程SXYJ-GZ-02081 目的 间接判定受检红细胞上的血型抗原及血清中存在的同种和自身抗体。2 适用范围 常用于 ABO 亚型的鉴定，全凝集红细胞的定型以及某种原因引起的红细胞血型 减弱时的定型等。亦用于低浓度抗体的浓缩、抗体的鉴别、自身抗体的吸收、1 份血清中 几种抗体的分离及鉴定等。3 职责 检测者依据此程序进行吸收试验操作。4 材料与设备 -A、-B 血清；含有与待吸收抗体相同抗原的红细胞； 0.9%无菌生理盐水； 一次性使用滴管、试管；KUBOTA KA-2200型离心机、LDZ4-0.8型离心机；S648型电热恒 温水温箱（37C）、HH.W21.600型电热恒温水
2、温箱（56C）； 4C冰箱。5 操作方法5.1 待检标本的准备及要求5.1.1 待检标本准备两管血，一管用 EDTA 抗凝，另一管不抗凝5.1.2 血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离出血清5.1.3 细胞：从待检的抗凝标本中吸出一滴红细胞，用 0.9%生理盐水充分洗涤三遍，配制 成 2 红细胞悬液5.2 A、 B 亚型的吸收实验 用于间接证明红细胞上的血型抗原及其强度。5.2.1 先用盐水至少洗涤 1ml 受检者红细胞及 1ml 相应的对照红细胞三次，最后一次洗涤 后压积 3000rpm 5 分钟，尽量移除上清液5.2.2 修正液的制备：5.2.2.1 倍量稀释抗血清（SXY
3、J-GZ-0217）。5.2.2.2 在每一稀释度的 0.1ml 抗血清中加入 0.1ml 相应 2%红细胞悬液。5.2.2.3 离心，选择凝集强度为 4+的最高稀释度为抗血清的稀释倍数，制备该抗血清的修正 液。5.2.3 在洗涤后的压积红细胞中加入等量的抗 A 修正液（如怀疑是弱 A 变异型）或抗 B 修 正液（如怀疑是弱 B 变异型），对照管与之相同5.2.4 充分混匀后，放置4C冰箱中吸收lh,并间断混匀5.2.5 离心混合物，移除上层抗血清，转入一个干净试管内为该管的吸收液5.3 温抗体自身吸收 有自身温抗体的患者在血循环中，红细胞可被自身抗体所包被，血清 中也可能还存在这种游离抗体，
4、有的甚至很多。有温抗体患者的红细胞在试剂血清中发生凝 集，甚至在盐水介质中自凝，干扰血型鉴定、抗体检出和配血等实验。5.3.1 热处理温抗体自身吸收法：取1份洗涤过的压积红细胞，加2份生理盐水一45C水 浴中放置10分钟，并频频加以摇动一使用预热过的离心杯3400转/分，离心13 分钟一分离上清液既为放散液，细胞立即用生理盐水洗涤 3 次（取少许配成 2%的红 细胞悬液，与原细胞对照做直接抗人球蛋白试验，结果满意为止，否则重新放散）， 压实，分成1-3份（视细胞量而定）一取其中一份加入等体积血清，混匀一37C吸 收30，一3400转/分，离心1-3分钟一分离吸收后血清，与自身热处理后细胞反应
5、结果满意为止，否则需重复吸收。5.3.2 酶处理细胞吸收法：蛋白酶对红细胞表面作处理后，可增强对自身抗体的吸收能力。 取1份洗涤过的压积红细胞，加入等量1%的木瓜酶溶液，充分混匀，置37C孵育10/一3400转/分，离心1-3分钟一弃上清液一用生理盐水洗涤3次，压实，分成2-3 份（视细胞量而定）一取其中一份加入等体积血清，混匀一37C吸收15 /30 / 3400 转/分，离心 1-3 分钟一分离吸收后血清，与自身酶处理后细胞反应结果满意为 止，否则需重复吸收。5.4 冷自身抗体的吸收 冷自身抗体干扰 ABO 血型鉴定，干扰配血，掩盖血清中有临床意义 的同种抗体的存在。因此要用自身红细胞吸收
6、除去血清中的自身抗体，提供合适的血清用于 ABO 反定型、配血试验和抗体检测。5.4.1标本采集：采1份抗凝标本，置37C孵育，防止冷抗体吸收到红胞上；另采一份不 抗凝标本，放置4C冰箱中，让红细胞充分吸收冷自身抗体，1小时后在4C左右的 环境中分离血清。5.4.2 吸收方法：取温育10分钟以上的抗凝血样，用37C生理盐水洗3次，压积红细胞一 分置 3 支试管中，每支约 1ml 一 将 2ml 待检血清加入第一管细胞中 一 混匀 一 置 4C吸收30-60分钟（约10分钟摇动一次，吸收充分）一 1000g离心5分钟一取上 清液，检测如仍有自身凝集，做第二次吸收。将上清移入第二支试管 一 混匀， 4C 吸收 30 分钟，如仍有自身凝集，做第三次吸收。6 注意事项6.1 红细胞经洗涤压积，盐水应尽量去除，以免抗血清被稀释。6.2 吸收试验所用红细胞尽可能用新鲜细胞。6.3 冷抗体吸收过程中要防止温度上升，冷抗体被释放。6.4 温抗体吸收中，也要防止环境温度过高，引起抗体释放。7 依据 全国临床检验操作规程（第 3 版）中华人民共和国卫生部医政司
